湯天元，趙永虎

（1.甘肅省甘州區(qū)堿灘畜牧獸醫(yī)工作站；2.甘肅省甘州區(qū)畜牧獸醫(yī)工作站，甘肅張掖734000）

近年來由于活畜調運頻繁，加大了疫病發(fā)生的風險。為了防止疫病的流行和發(fā)生，2018年農業(yè)農村部發(fā)布了2號公告，根據(jù)《中華人民共和國動物防疫法》（以下簡稱《動物防疫法》）等法律法規(guī)，為了減少畜禽長距離移動，降低動物疫病傳播風險，維護養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)安全和畜禽產(chǎn)品質量安全。并規(guī)定畜禽養(yǎng)殖場（戶）出售或者運輸畜禽前，應當按照《動物防疫法》《動物檢疫管理辦法》規(guī)定，向當?shù)貏游镄l(wèi)生監(jiān)督機構申報檢疫，提交動物檢疫申報單和相關動物疫病實驗室檢測報告等申報材料。經(jīng)檢疫檢測合格的，方可調運。各個省市區(qū)縣也出臺了相關的政策法規(guī)。還有的省市還出臺了更為嚴格的政策法規(guī)，就給獸醫(yī)實驗室增加了許多責任和任務。

甘州區(qū)做為甘肅省的養(yǎng)殖大縣，牛羊數(shù)量大，牲畜調運頻繁。這樣就增加了實驗室人員的工作量，同時也增加了實驗經(jīng)費。以中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所研制的抗體檢測試劑盒為例，口蹄疫病毒O型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒原來是2400元，10塊板，按試劑盒說明可檢測100至200份血樣?，F(xiàn)在用改進型口蹄病毒O型液相阻斷ELISA疫抗體檢測試劑盒是1600元，5塊板。按試劑盒說明可檢測血樣50至100份。通過近年來試驗室工作，改進試驗方法，重新設計試驗步驟，我們實驗室每塊酶標板可做80份血樣，每個試劑盒則可做400份樣本。

1 實驗材料與方法

1.1 以中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所研制的改進型口蹄病毒O型液相阻斷ELISA疫抗體檢測試劑盒是為例?？蓹z測50—100份血樣。以牛羊血樣檢測為例。按照試劑盒說明書的樣品布局圖，有兩種布局圖，可檢測樣品50份、100份。

1.2 這種類型的試驗布局是為了檢測畜群的抗體效價水平能否達到保護水平。

1.3 此試驗每份血樣的檢測成本為32-16元。

2 改進試驗方法，重新設計試驗步驟。

2.1 同樣用中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所研制的改進型口蹄病毒O型液相阻斷EIISA疫抗體檢測試劑盒。

2.2 江蘇新康醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的一次性反應板。

如圖1所示，在每孔里面加入配制好的1：25的PBS液75ul，然后加入待檢樣品25ul.隨后依次混勻稀釋，每次提取25ul依次往下稀釋三次，至26倍稀釋。提取50ul加入酶標板。按圖2所示的布局圖加樣

圖1 96孔一次性反應板布局圖

圖2 96孔酶標板檢測80份樣品布局圖

然后按試劑盒說明書操作完成實驗。這樣就可以每個酶標板就可以加樣80份血樣。

2.3 在2.2中提取50ul稀釋完成的樣本加到酶標板，還需要加入50ul的病毒抗原，這就達到1：128了。

2.4 根據(jù)試劑盒說明書判定試驗結果。

2.5 此試驗布局適用于對外調牲畜抗體水平檢測，直接可根據(jù)結果確定群體保護率。每塊酶標板可加樣80份。

2.6 此試驗每份血樣的檢測成本為4元。

3 討論

根據(jù)試劑盒說明書，抗體效價≥1：128，保護率達99%以上，效價≤1：16不保護，效價在1：22～90之間，50%保護，這只說明了單個樣本的保護，不能說明群體的保護。而改進后重新設計的試驗方法測出的則為群體中有多少樣本的保護在99%以上，就可直接算出群體保護率。這樣就節(jié)約了成本。