石柳柳，許振，吳志意，趙金龍，雷佳琦，吳艷△

經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入（PCI）是治療冠心病的有效手段之一，但術(shù)后再狹窄是影響其長(zhǎng)期療效的重要因素，新生內(nèi)膜形成是PCI術(shù)后再狹窄的主因［1］。近年有研究發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)脈血管壁外膜特別是中外膜交界處存在c-kit 陽(yáng)性（c-kit+）細(xì)胞，當(dāng)血管受到損傷刺激時(shí)，這些c-kit+細(xì)胞可向內(nèi)皮下層遷移并合成大量細(xì)胞外基質(zhì)，參與新生內(nèi)膜形成［2-3］。因此，探索c-kit+細(xì)胞向新生內(nèi)膜遷移的機(jī)制將有助于了解PCI術(shù)后再狹窄的機(jī)制及尋找新的靶點(diǎn)和治療策略。研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)刺激迷走神經(jīng)減弱交感神經(jīng)活性，可改變血管內(nèi)皮功能紊亂，激活膽堿能抗炎系統(tǒng)，抑制動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展［4-5］。但是迷走神經(jīng)在血管損傷后新生內(nèi)膜形成中的作用還不明確，電刺激迷走神經(jīng)能否通過(guò)調(diào)控血管壁c-kit+細(xì)胞的遷移而影響新生內(nèi)膜的形成，值得探究。因此，本研究采用大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷所致血管狹窄模型，觀察電刺激迷走神經(jīng)對(duì)血管壁c-kit+細(xì)胞遷移到血管損傷處并參與新生內(nèi)膜形成的作用及機(jī)制，為尋求血管狹窄及PCI術(shù)后再狹窄的新的治療靶點(diǎn)和治療策略提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 42只SPF級(jí)雄性SD大鼠購(gòu)自湖北醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，其中24只12周齡大鼠用于動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)，18只6～8周齡大鼠用于提取原代c-kit+細(xì)胞。大鼠由專人飼養(yǎng)，在溫度（23±2）℃、相對(duì)濕度（55±10）%、晝夜交替各12 h的受控條件下自由進(jìn)食和飲水。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)和護(hù)理的指南進(jìn)行，經(jīng)湖北醫(yī)藥學(xué)院機(jī)構(gòu)動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)審查并批準(zhǔn)后，根據(jù)機(jī)構(gòu)規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料及試劑 乙酰膽堿（Ach）、DMEM/F-12培養(yǎng)基、胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich；c-kit一抗、平滑肌22α（SM22α）蛋白一抗、α7 煙堿樣乙酰膽堿受體（α7nAChR）一抗、內(nèi)參（GAPDH）一抗、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗、Alexa Fluor 488 偶聯(lián)二抗和Alexa Fluor 594 偶聯(lián)二抗均購(gòu)自英國(guó)Abcam；c-kit+細(xì)胞篩選磁珠購(gòu)自德國(guó)Miltenyi Biotec；α7nAChR拮抗劑購(gòu)自美國(guó)Selleck；大鼠白細(xì)胞介素（IL）-6、腫瘤壞死因子（TNF）-α酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)試劑盒購(gòu)自中國(guó)欣博盛；異氟烷購(gòu)自中國(guó)瑞沃德；戊巴比妥鈉購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich?；A(chǔ)培養(yǎng)基：100 mL 無(wú)酚紅的DMEM/F-12培養(yǎng)基含有胎牛血清10 mL、0.1 mmol/L β-巰基乙醇、100 U/mL青鏈霉素和2 mmol/L 谷氨酰胺。干細(xì)胞培養(yǎng)基：100 mL 基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入白血病抑制因子，其終濃度為10μg/L。血小板衍生因子-BB（PDGF-BB）誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞（SMC）分化培養(yǎng)基：在100 mL 基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入PDGF-BB，終濃度為20μg/L。細(xì)胞培養(yǎng)所用的T25培養(yǎng)瓶和24孔板等耗材購(gòu)自美國(guó)Thermo 公司。熒光顯微鏡拍照系統(tǒng)（BX53+DP74）購(gòu)自日本奧林巴斯（Olympus）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組 24只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組（左頸總動(dòng)脈球囊損傷組）和迷走神經(jīng)刺激組（左頸總動(dòng)脈球囊損傷+左側(cè)迷走神經(jīng)刺激組），每組8只。

1.2.2 大鼠左頸總動(dòng)脈球囊損傷模型制備 模型組和迷走神經(jīng)刺激組大鼠行異氟烷麻醉后，仰臥位固定。去除頸部被毛后，于胸骨上端至頜下皮膚做2～3 cm切口。經(jīng)鈍性分離肌層后，游離出一段3～5 cm長(zhǎng)的左頸總動(dòng)脈，再沿左頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)心端繼續(xù)鈍性分離，以暴露頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈分叉，在頸外動(dòng)脈靠頭部的位置打結(jié)，近心端用動(dòng)脈夾夾閉左頸總動(dòng)脈。然后用血管剪在頸外動(dòng)脈近心端上做一個(gè)垂直切口，用血管擴(kuò)張器將動(dòng)脈切口輕輕擴(kuò)開(kāi)，用鑷子輕輕夾住準(zhǔn)備好的球囊桿部，將球囊插入動(dòng)脈切口。取下動(dòng)脈夾，無(wú)出血后繼續(xù)插入導(dǎo)管，直至導(dǎo)管標(biāo)記位置（距離球囊端約4 cm）。打開(kāi)三通開(kāi)關(guān)，經(jīng)導(dǎo)管向球囊內(nèi)注入約0.02 mL的無(wú)菌生理鹽水，關(guān)閉三通開(kāi)關(guān)，使球囊保持膨脹狀態(tài)。轉(zhuǎn)動(dòng)導(dǎo)管的同時(shí)，將其慢慢拉出，至動(dòng)脈切口位置，重復(fù)3次。最后，打結(jié)以封閉動(dòng)脈切口，取下動(dòng)脈夾，恢復(fù)血供，縫合筋膜和皮膚。假手術(shù)組大鼠經(jīng)麻醉、頸部去毛、分離出左頸外動(dòng)脈后，直接縫合筋膜和皮膚，不進(jìn)行球囊損傷操作。

1.2.3 電刺激迷走神經(jīng) 因左側(cè)迷走神經(jīng)發(fā)出支配心臟的傳出纖維較少，且以支配房室結(jié)為主，刺激時(shí)對(duì)心率及血壓影響相對(duì)較小，故選擇刺激左側(cè)迷走神經(jīng)。迷走神經(jīng)刺激組在左側(cè)頸總動(dòng)脈球囊損傷后72 h 開(kāi)始刺激，刺激儀（北京眾實(shí)迪科技發(fā)展有限責(zé)任公司，型號(hào)：YLS-9A）參數(shù)設(shè)置如下：電流0.5 mA，電壓2 V，單向波，波寬0.3 ms，波間隙49.7 ms，頻率20 Hz，間斷時(shí)間270 s（即每5 min刺激30 s，休息270 s），持續(xù)4 h。模型組僅連接刺激儀，但不通電刺激。假手術(shù)組既不連接刺激儀，也不通電刺激。

1.2.4 HE染色及免疫組織化學(xué)染色 術(shù)后14 d，各組均取3只大鼠，麻醉，開(kāi)胸暴露游離心臟，經(jīng)左心室插入灌流針并固定，剪開(kāi)右心耳，生理鹽水沖洗，再灌注4%多聚甲醛進(jìn)行前固定，大鼠在此過(guò)程中死亡。之后取左頸總動(dòng)脈損傷處血管，4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，選血管中段位置的切片，HE染色觀察血管內(nèi)膜平均增厚情況，利用Image J軟件計(jì)算內(nèi)膜厚度，通過(guò)免疫組織化學(xué)染色觀察c-kit+細(xì)胞在血管壁中的分布，利用Image-Pro plus軟件計(jì)算光密度值。

1.2.5 大鼠血清中炎性因子TNF-α和IL-6的含量測(cè)定 術(shù)后14 d，各組3 只大鼠心臟取血，全血4 ℃靜置30 min 后，1 000 r/min于4 ℃離心10 min，分離得到血清，通過(guò)ELISA檢測(cè)血清中TNF-α和IL-6含量。

1.2.6 血管壁c-kit+細(xì)胞的分離、純化及鑒定 利用外膜組織貼塊法獲取血管壁外膜細(xì)胞［6］。取另外18 只SD 大鼠，以2.5 mL/kg劑量腹腔注射2%戊巴比妥鈉麻醉大鼠。仰臥位固定后，打開(kāi)胸腹腔，分離主動(dòng)脈后迅速置于預(yù)冷的D-Hank’s液中。加入0.2%（約2 mL）Ⅱ型膠原酶浸泡血管，37 ℃恒溫?fù)u床120 r/min消化15 min。擦除內(nèi)皮細(xì)胞，用鐘表鑷小心仔細(xì)地剝離中膜，并舍棄。將剩余的血管外膜用眼科剪剪成約1 mm×1 mm×1 mm 大小的組織塊，將其均勻地平鋪至T25 培養(yǎng)瓶底部，將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)倒置，置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中。3 h后，輕輕將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)，小心加入干細(xì)胞培養(yǎng)基3 mL覆蓋組織塊，正置于培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)72 h 后，于相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。待大部分組織塊邊緣有細(xì)胞遷移萌出，更換培養(yǎng)基，此后每72 h更換1次培養(yǎng)基。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)到約80%時(shí)，胰酶消化后按照磁珠篩選說(shuō)明書(shū)，分選得到c-kit+細(xì)胞，并經(jīng)c-kit+免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定。

1.2.7 篩選后c-kit+細(xì)胞純度分析及α7nAChR 在細(xì)胞中的表達(dá) 將磁珠篩選后的細(xì)胞按1×104/孔的密度接種在24 孔板中，在干細(xì)胞培養(yǎng)基中生長(zhǎng)至60%～80%融合時(shí)，通過(guò)免疫熒光法檢測(cè)c-kit 標(biāo)志物的表達(dá)。每孔隨機(jī)讀取5 個(gè)視野拍照，統(tǒng)計(jì)c-kit 陽(yáng)性細(xì)胞的百分率。另外，將磁珠篩選后的c-kit+細(xì)胞按1×104/孔的密度接種在24 孔板中，在干細(xì)胞培養(yǎng)基中增殖融合至60%～80%時(shí)，通過(guò)免疫熒光法檢測(cè)α7nAChR在c-kit+細(xì)胞中的表達(dá)。

1.2.8 Transwell 實(shí)驗(yàn)觀察Ach 對(duì)c-kit+細(xì)胞遷移的影響 取在干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下的c-kit+細(xì)胞，分組進(jìn)行Ach干預(yù)，包括對(duì)照組（不加入Ach）、1×10-5mol/L Ach 組、1×10-8mol/L Ach組及1×10-5mol/L Ach+α7nAChR拮抗劑組，每24 h換液1次，共培養(yǎng)5 d。c-kit+細(xì)胞處理48 h后，Transwell小室放置于預(yù)先準(zhǔn)備好的24 孔板中，按上述條件培養(yǎng)箱中過(guò)夜，向Transwell 小室下室中加入600μL 含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的干細(xì)胞培養(yǎng)基。用無(wú)血清的DMEM/F-12培養(yǎng)液重懸各組細(xì)胞，取200 μL 細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)約1×105個(gè)）加至Transwell 的上室。48 h后去除下室中的培養(yǎng)液，將小室置于4%多聚甲醛中固定15 min，擦去小室內(nèi)室膜上的細(xì)胞，0.1%結(jié)晶紫溶液染色10 min，PBS 漂洗后，顯微鏡下觀察，每孔隨機(jī)讀取5個(gè)視野拍照，統(tǒng)計(jì)并分析。

1.2.9 Western blot檢測(cè)Ach對(duì)c-kit+細(xì)胞分化的影響 c-kit+細(xì)胞在SMC 分化培養(yǎng)基條件下，給予Ach 處理，具體細(xì)胞分組同1.2.8。取c-kit+細(xì)胞裂解液進(jìn)行SDS-PAGE 電泳，24 V恒壓轉(zhuǎn)PVDF 膜45 min。5%脫脂牛奶室溫封閉30 min，1×TBST洗膜3次，每次5 min。內(nèi)參GAPDH和SM22α抗體分別按照1∶5 000 和1∶1 000 稀釋。室溫孵育2 h，1×TBST 洗3 次后，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔二抗室溫孵育30 min，1×TBST 洗3 次后進(jìn)行顯影。通過(guò)Image J 軟件進(jìn)行半定量分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，Graphpad Prism 8.0 軟件作圖。符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，2 組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠死亡情況 納入24只大鼠，最終死亡3只大鼠，模型組死亡1只，迷走神經(jīng)刺激組死亡2只。

2.2 各組大鼠新生內(nèi)膜增厚程度的變化 HE染色結(jié)果顯示，假手術(shù)組、模型組和迷走神經(jīng)刺激組的內(nèi)膜與中膜厚度比分別為（5.27±2.41）%、（211.87±12.47）%和（127.00±19.78）%，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=175.734，P＜0.05）。與假手術(shù)組相比較，模型組大鼠新生內(nèi)膜厚度增加；與模型組相比，迷走神經(jīng)刺激組新生內(nèi)膜增厚程度減小，見(jiàn)圖1。

Fig.1 Comparison of neointimal thickness in the injured carotid artery between the three groups of rats(HE staining)圖1 各組大鼠頸總動(dòng)脈損傷處血管新生內(nèi)膜厚度比較（HE染色）

2.3 各組大鼠c-kit+在血管壁中分布及數(shù)量變化 免疫組織化學(xué)染色顯示，假手術(shù)組無(wú)新生內(nèi)膜形成，ckit+細(xì)胞主要分布于血管壁外膜及中外膜交界處；模型組新生內(nèi)膜及外膜中均有c-kit+細(xì)胞分布，見(jiàn)圖2。模型組和迷走神經(jīng)刺激組新生內(nèi)膜中的c-kit+平均光密度值分別為0.057±0.010 和0.019±0.001。與模型組相比，迷走神經(jīng)刺激組新生內(nèi)膜中c-kit+細(xì)胞表達(dá)數(shù)量減少（t=6.184，P＜0.05）。

Fig.2 Expression of c-kit+in the injured carotid artery between the three groups of rats(DAB staining)圖2 各組大鼠頸總動(dòng)脈損傷處c-kit+細(xì)胞（DAB染色）

2.4 各組大鼠血清中炎性因子TNF-α 和IL-6 的水平變化 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清中TNF-α和IL-6 的水平均升高；與模型組比較，迷走神經(jīng)刺激后TNF-α和IL-6水平均降低，見(jiàn)表1。

Tab.1 The serum levels of TNF-α and IL-6 in the three groups表1 各組血清TNF-α和IL-6水平（ng/L，±s）

Tab.1 The serum levels of TNF-α and IL-6 in the three groups表1 各組血清TNF-α和IL-6水平（ng/L，±s）

＊＊P＜0.01；a與假手術(shù)組比較，b與模型組比較，P＜0.05。

組別假手術(shù)組模型組迷走神經(jīng)刺激組F n3 3 3 TNF-α 77.24±0.80 111.03±0.67a 90.11±0.76b 1 587.493＊＊IL-6 160.11±1.80 314.86±2.39a 233.72±2.46b 3 590.572＊＊

2.5 篩選后c-kit+細(xì)胞純度分析及α7nAChR在細(xì)胞中的表達(dá) 免疫熒光染色顯示，篩選后的血管壁外膜細(xì)胞大多數(shù)均表達(dá)c-kit（圖3A），c-kit+細(xì)胞占比達(dá)89%，α7nAChR在c-kit+細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)（圖3B）。

2.6 各組c-kit+細(xì)胞遷移能力變化 Transwell 實(shí)驗(yàn)表明，對(duì)照組、1×10-8mol/L Ach 組、1×10-5mol/L Ach組和1×10-5mol/L Ach+α7nAChR 拮抗劑組細(xì)胞遷移數(shù)目（單位：個(gè)/視野）分別為102±7、66±4、57±4 和83±8，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=28.929，P＜0.05）。與對(duì)照組比較，Ach各組c-kit+細(xì)胞遷移能力均降低，且以1×10-5mol/L Ach 抑制c-kit+細(xì)胞遷移效果最明顯，給予α7nAChR 拮抗劑處理后，細(xì)胞遷移能力較1×10-5mol/L Ach組升高，見(jiàn)圖4。

2.7 各組c-kit+細(xì)胞分化能力的變化 Western blot結(jié)果顯示，ACh 處理后，SM22α 的表達(dá)量高于對(duì)照組，給予α7nAChR 拮抗劑處理后，SM22α 的表達(dá)量較1×10-5mol/L ACh 組降低（F=354.144，P＜0.05），見(jiàn)圖5。

3 討論

PCI 是目前臨床上治療冠心病的一個(gè)重要手段［7］。然而，術(shù)后再狹窄問(wèn)題嚴(yán)重影響療效［8］。自主神經(jīng)系統(tǒng)由交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)（迷走神經(jīng)）組成，兩者相互拮抗，在維持血管的結(jié)構(gòu)、功能方面發(fā)揮重要作用［9］。迷走神經(jīng)張力降低是各種心血管疾病的共同特點(diǎn)，電刺激迷走神經(jīng)已在心力衰竭等心血管疾病治療中發(fā)揮重要作用［10］。目前在臨床上，神經(jīng)電刺激憑借安全、經(jīng)濟(jì)、不良反應(yīng)少等優(yōu)勢(shì)成為一種新的物理治療手段［11］。本研究發(fā)現(xiàn)電刺激迷走神經(jīng)可減輕血管損傷后的狹窄程度。

Fig.3 Characteristics of c-kit+cells and α7nAChR detected by immunofluorescence staining圖3 免疫熒光鑒定c-kit+細(xì)胞和α7nAChR表達(dá)特征

Fig.4 Changes of c-kit+cell migration in each groups(crystal violet staining,×100)圖4 各組c-kit+細(xì)胞遷移能力變化（結(jié)晶紫染色，×100）

Fig.5 The expression levels of SM22α detected by Western blot assay in different groups圖5 Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞SM22α表達(dá)情況

目前研究表明，PCI 術(shù)后由于動(dòng)脈損傷導(dǎo)致的平滑肌細(xì)胞增殖及新內(nèi)膜形成是血管再狹窄的重要因素之一［12-13］。已有研究發(fā)現(xiàn)，在血管壁內(nèi)（特別是外膜和中膜與外膜交界處）存在著能分化成平滑肌細(xì)胞的血管壁干細(xì)胞，這些細(xì)胞在受到損傷刺激時(shí)可向內(nèi)皮下層遷移、增殖，并合成大量細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致新內(nèi)膜形成［14-16］。c-kit+細(xì)胞是一種重要的血管壁干細(xì)胞，在血管受到損傷刺激時(shí)，可向內(nèi)皮下層遷移，參與新生內(nèi)膜形成［17-18］。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色分析發(fā)現(xiàn)，迷走神經(jīng)刺激組的新生內(nèi)膜中c-kit+細(xì)胞數(shù)量較模型組減少，表明電刺激迷走神經(jīng)抑制c-kit+細(xì)胞向新生內(nèi)膜遷移，進(jìn)而減輕新生內(nèi)膜厚度。體外分離純化的原代c-kit+細(xì)胞，給予迷走神經(jīng)遞質(zhì)Ach處理后，細(xì)胞遷移能力下降，這一結(jié)論與體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)吻合。大量研究表明，Ach 可作用于α7nAChR 受體依賴的信號(hào)途徑激活抗炎系統(tǒng)［19-21］。為進(jìn)一步研究Ach 抑制c-kit+細(xì)胞遷移的機(jī)制，本研究利用α7nAChR 拮抗劑探討Ach 對(duì)ckit+細(xì)胞遷移的影響是否也與α7nAChR 有關(guān)。首先證實(shí)c-kit+細(xì)胞能夠表達(dá)α7nAChR，并發(fā)現(xiàn)Ach+α 7nAChR 拮抗劑組的c-kit+細(xì)胞遷移數(shù)較Ach 組增多，表明Ach 可作用于α7nAChR 受體抑制c-kit+細(xì)胞的遷移。本研究中的迷走神經(jīng)刺激組血清中炎性因子TNF-α和IL-6的表達(dá)明顯低于模型組，進(jìn)一步證實(shí)電刺激迷走神經(jīng)促進(jìn)Ach 釋放，而Ach 可進(jìn)一步與α7nAChR 結(jié)合，從而達(dá)到激活抗炎系統(tǒng)［22］，抑制血管損傷后新生內(nèi)膜形成。

有研究表明，小鼠股動(dòng)脈損傷后，血管壁外膜處的Sca-1+干細(xì)胞從外膜遷移至內(nèi)膜，參與血管重塑，并在到達(dá)內(nèi)膜前發(fā)生向平滑肌細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化現(xiàn)象［14］。本研究體外觀察Ach 對(duì)c-kit+細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞分化的影響，發(fā)現(xiàn)Ach促進(jìn)c-kit+細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞分化，同時(shí)給予α7nAChR 拮抗劑能抑制c-kit+細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞的分化。這一結(jié)果表明，Ach 是通過(guò)與α7nAChR結(jié)合而促進(jìn)c-kit+細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞分化的。結(jié)合Ach 能夠直接抑制c-kit+細(xì)胞遷移的作用，筆者推測(cè)，電刺激迷走神經(jīng)使得c-kit+細(xì)胞遷移至新內(nèi)膜的數(shù)量減少可能與Ach促進(jìn)血管壁ckit+細(xì)胞在到達(dá)新生內(nèi)膜之前已分化為收縮型平滑肌細(xì)胞有關(guān)。

綜上所述，電刺激迷走神經(jīng)可通過(guò)抑制c-kit+細(xì)胞向血管損傷新生內(nèi)膜遷移而減輕PCI術(shù)后內(nèi)膜增生的不良癥狀。其作用機(jī)制與Ach 結(jié)合α7nAChR激活抗炎系統(tǒng)、促進(jìn)其向平滑肌細(xì)胞分化有關(guān)。但本研究的局限在于體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中僅觀察了動(dòng)脈損傷時(shí)c-kit+細(xì)胞在血管壁的分布，未對(duì)外膜c-kit+細(xì)胞向新內(nèi)膜遷移給予示蹤標(biāo)記，也未對(duì)體內(nèi)給予Ach 與電刺激迷走神經(jīng)效果的比較；且機(jī)制方面僅檢測(cè)了α7nAChR 這一種Ach 的受體，未檢測(cè)Ach 的另外一種受體（M 型受體）是否也參與其中。此外，今后仍需進(jìn)一步對(duì)血管損傷后電刺激迷走神經(jīng)對(duì)c-kit+細(xì)胞遷移和分化的信號(hào)通路的研究，為電刺激迷走神經(jīng)應(yīng)用于PCI 術(shù)后再狹窄提供新的理論基礎(chǔ)。