占麗琴 方 磊 羅 艷 孫 輝 丁 野*

1.湖南省藥品檢驗(yàn)研究院(湖南藥用輔料檢驗(yàn)檢測中心)，湖南 長沙 410001；2.湖南省藥品質(zhì)量評價(jià)工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙 410001

赤芍為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.或川赤芍PaeoniaveitchiiLynch的干燥根，味苦、微寒；有清熱涼血、散瘀止痛的功效[1]，臨床常用的赤芍品規(guī)主要有生赤芍、炒赤芍和酒赤芍等。目前報(bào)道多為赤芍的化學(xué)成分及藥理研究，其炮制品炒赤芍的相關(guān)研究較少[2-3]。本試驗(yàn)進(jìn)行薄層鑒別水分、總灰分、浸出物、含量測定研究，為炒赤芍的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立及質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC20-AT 高效液相色譜儀(檢測器DAD)、色譜柱 Welch LP C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、色譜工作站 Empower、Lecia DM2500。

1.2 材料 芍藥苷對照品(批號：110736-201842，純度：97.4%)赤芍對照藥材(批號：121093-201804)均購自中國食品藥品檢定研究院。

實(shí)驗(yàn)用樣品共15批次(批號：190501、190523、19100722-1、19100722-2、19100722-3、Y20191001、Y20191002、Y20191003、2019100042、0191005、201910006、2019050081、2019102125、2019102126、2019102127)，來自不同生產(chǎn)企業(yè)及使用單位，產(chǎn)地為安徽及內(nèi)蒙古，經(jīng)湖南省藥品檢驗(yàn)研究院中藥所羅艷副主任中藥師鑒定為炒赤芍。部分樣品如圖1所示。

圖1 炒赤芍部分樣品圖

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀 為類圓形厚片，外表皮棕褐色。切面微黃色，偶有焦斑，皮部窄，木部放射狀紋理明顯，有的有裂隙，質(zhì)硬而脆，氣微香，味微苦、酸澀。

2.2 薄層鑒別 取本品粉末0.5 g，加乙醇 10 mL，振搖 5 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使其溶解，作為供試品溶液。另取赤芍對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。再取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10 μL，對照品溶液4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)。結(jié)果如圖2所示。

1-15：樣品 10 μL;S1:芍藥苷對照品 4 μL；S2：赤芍對照藥材 10 μL 圖2 炒赤芍薄層色譜圖

2.3 水分、總灰分、水溶性浸出物 均按照《中國藥典》2015年版相關(guān)規(guī)定測定。結(jié)果見表1。

表1 炒赤芍水分、總灰分、浸出物測定表

2.4 含量測定

2.4.1 溶液的制備

2.4.1.1 對照品溶液 精密稱取芍藥苷對照品10.24 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品儲備液(199.4752 μg/mL)。精密吸取對照品儲備液適量，加甲醇稀釋成濃度99.7 μg/mL、48.7 μg/mL的對照品溶液。

2.4.1.2 供試品溶液 取本品粗粉約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，浸泡4 h，超聲處理(300 W，30 kHz)20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

2.4.2 色譜條件 色譜柱：Welch LP C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(30∶70)；流速1.0 mL/min；檢測波長為230 nm；柱溫30 ℃。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)，不低于3000。如圖3、圖4所示。

圖3 芍藥苷對照品圖譜

圖4 炒赤芍樣品圖譜

2.4.3 線性關(guān)系考察 精密吸取濃度為1.0508、0.4203、0.1051、0.0420、0.0841 mg/mL的對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為(ng)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程為：y=1202x+22554，r=1。結(jié)果表明：芍藥苷對照品在168.1～10507.5 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見表2、如圖5所示。

圖5 線性關(guān)系擬合圖

表2 線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果表

2.4.4 精密度試驗(yàn) 取同一炒赤芍供試品溶液(批號：2019102125)，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次 10 μL，記錄色譜峰面積，計(jì)算RSD(n=6)為0.6%，表明儀器精密度良好。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一炒赤芍供試品溶液(批號：2019102125)，分別于配制后的0、4、8、12、24 h，精密吸取 10 μL，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜峰面積，計(jì)算RSD(n=6)為0.4%。

2.4.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一炒赤芍供試品溶液(批號：2019102125)，依法制備6份供試品溶液，測定并計(jì)算，結(jié)果分別為0.81%、0.83%、0.82%、0.81%、0.82%，RSD為0.9%。

2.4.7 回收率試驗(yàn) 取同一炒赤芍供試品溶液(批號：2019102125)(含芍藥苷2.0 mg)約 0.25 g(6份)，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入濃度為0.0997 mg/mL的芍藥苷對照品適量(見表3)，依法制備供試品溶液，測定并計(jì)算，結(jié)果平均加樣回收率為100.5%。

表3 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表

2.4.8 樣品含量測定結(jié)果 對收集的15批炒赤芍進(jìn)行了含量測定。結(jié)果見表4。

表4 炒赤芍中芍藥苷含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 薄層鑒別展開劑的考察 實(shí)驗(yàn)中的薄層色譜鑒別增加赤芍對照藥材做對照，用二氯甲烷替代傳統(tǒng)的三氯甲烷做展開劑，取得較好薄層色譜效果，保證方法專屬性亦兼顧了環(huán)保。

3.2 流動相的考察 含量測定實(shí)驗(yàn)中對流動相比例進(jìn)行考察，當(dāng)甲醇-0.05 moL/L磷酸二氫鉀溶液(35∶65)時(shí)供試品的芍藥苷峰存在干擾。當(dāng)流動相甲醇-0.05 moL/L磷酸二氫鉀溶液比例改為30∶70時(shí)，測定芍藥苷峰分離效果好。

3.3 含量測定結(jié)果的討論 該研究中15批次炒赤芍的芍藥苷含量平均值為2.4%，而含量測定結(jié)果顯示(批號：2019102125、2019102126、2019102127)的芍藥苷含量均小于1.0%，結(jié)合調(diào)研及性狀，樣品顏色均為棕黃色，考慮其炒制過程中炮制稍過度，影響了芍藥苷的含量。

本文對15批炒赤芍質(zhì)量進(jìn)行了包括性狀、薄層色譜鑒別、水分、總灰分、浸出物和含量測定等項(xiàng)目的考察，結(jié)果顯示方法可行、操作性強(qiáng)，可以作為炒赤芍的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。