楊巧薇， 倪環(huán)宇， 吳 麗，梅洪梁1，

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)鼓樓臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210000； 2.南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 南京 210008； 3.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210023； 4.南京臨床藥學(xué)中心，江蘇 南京 210008)

糖尿病是一種有著持續(xù)高血糖癥狀的代謝性疾病[1]。機(jī)體的慢性高血糖狀態(tài)是導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能異常的重要因素，最終可能導(dǎo)致血管病變，引起眼、腎臟、神經(jīng)和心血管系統(tǒng)的并發(fā)癥[2]，給患者造成身體和經(jīng)濟(jì)上的負(fù)擔(dān)，因此了解血管病變發(fā)生的機(jī)制及時(shí)防治糖尿病血管病變是改善糖尿病并發(fā)癥的有效途徑。血管內(nèi)皮細(xì)胞(vasuclar endothelial cell，VEC)是心血管系統(tǒng)的第一層屏障[3]，在血管病變中起著關(guān)鍵作用。血糖濃度過高誘導(dǎo)VEC發(fā)生氧化應(yīng)激，使其分泌的細(xì)胞因子水平失調(diào)，引起細(xì)胞損傷和組織病變[4]。細(xì)胞內(nèi)低水平的自噬可以降解部分氧化應(yīng)激產(chǎn)生的代謝廢物和受損的細(xì)胞器。而高血糖狀態(tài)下，內(nèi)皮細(xì)胞的自噬水平無(wú)法降解持續(xù)產(chǎn)生的多余代謝廢物，過量活性氧累積、炎癥體激活，多種細(xì)胞器功能受損，最終結(jié)果即是細(xì)胞死亡，血管病變開始發(fā)生。因此，靶向自噬治療以減輕糖尿病血管病變有重要意義。

香菇多糖(lentinan，LNT)是從中藥香菇中提取的活性成分，符合糖尿病血管病變的治療法則。有研究顯示LNT能調(diào)控自噬[5]，減輕活性氧(reactive oxygen species，ROS)和過量一氧化氮(nitric oxide，NO)對(duì)膈肌線粒體的損傷[6]。

但目前尚未見LNT對(duì)VEC保護(hù)作用的相關(guān)研究?；诖耍狙芯恳愿咛?high concentration of glucose，HG)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)制備糖尿病狀態(tài)下VEC損傷的病理模型[7]，研究在HG損傷條件下LNT對(duì)HUVEC的保護(hù)作用以及相關(guān)機(jī)制，為糖尿病血管病變的防治提供新思路。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞HUVEC購(gòu)自江蘇恩莫阿賽生物技術(shù)有限公司。

1.2 藥物純度98%的LNT粉末購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司(批號(hào)SL8730)。

1.3 試劑香菇多糖粉末(純度98%，北京索萊寶科技有限公司，貨號(hào)：SL8730)；純度50%的無(wú)菌葡萄糖注射液(北京雷根生物技術(shù)有限公司，批號(hào)0615A20)；DMEM無(wú)糖培養(yǎng)液、DMEM高糖培養(yǎng)液、胎牛血清(FBS)、胰酶、PBS(美國(guó)Gibco公司，批號(hào)分別為8120075、8114146、1619679、2186956、8120233)；BCA試劑盒、ROS檢測(cè)試劑盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)試劑盒、丙二醛(malondialdehyde，MDA)試劑盒、SDS-PAGE凝膠試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為120219200629、213620200912、102620201202、073120201204、PA667)；TUNEL試劑盒(美國(guó)Everbright公司，批號(hào)323D0101)；兔源GAPDH抗體、兔源誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)抗體、兔源T-p38 MAPK抗體(武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，批號(hào)00074988、00085538、00076424)；兔源p-p38 MAPK抗體(美國(guó)Affinity公司，批號(hào)79d6101)；辣根過氧化物(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗(英國(guó)Abcam公司，批號(hào)GR313248-1)；CCK-8試劑盒(上海翌圣生物科技有限公司，批號(hào)C0001261)。

1.4 儀器MCO-15AC型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(日本Sanyo公司)；Synergy H1型多功能微孔板檢測(cè)儀(美國(guó)BioTek公司)；TDZ4-WS臺(tái)式低速離心機(jī)(中國(guó)湘儀集團(tuán))；SW-CJ-1F型超凈工作臺(tái)(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)；微孔板恒溫振蕩器(杭州奧盛儀器有限公司)；熒光倒置顯微鏡(德國(guó)Carl Zeiss公司)；307352型電泳儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)(美國(guó)Bio-Rad公司),Thermo NanoDrop One/One c超微量紫外分光光度計(jì),ABI7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

1.5 細(xì)胞培養(yǎng)在37 ℃、5% CO2條件下應(yīng)用DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)HUVEC，培養(yǎng)基中含10% FBS、100 kU·L-1青霉素、100 mg·L-1鏈霉素。每隔1～2 d換液，實(shí)驗(yàn)采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞(融合度70%～80%)進(jìn)行。

1.6 藥物工作液的配制

1.6.1LNT工作液 取LNT 20 mg，溶解于8 mL DMEM無(wú)糖培養(yǎng)基配制成濃度為25 g·L-1的母液，于4 ℃下保存；使用前，用DMEM無(wú)糖培養(yǎng)基稀釋至相應(yīng)濃度的工作液。

1.6.2HG溶液的配制 取2.592 mL葡萄糖溶液，稀釋于25 mL無(wú)糖DMEM培養(yǎng)基中，配制成濃度為240 mmol·L-1的HG母液，于4 ℃下保存，使用時(shí)按需用DMEM無(wú)糖培養(yǎng)基稀釋至相應(yīng)濃度的工作液。

1.7 CCK-8法檢測(cè)HUVEC活力

1.7.1HG對(duì)HUVEC活力的影響 取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HUVEC，胰酶消化后以含F(xiàn)BS的高糖DMEM培養(yǎng)基制備細(xì)胞懸液，將細(xì)胞以每孔約5 000個(gè)接種于96孔板，每孔細(xì)胞懸液體積為100 μL。HUVEC培養(yǎng)8～12 h貼壁后，隨機(jī)分為空白對(duì)照組和HG不同濃度處理組(40、80、120、160 mmol·L-1)，再設(shè)置一組添加DMEM培養(yǎng)基，不含細(xì)胞的A0組，每組重復(fù)6個(gè)孔。棄去原先孔板中的培養(yǎng)基，無(wú)菌PBS洗滌后，各組加入含不同濃度HG且無(wú)FBS的DMEM培養(yǎng)基，空白對(duì)照組和A0組加入無(wú)糖無(wú)FBS的DMEM培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，棄去上清液，每孔加入含10%CCK-8的DMEM單培100 μL。2 h后應(yīng)用酶標(biāo)儀于波長(zhǎng)450 nm處檢測(cè)光密度(OD值)，將空白對(duì)照組的OD值設(shè)置為細(xì)胞活力100%，計(jì)算各組的相對(duì)細(xì)胞活力。實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次，取平均值。

1.7.2LNT對(duì)HUVEC活力的影響 細(xì)胞培養(yǎng)和種板方法同上，設(shè)置空白對(duì)照組和LNT不同質(zhì)量濃度處理組(50、100、200、400、800 mg·L-1)，以及A0組(含培養(yǎng)基但不含細(xì)胞)加入LNT后培養(yǎng)24 h，檢測(cè)方法同上。實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次，取平均值。

1.7.3HG誘導(dǎo)損傷條件下，LNT對(duì)HUVEC活力的影響 細(xì)胞培養(yǎng)和種板方法同上，設(shè)置6個(gè)實(shí)驗(yàn)組：空白對(duì)照組、HG損傷模型組、HG+LNT低劑量組(200 mg·L-1)、HG+LNT中劑量組(400 mg·L-1)、HG+LNT高劑量組(800 mg·L-1)、以及A0組，加藥后培養(yǎng)24 h，檢測(cè)方法同上。實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次，取平均值。

1.8 DCFH-DA探針法檢測(cè)HUVEC胞內(nèi)ROS水平設(shè)置5個(gè)實(shí)驗(yàn)組：空白對(duì)照組、HG損傷模型組、HG+LNT低劑量組(200 mg·L-1)、HG+LNT中劑量組(400 mg·L-1)、HG+LNT高劑量組(800 mg·L-1)，將HUVEC細(xì)胞按2×108·L-1接種于6孔板，加藥培養(yǎng)24 h后，棄去上清，無(wú)菌PBS洗滌后加入DCFH-DA稀釋試劑(按1 ∶1 000用不含血清的DMEM培養(yǎng)基稀釋)，DCFH-DA工作濃度為10 μmol·L-1，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中37 ℃孵育20～30 min。用無(wú)血清的培養(yǎng)基洗滌3次后，在熒光顯微鏡下觀察各處理組熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度與胞內(nèi)ROS水平呈正比。應(yīng)用ImageJ 1.8.0軟件分析圖像，將空白對(duì)照組的熒光強(qiáng)度設(shè)置為100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次，取平均值。

1.9 黃嘌呤氧化酶法、硫代苯巴比妥酸法檢測(cè)HUVEC的SOD、MDA水平分組方法同“1.8”，加藥培養(yǎng)24 h后，裂解細(xì)胞，按照試劑盒說明書操作。實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次，取平均值。

1.10 MDC染色法檢測(cè)HUVEC的自噬水平設(shè)置6個(gè)實(shí)驗(yàn)組：空白對(duì)照組、HG損傷模型組、HG+LNT低劑量組(200 mg·L-1)、HG+LNT中劑量組(400 mg·L-1)、HG+LNT高劑量組(800 mg·L-1)、雷帕霉素(rapamycin，RAPA)陽(yáng)性對(duì)照組。將HUVEC細(xì)胞按2×108個(gè)·L-1接種于6孔板，HG誘導(dǎo)損傷后，分別加入200、400、800 mg·L-1LNT處理，陽(yáng)性藥對(duì)照組加100 nmol·L-1RAPA。24 h后，加入50 μmol·L-1MDC孵育20 min，熒光顯微鏡觀察拍照。應(yīng)用ImageJ 1.8.0軟件分析圖像，將空白對(duì)照組的熒光強(qiáng)度設(shè)置為100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次，取平均值。

1.11 PCR法檢測(cè)HUVEC自噬相關(guān)基因Beclin-1表達(dá)水平設(shè)置分組同1.10。細(xì)胞培養(yǎng)種板方法同上，給藥培養(yǎng)24 h后，加入TRIzol和氯仿進(jìn)行mRNA提取，將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行濃度測(cè)定后點(diǎn)板上機(jī)檢測(cè)自噬相關(guān)的基因Beclin-1，引物序列見Tab 1。

Tab 1 Specific primer sequences for PCR

1.12 Western blot技術(shù)檢測(cè)HUVEC胞內(nèi)相關(guān)蛋白的表達(dá)細(xì)胞種板培養(yǎng)方法同上，各組細(xì)胞加藥培養(yǎng)24 h后，棄去上清，用PBS清洗后，在6孔板中加入含苯甲基磺酰氟(PMSF)的RIPA裂解液90 μL。冰上充分裂解后，在4 ℃，12 000 r·min-1條件下離心20 min，取上清總蛋白液進(jìn)行BCA法定量。將各組蛋白濃度調(diào)至統(tǒng)一后，100 ℃水浴鍋中煮10 min，將蛋白變性。上樣時(shí)各組取等量樣本，進(jìn)行SDS-PAGE分離后轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜，室溫下5%脫脂牛奶封閉2 h。加入一抗4 ℃孵育過夜。用三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(TBST)溶液洗滌5次，每次10 min，隨后孵育二抗，于室溫孵育1 h。TBST清洗5次后采用ECL顯影液顯色，于化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)成像。應(yīng)用ImageJ 1.8.0軟件分析圖像的灰度值，以GAPDH為內(nèi)參計(jì)算所測(cè)蛋白的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

2 結(jié)果

2.1 CCK-8實(shí)驗(yàn)確定HG、LNT作用的最佳濃度

2.1.1HG作用濃度篩選 不同濃度HG培養(yǎng)液作用于HUVEC后，與對(duì)照組相比，當(dāng)HG的工作濃度為120 mmol·L-1時(shí)，HUVEC開始出現(xiàn)活力明顯下降(P<0.01)，如Fig 1A所示；HG工作濃度達(dá)到180 mmol·L-1時(shí)，HUVEC活力下降程度約為正常對(duì)照組的一半(P<0.01)。這提示120 mmol·L-1的HG能引起適度的HUVEC損傷，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取120 mmol·L-1作為HG誘導(dǎo)HUVEC損傷的工作濃度。

2.1.2LNT對(duì)正常細(xì)胞無(wú)影響 僅用LNT處理HUVEC并不影響細(xì)胞活力，這提示LNT對(duì)HUVEC不存在明顯的細(xì)胞毒性，見Fig 1B。

2.1.3LNT提高HG損傷下的細(xì)胞活力 與空白對(duì)照組相比，僅用120 mmol·L-1的HG處理HUVEC降低了細(xì)胞活力(P<0.01)；應(yīng)用不同濃度LNT與HG共處理HUVEC時(shí)，與HG單獨(dú)處理組相比，當(dāng)LNT濃度達(dá)到400 mg·L-1和800 mg·L-1時(shí)，能明顯改善HG誘導(dǎo)的HUVEC活力下降(P<0.01)，見Fig 1C。這說明對(duì)于HG誘導(dǎo)的HUVEC活力下降，LNT能起到一定的改善作用。

2.2 LNT抑制HG誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生與空白對(duì)照組相比，HG的處理增加了HUVEC胞內(nèi)ROS水平(P<0.01)。同時(shí)與HG損傷組進(jìn)行比較，LNT劑量依賴性地緩解HG引起的ROS增加，400 mg·L-1作用后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見Fig 2。這說明LNT可有效改善HG誘導(dǎo)的HUVEC胞內(nèi)ROS堆積。

Fig 2 Effects of LNT on intracellular ROS level of HUVECs induced by HG **P<0.01 vs control; ##P<0.01 vs HG.

2.3 LNT調(diào)節(jié)HUVEC內(nèi)SOD、MDA水平緩解氧化應(yīng)激120 mmol·L-1的HG可明顯降低HUVEC胞內(nèi)SOD含量(P<0.01)，增加MDA含量(P<0.01)。不同劑量LNT的處理能明顯改善HG誘導(dǎo)的SOD降低，并呈劑量依賴性。同時(shí)400 mg·L-1的LNT即可有效降低HG引起的MDA水平增加(P<0.01)，見Fig 3。

Fig 3 SOD and MDA level of

2.4 LNT抑制HG誘導(dǎo)損傷下HUVEC內(nèi)iNOS蛋白表達(dá)與空白對(duì)照組相比，HG的處理明顯增強(qiáng)了HUVEC的iNOS蛋白表達(dá)(P<0.01)，400 mg·L-1(P<0.05)和800 mg·L-1(P<0.01)的LNT能有效抑制HG引起的iNOS表達(dá)增加，見Fig 4。結(jié)果說明,LNT能通過減少ROS堆積和iNOS表達(dá)改善HG引起的HUVEC胞內(nèi)氧化應(yīng)激。

2.5 LNT增加HG損傷下細(xì)胞內(nèi)自噬MDC染色表達(dá)與對(duì)照組比較，120 mmol·L-1的HG可明顯降低HUVEC胞內(nèi)自噬水平(P<0.05)。400 mg·L-1、800 mg·L-1LNT都明顯增加MDC染色標(biāo)記的熒光顆粒水平，見Fig 5。RAPA是自噬誘導(dǎo)劑，此處用作為陽(yáng)性參照。

Fig 4 Effects of LNT on iNOS protein expression in HG treated HUVECs

Fig 5 Effects of LNT on intracellular autophagy level of HUVECs in HG induced injury

2.6 LNT提高HG損傷下自噬相關(guān)基因Beclin-1表達(dá)與空白對(duì)照組相比，HG的處理明顯降低了HUVEC的Beclin-1基因表達(dá)(P<0.01)，400 mg·L-1(P<0.05)和800 mg·L-1(P<0.01)的LNT能增加Beclin-1基因表達(dá)，見Fig 6。

Fig 6 Effect of LNT on expression of HUVEC Beclin-1 gene treated with HG

2.7 LNT提高HG損傷下胞內(nèi)LC3II/LC3I蛋白表達(dá)與空白對(duì)照組相比，HG的處理明顯降低了HUVEC的LC3II/LC3I的蛋白表達(dá)(P<0.001)，400 mg·L-1(P<0.05)和800 mg·L-1(P<0.01)的LNT能有效提高HG引起的LC3II/LC3I表達(dá)減少，見Fig 7。這部分結(jié)果說明LNT能提高HG誘導(dǎo)損傷下，細(xì)胞內(nèi)的自噬水平。

Fig 7 Effects of LNT on LC3 protein expression in HG treated HUVECs

2.8 LNT降低HG損傷下胞內(nèi)p38 MAPK磷酸化水平對(duì)于HUVEC，HG的刺激可增強(qiáng)p38 MAPK的磷酸化(P<0.001)，LNT的處理能劑量依賴性地改善HG誘導(dǎo)的p38 MAPK磷酸化，200 mg·L-1的劑量即差異有顯著性(P<0.01)，見Fig 8。這部分結(jié)果說明，LNT改善HG誘導(dǎo)的HUVEC氧化應(yīng)激狀態(tài)，可能與抑制p38 MAPK信號(hào)通路的磷酸化相關(guān)。

Fig 8 Effects of LNT on p-p38 protein expression in HG treated HUVECs

3 討論

糖尿病是一個(gè)全球性的健康問題，已成為全球十大死亡原因之一，其患者多死于并發(fā)癥，其中最常見的是血管病變，因此防治糖尿病血管病變是改善糖尿病并發(fā)癥的有效途徑。

糖尿病屬于中醫(yī)的“消渴”范疇，在疾病早期，常表現(xiàn)為陰虛肝旺、氣陰兩虛、陰虛燥熱、熱傷氣陰等癥候。在疾病中晚期，出現(xiàn)血管病變等并發(fā)癥，其主要病機(jī)特征多為氣虛血瘀、經(jīng)絡(luò)閉阻。因此，中醫(yī)治療糖尿病及其血管病變，常采用調(diào)整臟腑、補(bǔ)虛瀉實(shí)、標(biāo)本兼治的治療法則[8]。藥食兩用藥材香菇具有補(bǔ)虛扶正、益氣健脾的功效，不僅和糖尿病的治療理論相符，還和自噬在傳統(tǒng)中醫(yī)理論中的“補(bǔ)虛瀉實(shí)”相符合。

近年來，中醫(yī)藥對(duì)疾病的診治作用在國(guó)內(nèi)外得到廣泛關(guān)注和推廣，關(guān)于多糖類物質(zhì)藥理作用的研究有所增多，然而，LNT對(duì)于糖尿病血管病變的防治作用和機(jī)制尚不明確。本研究通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，探究LNT對(duì)HUVEC的保護(hù)效應(yīng)。研究結(jié)果首次證實(shí)了在HG的損傷處理下，LNT對(duì)HUVEC的活力有改善作用。

正常生理情況下iNOS蛋白表達(dá)量較低，有損傷因素刺激時(shí)iNOS表達(dá)上調(diào)并產(chǎn)生大量NO，可誘導(dǎo)ROS形成，進(jìn)一步引起脂質(zhì)過氧化[9-10]。脂質(zhì)過氧化會(huì)使MDA生成增加，胞內(nèi)ROS和MDA水平呈明顯正相關(guān)[11]。SOD活性反映細(xì)胞清除ROS的能力，是一種重要的抗氧化酶[12-13]。

在生理?xiàng)l件下，對(duì)于細(xì)胞內(nèi)的多余代謝物，胞內(nèi)維持著一種保守的降解途徑—自噬。此過程通過自噬體的雙膜囊泡將大量細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞器(如線粒體和過氧化物酶體)感染因子等在內(nèi)的代謝廢物傳遞到溶酶體中降解，緩和炎癥反應(yīng)，防止細(xì)胞死亡，保護(hù)細(xì)胞免受饑餓和相關(guān)壓力[14]。而II 型糖尿病是一種常見的與氧化應(yīng)激相關(guān)的多因素疾病，通過活性氧的形成導(dǎo)致高血糖和高脂血癥引起的細(xì)胞損傷和胰島素抵抗[15]。在糖尿病狀態(tài)下，血管內(nèi)皮細(xì)胞的自噬水平不能維持多余代謝廢物的清除，代謝廢物過度堆積，內(nèi)皮細(xì)胞最終無(wú)法維持正常生理功能，血管病變開始發(fā)生。

絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)屬于高度保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族，包含3種亞家族：c-Jun的N末端激酶(c-Jun N-terminal kinases，JNK)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellar signal-regulated kinases，ERK)以及p38[16]。不僅與胞內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)密切相關(guān)，還作為mTOR下游的關(guān)鍵靶點(diǎn)調(diào)控著自噬[17]。且調(diào)節(jié)許多蛋白質(zhì)、酶和轉(zhuǎn)錄因子的活性，參與細(xì)胞對(duì)外部刺激的生物反應(yīng)，有研究表明，氧化應(yīng)激在血管內(nèi)皮損傷的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用，ROS可通過多種途徑誘導(dǎo)p38 MAPK持續(xù)活化[18]，活化后參與調(diào)控，使細(xì)胞內(nèi)的自噬過程受到抑制，ROS的清除能力下降，二者互相促進(jìn)、惡性循環(huán)，進(jìn)而造成細(xì)胞損傷和活力下降。

本研究發(fā)現(xiàn)，HG誘導(dǎo)HUVEC胞內(nèi)p38 MAPK磷酸化增加，自噬水平受到抑制。LNT作用后可增加HG損傷下細(xì)胞內(nèi)的自噬水平。通過調(diào)控自噬可以降低HG引起的HUVEC胞內(nèi)iNOS蛋白表達(dá)、減少ROS和MDA水平，改善HG誘導(dǎo)的SOD水平降低，緩解胞內(nèi)氧化應(yīng)激。同時(shí)p38 MAPK的磷酸化水平也降低，以上作用均為劑量依賴性。這提示對(duì)于HG引起的HUVEC活力下降，LNT可以通過ROS/p38 MAPK通路調(diào)控自噬來改善細(xì)胞損傷，減緩血管病變的發(fā)生。

綜上所述，LNT可能作為防治糖尿病血管病變的候選藥物，從而為延緩糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展，提高糖尿病病人的生活質(zhì)量提供可能性。但自噬的調(diào)控是多途徑的，LNT是否僅通過ROS/p38 MAPK通路調(diào)控自噬尚不明確，HG刺激HUVEC條件下，LNT對(duì)其它自噬相關(guān)信號(hào)通路的影響尚未闡明，后續(xù)本課題組將在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步深入探究。