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        混合核苷片在急性胰腺炎大鼠細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)中的作用研究

        2022-07-28 03:01:08章諾貝沈浩劉惠芳
        中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用 2022年11期
        關(guān)鍵詞:核苷單核細(xì)胞免疫抑制

        章諾貝 沈浩 劉惠芳

        感染性胰腺壞死是膿毒癥(acute pancreatitis,AP)晚期的嚴(yán)重問題,并導(dǎo)致AP高死亡率。雖然感染在AP中起主導(dǎo)作用,但AP大鼠死亡的直接原因不是感染本身,而是免疫系統(tǒng)的抑制和全身炎癥反應(yīng)[1,2]。大鼠AgBⅠ(抗原特異性T細(xì)胞激活的先決條件)和CD4+/CD8+比值是AP大鼠細(xì)胞免疫的重要指標(biāo)。新近研究表明,在AP 中發(fā)現(xiàn) AgBⅠ顯著減少[3]。同時(shí),外周血單核細(xì)胞的T細(xì)胞失衡可降低大鼠AP的組織學(xué)評分和存活率[4]。AP中的免疫抑制和由細(xì)胞凋亡引起的外周淋巴細(xì)胞減少與隨后感染并發(fā)癥的發(fā)展有關(guān)[5]。因此需要尋找一種新的方法增強(qiáng)AP的免疫反應(yīng)和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。本研究選擇48只AP 大鼠,旨在評估早期使用混合核苷片對AP免疫調(diào)節(jié)的影響?,F(xiàn)報(bào)告如下。

        1 材料與方法

        1.1 動(dòng)物模型與給藥

        1.1.1 動(dòng)物 成年雄性SPF Sprague-Dawley 大鼠(體重200~250 g)來自南昌大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。所有大鼠都飼養(yǎng)在動(dòng)物護(hù)理設(shè)施中,光/暗周期為12 h,并以標(biāo)準(zhǔn)商業(yè)飲食和隨意飲水喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)程序經(jīng)南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),并按照1983年赫爾辛基宣言的原則進(jìn)行。

        1.1.2 鼠AP模型建立 實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食12 h,但可以自由飲水。所有大鼠均在密閉室中以4% 異氟醚(雅培實(shí)驗(yàn)室,上海,中國)2 L/min 氧氣進(jìn)行麻醉誘導(dǎo),并在 2% 異氟醚 2 L/min 氧氣中維持手術(shù)麻醉。AP 大鼠模型是通過將 1 ml/kg 體重的5%?;悄懰徕c(STC)溶液(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,USA)標(biāo)準(zhǔn)化逆行輸注到膽胰管中引起的。將生理鹽水 (20 ml/kg) 注射到背部皮下以補(bǔ)償手術(shù)后的體液流失。

        1.1.3 給藥 混合核苷片組給予混合核苷片,20 mg/片,3片/次,3次/d,研磨成粉后配蒸餾水10 ml后喂服,共14 d。在整個(gè)治療過程中,對照組使用相同質(zhì)量的淀粉配相同體積的蒸餾水喂服,共14 d。喂服。

        1.2 檢測與監(jiān)測 大鼠檢測從AP模型建立當(dāng)天開始,并在給藥后第15天再次開始。在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中,大鼠在喂服藥物后進(jìn)行了為期30 d的監(jiān)測或直至死亡(以先發(fā)生者為準(zhǔn))。在整個(gè)喂藥過程和30 d時(shí)間內(nèi),記錄感染率,包括膿毒癥、腹腔內(nèi)膿腫;記錄死亡率。

        1.3 細(xì)胞免疫測定 在AP模型建立當(dāng)天和混合核苷片口服后第15、30天采集血樣后進(jìn)行分析。使用異硫氰酸熒光素標(biāo)記的抗CD14(MultiSciences Biotech Co,上海)和藻紅蛋白標(biāo)記的抗AgBⅠ(MultiSciences Biotech Co,上海),通過流式細(xì)胞術(shù)(Becton Dickinson,Heidelberg,德國)測定單核細(xì)胞上AgBⅠ的表達(dá)。CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+也通過流式細(xì)胞術(shù)測量。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用單變量方差檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用Fisher 精確概率法檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞免疫指標(biāo)比較 組內(nèi)比較:對照組大鼠第0、15、30天CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、AgBⅠ組內(nèi)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。混合核苷片組大鼠第15、30天CD3+、CD4+、CD8+、AgBⅠ均高于本組第0天,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);混合核苷片組大鼠第15、30天CD4+/CD8+有所增加,但組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。組間比較:第0天,兩組大鼠CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、AgBⅠ組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。第15、30天,混合核苷片組大鼠CD3+、CD4+、CD8+、AgBⅠ均高于對照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩組大鼠CD4+/CD8+比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

        表1 兩組不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞免疫指標(biāo)比較()

        表1 兩組不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞免疫指標(biāo)比較()

        注:與對照組比較,aP<0.05;與本組第0天比較,bP<0.05

        2.2 兩組感染及死亡情況比較 第15天,混合核苷片組膿毒癥、腹腔內(nèi)膿腫發(fā)生率分別為8.33%、4.17%,均低于對照組的50.00%、66.67%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);第30天,混合核苷片組膿毒癥、腹腔內(nèi)膿腫發(fā)生率分別為4.17%、4.17%,均低于對照組的83.33%、83.33%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?;旌虾塑掌M死亡率為8.33%,低于對照組的70.83%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

        表2 兩組感染和死亡情況比較[只(%)]

        3 討論

        混合核苷片可增強(qiáng)機(jī)體機(jī)能,使細(xì)胞順利的進(jìn)行代謝。然而,混合核苷片對AP免疫功能、感染并發(fā)癥和大鼠預(yù)后的影響尚不清楚。本研究表明,混合核苷片可改善AgBⅠ的表達(dá),并降低 AP 大鼠的感染率。

        在最近的研究中,AP 中的單核細(xì)胞 AgBⅠ 表達(dá)和 CD4+/CD8+被視為 AP 大鼠急性期免疫反應(yīng)指標(biāo),單核細(xì)胞 AgBⅠ表達(dá)在病程初期時(shí)減弱,并與免疫功能受損AP 大鼠的病情嚴(yán)重程度有關(guān)[6]。本研究中,AP中AgBⅠ表達(dá)在AP模型建立時(shí)明顯較低,表明大鼠在疾病早期處于以循環(huán)淋巴細(xì)胞功能下降為特征的免疫抑制狀態(tài)。免疫抑制發(fā)生在AP早期階段,例如AgBⅠ的抑制,可能與AP 期間的感染并發(fā)癥密切相關(guān)。研究報(bào)道,在AP 時(shí),免疫抑制在早期即發(fā)生,在出現(xiàn)器官功能障礙的大鼠中,AgBⅠ陽性單核細(xì)胞的比例在發(fā)病初期較低,或在監(jiān)測期間迅速下降[7]。有學(xué)者指出,單核細(xì)胞 AgBⅠ表達(dá)可預(yù)測AP大鼠早期發(fā)生的器官功能障礙風(fēng)險(xiǎn),且AP大鼠的免疫抑制出現(xiàn)的早且發(fā)展迅速[8]。

        本研究中,第14天,混合核苷片組AgBⅠ表達(dá)提高表明免疫抑制在炎癥損傷緩解后解除。然而,對照組中AgBⅠ表達(dá)在第30天無明顯變化,表明AP在30 d內(nèi)免疫抑制持續(xù)存在。認(rèn)為這一結(jié)果與過度炎癥反應(yīng)和隨后的高感染率有關(guān),在一定程度上導(dǎo)致免疫抑制和炎癥反應(yīng)失衡。與對照組相比,混合核苷片組第15、30天AgBⅠ表達(dá)顯著增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。混合核苷片提高了AP 大鼠的CD4+/CD8+,組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這表明混合核苷片可能保留炎癥反應(yīng)并避免抗炎階段免疫功能的大量喪失?;旌虾塑掌瑸楹铣扇梭w核酸和多種輔酶的前體物質(zhì)之一,是細(xì)胞活動(dòng)的重要物質(zhì),參與體內(nèi)核酸代謝、能量代謝和核蛋白的合成,可調(diào)整機(jī)體的免疫能力,具有修復(fù)受損細(xì)胞、增強(qiáng)淋巴細(xì)胞免疫功能的作用。

        本研究于30 d觀察期內(nèi)檢測了AP大鼠的免疫功能,以更好地了解混合核苷片是否可以改善免疫功能。將AgBⅠ表達(dá)與感染并發(fā)癥進(jìn)行對比分析,以更好地了解AP大鼠免疫抑制與臨床結(jié)果之間的時(shí)間關(guān)系。

        值得注意的是,混合核苷片組AgBⅠ水平在第15天有較大提升,與對照組相比保持較高水平,并伴隨著第30天感染率下降。研究指出,單核細(xì)胞群中低AgBⅠ表達(dá)細(xì)胞的百分占比是膿毒癥發(fā)展的可靠預(yù)測指標(biāo)[9,10]。本研究發(fā)現(xiàn),與對照組相比,接受混合核苷片治療的大鼠第30天感染率顯著下降。

        綜上所述,混合核苷片可以增強(qiáng)免疫反應(yīng),提高感染防御能力,降低AP大鼠的感染率和死亡率。

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