蔡 羲 林 琳 黃梅清 陳秀琴 鄭 敏 江 斌＊

（1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 福州 350013；2.福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心 福州350013）

禽大腸桿菌?。ˋvian colibacilloisis）指部分或全部由大腸桿菌（E.coli）所引起的局部或全身性感染的疾病。隨著集約化養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，雞大腸桿菌病已成為嚴重威脅養(yǎng)雞業(yè)的傳染病之一，造成嚴重的經(jīng)濟損失。目前，防治該病主要依靠抗生素，但是抗生素濫用的現(xiàn)象越來越嚴重，不僅會造成養(yǎng)殖成本增高，也會導(dǎo)致細菌產(chǎn)生耐藥性，另外藥物殘留會造成更為嚴重的食品安全問題。疫苗接種有一定的效果，但由于大腸桿菌血清型眾多，各血清型之間沒有交叉保護，因此其推廣使用范圍有限。如何應(yīng)用無抗的方法控制大腸桿菌病已經(jīng)成為一項涉及食品安全的實用技術(shù)。筆者通過多年臨床觀察，對于頑固性大腸桿菌，應(yīng)用新城疫疫苗緊急免疫能取得較好的效果，具體原因尚不清楚。因此，設(shè)計本試驗，論證新城疫La-sota弱毒苗（Ⅳ系）對控制雞大腸桿菌病的效果。

1 材料與方法

1.1 大腸桿菌菌株來源 本實驗室分離鑒定的FQ11株。

1.2 儀器和試劑 流式細胞儀（BD公司，型號：BD FACSCalibur）；普通臺式離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠，型號：TGL-16G）；淋巴細胞分離液（天津灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司）；新城疫疫苗La-sota弱毒苗（Ⅳ系）為青島易邦生物制品廠生產(chǎn)，批號為：20190911。

1.3 試驗動物 選取同一批次30日齡的健康蛋雞50羽，由河北峪口禽業(yè)有限公司提供，根據(jù)本場免疫程序進行，于7日齡、21日齡進行雞新城疫-傳染性支氣管炎二聯(lián)四價疫苗(活)免疫，隨機分為空白組10羽，對照組20羽，試驗組20羽，正常飼喂，不添加任何藥物。

1.4 攻毒試驗 參照周秀紅等[1]的方法進行攻毒試驗，以平板計數(shù)法測定細菌含量，最終調(diào)至細菌濃度為1×108CFU/mL。FQ11大腸桿菌混懸液胸肌注射攻毒，0.2 mL/羽。 各組雞分別隔離飼養(yǎng)，連續(xù)觀察2周，每天詳細記錄雞群發(fā)病、死亡情況，并對病死雞進行剖檢，從中分離病原體并進行鑒定，以驗證死雞確系由攻毒所致。

待出現(xiàn)臨床癥狀，試驗組每只雞緊急免疫新城疫La-sota弱毒苗（Ⅳ系）4羽份。分別于免疫后第5 d、10 d、17 d隨機采集各組血樣8份，每份5 mL，其中每份血液樣品取2 mL分離血清，用血凝抑制法（HI）檢測ND抗體[2]；每份剩余樣品3 mL，加肝素抗凝，用于提取淋巴細胞，按流式細胞儀操作進行T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞數(shù)量檢測。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件進行單因素方差分析，用LSD法進行多重比較，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床表現(xiàn)和剖檢病變 對照組雞死亡10羽，死亡率高達50%，試驗組死亡4羽，死亡率20%；對照組和試驗組部分雞食欲降低，翅下垂，羽毛蓬亂，反應(yīng)遲鈍，行動緩慢，消瘦喜睡，排黃綠色稀糞。剖檢病變?yōu)闅饽已?、心包炎、肝周炎。以患雞的心血、氣囊、肝滲出液接種S-S瓊脂、麥康凱瓊脂、伊紅美藍瓊脂，于37℃溫箱培養(yǎng)24 h后均有典型的大腸桿菌菌落生長?？瞻讓φ战M，一切正常。

2.2 新城疫抗體水平與大腸桿菌病抗病性相關(guān)性分析 由表1可知，緊急免疫后5～17 d，試驗組抗體水平逐漸升高，而對照組抗體略有下降，免疫后第17 d，試驗組與對照組新城疫抗體水平差異顯著（P<0.05），試驗組死亡率明顯降低，說明新城疫抗體水平較高的雞，對大腸桿菌病的抗病性較強，呈一定程度正相關(guān)。

表1 免疫后雞群新城疫平均抗體水平變化相關(guān)性分析比較

2.3 外周血液中T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞數(shù)量的變化 由表2可以看出，對照組、試驗組緊急免疫后外周血液T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞數(shù)量明顯上升，試驗組與對照組T淋巴細胞數(shù)量差異極顯著（P<0.01），B淋巴細胞、NK細胞數(shù)量差異顯著（P<0.05），說明緊急免疫后體液免疫、細胞免疫、非特異性免疫增強，并且維持在較高的水平。

表2 外周血液T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞數(shù)量變化

3 討 論

從試驗結(jié)果可以看出，緊急免疫后，隨著試驗組雞新城疫抗體水平提高，對大腸桿菌病的抗病性增強，死亡率降低，新城疫抗體水平與大腸桿菌病抗病性呈一定程度正相關(guān)。這一結(jié)果與Yunis R等[3]的研究報道基本一致，即新城疫抗體水平較高的個體，其大腸桿菌病抗病性也較高，二者存在很強的正相關(guān)。

試驗結(jié)果表明，緊急免疫后，試驗組雞的死亡率得到有效控制，未免疫的對照組死亡率達到50%。外周血液檢測結(jié)果顯示，緊急免疫后，T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞數(shù)量明顯上升，并維持在較高的水平。有試驗表明[4-7]，應(yīng)激反應(yīng)可增強固有免疫、獲得性體液免疫和細胞免疫，其決定因素是抗原、病原或受傷導(dǎo)致的應(yīng)激反應(yīng)建立的生理條件，這些條件包括T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞的轉(zhuǎn)運和激活。新城疫弱毒疫苗有Ⅰ系、Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系等多種，Ⅰ系疫苗具中等毒力，對產(chǎn)蛋雞、雛雞等都有致病性，應(yīng)謹慎使用；Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系屬于弱毒苗，廣泛應(yīng)用于青年雞群免疫，但Ⅳ系疫苗的毒力比其它兩系要強，免疫后對雞群提升免疫力效果不錯[8]。因此，可以通過緊急免疫新城疫La-sota弱毒苗（Ⅳ系），快速提高雞群免疫力，提高對大腸桿菌病的抗病性。