沈 艷，何長生，劉 華，王 維，朱良強(qiáng)

（安徽省動物疫病預(yù)防與控制中心，安徽合肥 230091）

禽類獨(dú)特的解剖、生理和免疫學(xué)特點(diǎn)，導(dǎo)致其呼吸系統(tǒng)疾病多發(fā)，其中以病毒誘發(fā)的危害最為嚴(yán)重[1]。在我國流行的烈性傳染性禽類呼吸道病毒中，高致病性禽流感病毒（AIV-H5/AIV-H7）為一類動物疫病病原，新城疫病毒（NDV）為二類動物疫病病原，禽傳染性支氣管炎病毒（IBV）和禽傳染性喉氣管炎病毒（ILTV）為三類動物疫病病原，它們均具有傳播快、發(fā)病急、死亡率高的特征。禽偏肺病毒（aMPV）雖然致死率不高，但同樣具有極高的傳染性，若伴有其他病原混合或繼發(fā)感染，會加重病情，增加死亡率。上述病原通常以單獨(dú)或者混合感染形式流行于禽群中，家禽感染后通常會產(chǎn)生相似的呼吸道癥狀，僅通過臨床診斷難以區(qū)分。

安徽省地處華東腹地，連接長江三角洲，是我國重要的家禽生產(chǎn)基地[2-3]。家禽業(yè)是安徽省農(nóng)村經(jīng)濟(jì)的重要產(chǎn)業(yè)，成為精準(zhǔn)扶貧的“短平快”產(chǎn)業(yè)。規(guī)?；图s化養(yǎng)殖是家禽養(yǎng)殖的發(fā)展趨勢所在。屠宰企業(yè)處于疫病傳播的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，是禽產(chǎn)品從養(yǎng)殖場流向消費(fèi)者餐桌的必經(jīng)途徑，因此對屠宰和流通環(huán)節(jié)進(jìn)行病原檢測，既能了解禽群病原感染情況，又能評估疫病傳播風(fēng)險，對養(yǎng)禽業(yè)生產(chǎn)以及公共安全衛(wèi)生意義重大。本研究對2021 年3—11 月在安徽省不同地區(qū)17 家家禽屠宰點(diǎn)和1 家農(nóng)貿(mào)市場采集的472 份雞鴨喉頭氣管組織樣品，進(jìn)行AIV-H5、AIV-H7、NDV、IBV、ILTV、aMPV 病原檢測，通過分析比較不同季節(jié)、不同區(qū)域、不同禽種的樣本陽性率差異，了解這幾種家禽呼吸道病毒在安徽省禽群中的感染情況，以期為本地區(qū)家禽病毒性呼吸道疾病防控提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 樣品來源

472 份雞鴨喉頭氣管組織樣品分別于2021 年3 月（春季）、6 月（夏季）和11 月（秋季）采自皖北（潁上縣、碭山縣、利辛縣、霍邱縣）、皖中（肥西縣、和縣、鳩江區(qū)、三山區(qū)）、皖南（寧國市、廣德市、涇縣、旌德縣）12 個縣（市、區(qū)）的17家屠宰企業(yè)和1家農(nóng)貿(mào)市場，共采集27批次（表1）。

表1 2021 年27 批次的采樣信息

1.2 主要試劑

AIV-H5/H7 亞型雙重實(shí)時熒光RT-PCR 檢測試劑盒（批號20210426P）、ILTV 實(shí)時熒光RT-PCR檢測試劑盒（批號20210302P），購自哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司；NDV 通用型實(shí)時熒光RT-PCR檢測試劑盒（批號20210621）、IBV 實(shí)時熒光RTPCR 檢測試劑盒（批號71019）、aMPV 核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法，批號71023），購自深圳澳東檢驗(yàn)檢測科技有限公司。

1.3 樣品處理及檢測

剪取喉頭氣管組織，按1:5（V/V）加入含2%雙抗的PBS 保存液，在組織研磨器內(nèi)研磨，反復(fù)凍融3 次，4 ℃、10 000 r/min 離心10 min 后取上清，采用磁珠法抽提RNA；將所獲得的RNA 根據(jù)試劑盒說明書，進(jìn)行熒光定量RT-PCR 檢測。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

對472 份組織樣本分別進(jìn)行AIV-H5、AIV-H7、NDV、IBV、ILTV、aMPV 病原檢測。1份樣本中只檢測出1 種病原陽性為單一感染，同時檢出2 種病原陽性為雙重感染，同時檢出3 種病原陽性為三重感染，以此類推。利用方差分析方法，分析比較不同季節(jié)、不同區(qū)域、不同禽源間上述病原陽性率差異以及病原混合感染情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同病原

病原檢測統(tǒng)計結(jié)果（表2）顯示，472 份樣本中，檢出NDV、IBV、ILTV、aMPV 核酸陽性，平均陽性率分別為9.96%、27.54%、1.06%、5.51%，陽性批次占比分別為11/27、11/27、3/27、6/27，未檢出AIV-H5、AIV-H7 核酸陽性。

表2 不同呼吸道病毒核酸檢測結(jié)果

2.2 不同季節(jié)

季節(jié)統(tǒng)計結(jié)果（表3）顯示：NDV 陽性率秋季最低，與其他季節(jié)差異顯著（P＜0.05），春季與夏季差異不顯著（P＞0.05）；IBV 陽性率春季最高，與其他季節(jié)差異顯著（P＜0.05），夏季與秋季差異不顯著（P＞0.05）；aMPV 陽性率春季最高，與其他季節(jié)差異顯著（P＜0.05），夏季與秋季差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明，NDV、IBV、aMPV 存在一定的季節(jié)流行特征，春季流行率普遍較高。ILTV 僅在夏季檢出，其他季節(jié)均未測出。

表3 不同季節(jié)病原陽性率統(tǒng)計結(jié)果

2.3 不同區(qū)域

區(qū)域統(tǒng)計結(jié)果（表4）顯示：NDV 自北向南都有陽性樣本檢出，但各區(qū)域間的陽性率差異不顯著（P＞0.05）；IBV 樣本陽性率皖南、皖中間差異顯著（P＜0.05），而皖北未檢出；ILTV 僅在皖北檢出；aMPV 在皖南、皖中區(qū)域均有陽性檢出，但兩區(qū)域間的陽性率差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明，NDV 在安徽省傳播范圍較廣，而其他病原存在一定的區(qū)域分布特征，其中IBV 在皖南地區(qū)流行最為嚴(yán)重。

表4 不同地區(qū)病原陽性率統(tǒng)計結(jié)果

2.4 不同禽群

472 份樣本中，雞源樣本381 份、鴨源樣本91 份（表5）。NDV 與ILTV 在雞源與鴨源樣本中均有檢出，其中NDV 的雞源陽性率（11.55%）顯著高于鴨源（3.30%），而ILTV 的雞源和鴨源陽性率無顯著差異。IBV 與aMPV 僅在雞源樣本中檢出，陽性率分別為34.12%、6.82%。結(jié)果表明，NDV、IBV 在雞群中流行較為嚴(yán)重。

表5 不同家禽病原陽性率統(tǒng)計結(jié)果

2.5 單一及混合感染

共檢出183 份病毒陽性樣品，其中單一感染159 份、混合感染24 份，占比分別為86.89%、13.11%。單一感染中，IBV 占比最高，為66.67%（106/159）；混合感染以IBV+NDV 和IBV+aMPV 雙重感染為主，占比分別為45.83%（11/24）和50.00%（12/24），僅檢出1 份三重感染樣本，為NDV+IBV+aMPV。結(jié)果表明，上述病原仍以單一感染為主，IBV 與其他病原的混合感染較多見。具體結(jié)果見表6。

表6 病原感染情況

3 討論

能誘發(fā)禽呼吸道疾病的病毒較多，其中AIV、NDV、IBV、ILTV 和aMPV 等較常見。H5和H7 亞型AIV 是一種急性、烈性動物傳染病病原，不僅嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展，也嚴(yán)重威脅人類健康，被認(rèn)為是最有可能導(dǎo)致人類流感大流行的病毒之一[7-8]。從此次檢測結(jié)果來看，未檢出H5 及H7 亞型AIV 陽性樣本，說明安徽省高致病性禽流感整體防控較好，但是安徽境內(nèi)水網(wǎng)密集，且分布有候鳥遷徙途徑，因此對高致病性禽流感的防控仍是家禽疫病防控的重中之重[9]。

本研究缺少冬季檢測結(jié)果，具有一定的局限性。早春和冬季等寒冷季節(jié)，禽舍的通風(fēng)、溫度及濕度三者矛盾加劇，家禽易處于缺氧、低溫、高濕、高氨、高二氧化碳的不良環(huán)境之中，禽群抗病力降低，因此呼吸道疾病流行率偏高。本研究的季節(jié)統(tǒng)計結(jié)果顯示，NDV 陽性率春季明顯高于秋季，IBV 陽性率春季明顯高于夏季和秋季，aMPV 陽性率春季顯著高于秋季。鑒于寒冷季節(jié)家禽呼吸道病毒感染率較高，應(yīng)重視早春及冬季寒冷季節(jié)呼吸道病毒感染的防控，在做好防寒保暖的同時，注意舍內(nèi)空氣質(zhì)量以及環(huán)境衛(wèi)生。

隨著安徽省畜牧產(chǎn)業(yè)布局的調(diào)整優(yōu)化，位于江淮和沿江地區(qū)的合肥、宣城、蕪湖等地作為安徽省肉禽優(yōu)勢發(fā)展區(qū)域，家禽養(yǎng)殖發(fā)展迅速，尤其是皖南作為傳統(tǒng)的家禽優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)帶，養(yǎng)禽業(yè)一直是當(dāng)?shù)氐闹еa(chǎn)業(yè)[13]。本研究選擇調(diào)查的屠宰禽群基本源于這些養(yǎng)殖區(qū)域，因此檢測結(jié)果可在一定程度上反映出安徽省不同區(qū)域的病原感染特點(diǎn)，其中皖中、皖南區(qū)域的病原檢出率較皖北區(qū)域相對要高。因此，在各地禽群養(yǎng)殖過程中，不同疫病的防控策略應(yīng)有側(cè)重。針對養(yǎng)殖發(fā)展迅速的地區(qū)，養(yǎng)殖技術(shù)、養(yǎng)殖條件、管理模式要跟上養(yǎng)殖發(fā)展速度；傳統(tǒng)養(yǎng)禽區(qū)域要提高生物安全防護(hù)水平，控制疫病擴(kuò)散，并做好種苗的“老病”凈化工作；而對于ILTV 僅在皖北檢出，其他區(qū)域未檢出，這個現(xiàn)象值得思考，基于本次調(diào)查的局限性，后續(xù)可以從養(yǎng)殖環(huán)境、養(yǎng)殖品種、日常管理、疫苗接種等方面繼續(xù)深入調(diào)查，從而掌握該病毒的真實(shí)流行狀況。

傳統(tǒng)觀念認(rèn)為，NDV、IBV、ILTV 和aMPV主要感染雞群，造成雞群發(fā)病，水禽多攜帶病原而不發(fā)病。NDV、aMPV 和ILTV 的“經(jīng)典”宿主是雞和火雞，很少導(dǎo)致其他禽類發(fā)病。而水禽對上述病原抵抗力較強(qiáng)，主要承擔(dān)病毒攜帶和傳播角色[4，11-12，17]。本次調(diào)查結(jié)果也基本符合這些特性，即雞群的病毒感染較鴨群嚴(yán)重，因此要重點(diǎn)加強(qiáng)雞群中的病毒性呼吸道疾病防控。但是，水禽是AIV、NDV 等多種禽類病毒的天然儲存庫，在病毒傳播和進(jìn)化中的作用值得關(guān)注。通過“野生水禽-家養(yǎng)水禽-雞群”這幾個密切接觸的生態(tài)界面，病毒得以生存、傳播和進(jìn)化[4]。因此，應(yīng)重視對鴨群等家養(yǎng)水禽上述病毒性呼吸道疾病的防控，飼養(yǎng)時應(yīng)避免禽群間的交叉污染。

以往研究[18-20]表明，禽群易存在混合感染，通常以病毒混合細(xì)菌或寄生蟲感染，或是免疫抑制病毒混合感染其他病毒為主。本研究發(fā)現(xiàn)，禽群呼吸道病毒感染以單一感染為主，且NDV、ILTV、IBV 以及aMPV 均有檢出，說明這些病原均可隱性感染禽群。因此，不同區(qū)域、不同季節(jié)、不同類型養(yǎng)殖場以及不同批次的養(yǎng)殖禽群，需要建立精準(zhǔn)的防范措施。此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，禽群混合感染率較低，且混合感染類型較為單一，主要為IBV 與其他病原的混合感染，但結(jié)合NDV、ILTV、IBV 以及aMPV 均為RNA 病毒，且存在多個血清型，易發(fā)生突變等特點(diǎn)，需要加強(qiáng)各種病原感染的綜合控制，加強(qiáng)消毒滅源，合理運(yùn)用疫苗，提高管理水平。

本研究采樣檢測了屠宰和交易禽群的呼吸道病毒感染情況，其結(jié)果可能不能真實(shí)體現(xiàn)所有養(yǎng)殖禽群的感染狀況，后續(xù)需要開展系統(tǒng)的流行病學(xué)調(diào)查，以準(zhǔn)確掌握全省各區(qū)域所有環(huán)節(jié)禽群呼吸道病毒的流行特征。

4 結(jié)論

調(diào)查發(fā)現(xiàn)：安徽省家禽禽流感防控效果整體較好，但存在不同程度的NDV、IBV、ILTV、aMPV 等病原流行，尤以IBV 最為嚴(yán)重；病原存在一定的季節(jié)和區(qū)域流行特征，早春季節(jié)以及皖南區(qū)域感染較為嚴(yán)重；雞群中的病毒感染風(fēng)險比鴨群高。因此，應(yīng)根據(jù)不同病原流行特點(diǎn)，采取各有側(cè)重的防控策略。