郭 碩，吳凌蓉，董 穎，林妮妮

(北京新領(lǐng)先醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，北京 100094)

頭孢菌素類藥物是常見(jiàn)的廣譜抗生素藥物之一，其中第三代頭孢菌素對(duì)多數(shù)革蘭陰性菌有抗菌作用，可用于敏感菌引起的呼吸道、泌尿道、胃腸道、膽道、腹腔、胸腔、盆腔、骨關(guān)節(jié)、皮膚軟組織等部位的重癥感染，在臨床上廣泛使用[1]。頭孢他啶、頭孢曲松和頭孢哌酮等第三代頭孢菌素具有抗菌譜廣、對(duì)β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定性高的優(yōu)勢(shì)，適用于多種類型的感染性疾病。對(duì)于病原不明感染的治療中，一般選用第三代頭孢菌素作為經(jīng)驗(yàn)性治療用藥，具有廣闊的市場(chǎng)前景[2]。

頭孢匹胺[3]、頭孢哌酮、頭孢孟多等第三代頭孢菌素的重要中間體甲基巰基四氮唑由異硫氰酸甲酯合成而來(lái)[4]。但異硫氰酸甲酯具有高毒性，在歐洲化學(xué)品管理局注冊(cè)的以口服途徑作用于大鼠的無(wú)可見(jiàn)有害作用水平(NOAEL)僅為8mg/kg/d。由此可見(jiàn)，異硫氰酸甲酯的殘留量不僅影響藥物質(zhì)量，更與用藥安全息息相關(guān)。在第三代頭孢菌素中，頭孢菌素A是臨床上應(yīng)用最為廣泛的藥物之一。因此，有必要建立可靠的方法對(duì)頭孢菌素A中異硫氰酸甲酯的殘留量進(jìn)行嚴(yán)格控制。毛跟年等[5]通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，采用面積歸一化法測(cè)定了阿膠中的異硫氰酸甲酯的含量、確定了阿膠中構(gòu)成腥味的主要成分為異硫氰酸甲酯；郭小娜等[6]使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)刺山柑果實(shí)中的異硫氰酸酯進(jìn)行定性，并采用氣相色譜法進(jìn)行定量，3種異硫氰酸酯分離良好且具有良好的線性關(guān)系和回收率，但未見(jiàn)靈敏度相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)；馮義志等[7]利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分析番茄和土壤中殘留的異硫氰酸甲酯，方法檢出限為0.02 mg/kg。目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)異硫氰酸甲酯的分析方法比較有限，尚未見(jiàn)有關(guān)檢測(cè)藥品中異硫氰酸甲酯殘留量分析方法的報(bào)道。因此，亟需建立一種專屬、靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)頭孢菌素A中痕量異硫氰酸甲酯殘留的分析方法，為頭孢菌素A的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)、為頭孢類藥物的質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器和試藥

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(8890-7000D，安捷倫)；百萬(wàn)分之一天平(225D-1CN，德國(guó)賽多利斯公司)。

異硫氰酸甲酯對(duì)照品(純度≥99.67%)廣州雋沐生物股份有限公司；頭孢菌素A原料藥(純度≥99.23%)自制；正己烷(色譜純)Fisher Chemical公司。

1.2 分析條件

色譜條件：HP-5MSUI毛細(xì)色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm)，程序升溫：初始柱溫為40℃，以10℃/min的升溫速率升至100℃，維持5min，以20℃/min的速率升至220℃；載氣為氦氣，流速1.0mL/min；進(jìn)樣口溫度：220℃；進(jìn)樣量1.0μL；進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣。

質(zhì)譜條件：EI源，電離能量70eV；離子源溫度230℃，四級(jí)桿溫度150℃，接口溫度230℃；溶劑延遲2min，定時(shí)事件：10.0min后，檢測(cè)器關(guān)閉；掃描方式MRM，掃描離子對(duì)：定量離子對(duì)73→71.8，定性離子對(duì)71.9→45.1和45→44。

1.3 溶液配制

對(duì)照品溶液的配制：取異硫氰酸甲酯對(duì)照品適量，精密稱定，加入正己烷稀釋至50 ng·mL-1，過(guò)0.22μm尼龍濾膜，于2～8℃保存。

供試品溶液的配制：取頭孢菌素A原料藥適量，精密稱定，加入正己烷稀釋至10 mg/mL，過(guò)0.22μm尼龍濾膜，于2～8℃保存。

2 結(jié)果

2.1 專屬性考察

將對(duì)照品溶液和供試品溶液分別進(jìn)樣分析，待測(cè)物質(zhì)峰形良好，拖尾因子為1.5，溶劑、樣品基質(zhì)和待測(cè)物質(zhì)分離均良好，溶劑和樣品基質(zhì)均不干擾待測(cè)物質(zhì)檢測(cè)。

2.2 定量限與檢測(cè)限

以正己烷為溶劑，取對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋，以信噪比(S/N)為10～30時(shí)的濃度作為待測(cè)物質(zhì)的定量限；以信噪比(S/N)為3～8時(shí)的濃度作為待測(cè)物質(zhì)的檢測(cè)限。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 線性范圍和精密度

以正己烷為溶劑，將待測(cè)物質(zhì)配制成濃度為10、20、30、40、50、100 ng·mL-1的溶液，進(jìn)樣分析。以異硫氰酸甲酯的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以各質(zhì)量濃度對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制曲線，線性回歸方程為y=174033.5902x-364.7213，線性相關(guān)系數(shù)(r)為0.9968。選擇50 ng·mL-1的溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)行精密度測(cè)試，RSD值為6.79%。

2.4 準(zhǔn)確度

取頭孢菌素A原料藥，精密稱定，分別加入低、中、高3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，過(guò)0.22μm尼龍濾膜，進(jìn)行加樣回收率試驗(yàn)。每個(gè)濃度平行配制3份?；厥章式Y(jié)果見(jiàn)表2。

表2 異硫氰酸甲酯的回收率結(jié)果(n=3)

3 結(jié)論

目前報(bào)道的氣相色譜法或氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)異硫氰酸酯類化合物使用的色譜柱多為強(qiáng)極性色譜柱[6,8-10]，少部分使用中等極性[5,7]或弱極性色譜柱[11]。異硫氰酸甲酯在強(qiáng)極性色譜柱上峰形良好，且保留時(shí)間適中，與各溶劑分離均良好，在弱極性色譜柱上保留較弱，導(dǎo)致保留時(shí)間較短，存在與部分低沸點(diǎn)溶劑難分離的可能性。本試驗(yàn)對(duì)三種型號(hào)、不同極性(DB-WAXUI、DB-FFAP、HP-5MSUI)的色譜柱進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，使用強(qiáng)極性色譜柱(DB-WAXUI、DB-FFAP)進(jìn)行分析時(shí)，峰形良好，拖尾因子為1.1，保留時(shí)間為5.990min，但頭孢菌素A原料藥與異硫氰酸甲酯分離不佳，對(duì)檢測(cè)造成干擾；使用弱極性色譜柱(HP-5MSUI)進(jìn)行分析時(shí)，峰形良好，拖尾因子為1.5，保留時(shí)間為2.841min，且與頭孢菌素A原料藥分離良好。故在綜合考慮色譜柱極性對(duì)分離度的影響、分析時(shí)間長(zhǎng)短等因素的情況下，選擇HP-5MSUI毛細(xì)色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm)進(jìn)行試驗(yàn)。

使用HP-5MSUI毛細(xì)色譜柱進(jìn)行分析時(shí)，由于異硫氰酸甲酯在此色譜柱上保留較弱，部分低沸點(diǎn)溶劑與其分離不佳。本實(shí)驗(yàn)對(duì)兩種低沸點(diǎn)溶劑(二氯甲烷、正己烷)進(jìn)行對(duì)比考察：二氯甲烷與異硫氰酸甲酯分離不佳，干擾檢測(cè)，經(jīng)調(diào)整升溫程序等色譜條件依舊難以達(dá)到良好的分離度；正己烷與異硫氰酸甲酯分離良好，且無(wú)雜峰干擾檢測(cè)，故選擇正己烷作為本實(shí)驗(yàn)的溶劑。

本文建立了檢測(cè)一種頭孢類藥物原料藥中殘留異硫氰酸甲酯含量的檢測(cè)方法。該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便且準(zhǔn)確可靠，適用于頭孢菌素A原料藥中殘留異硫氰酸甲酯的含量測(cè)定，為頭孢類藥物的質(zhì)量控制以及用藥安全提供了技術(shù)支持。