張旭飛，羅運(yùn)鳳，高 潔，陳云志*，蔣志濱

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，貴州 貴陽 550025；2.貴州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；3.貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

潰瘍性結(jié)腸炎是一種局限于結(jié)腸黏膜和黏膜下層的特發(fā)性炎癥[1]，中醫(yī)學(xué)按癥狀統(tǒng)歸為“久痢”范疇[2]。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為“肝與大腸相通”，這與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)“肝腸軸”學(xué)說有異曲同工之處，肝與大腸在生理病理上互為因果[3]。肝臟硬脂酰輔酶A去飽和酶1(SCD1)、腸道5-羥色胺(5-HT)均與潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4]，課題組前期通過實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)肝郁脾虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠既有結(jié)腸病理改變，也存在肝臟脂質(zhì)代謝異常；痛瀉要方干預(yù)后可上調(diào)結(jié)腸5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體(SERT)的蛋白表達(dá)，減少結(jié)腸5-HT分泌，抑制炎性因子表達(dá)，發(fā)揮抗炎作用[5-6]。

肝臟SCD1參與脂質(zhì)代謝過程，是調(diào)節(jié)飽和脂肪酸轉(zhuǎn)化為不飽和脂肪酸的關(guān)鍵酶。細(xì)胞自噬與中醫(yī)“氣”的功能密切關(guān)聯(lián)，自噬功能失調(diào)會使內(nèi)生實(shí)邪積聚，健脾補(bǔ)氣藥物可調(diào)節(jié)“氣”的功能影響細(xì)胞自噬水平，以維持內(nèi)環(huán)境代謝穩(wěn)態(tài)[7]。外周5-HT作用于肝臟受體調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，而肝細(xì)胞自噬與肝臟脂質(zhì)代謝相互作用[8]。因此，本實(shí)驗(yàn)將通過觀察痛瀉要方對肝郁脾虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血清5-HT及肝臟5-HT2A受體(5-HT2AR)、SCD1、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1(SREBP-1)、微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3)、酵母Atg6同系物(Beclin1)蛋白表達(dá)的影響，聚焦肝臟脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)，進(jìn)一步探討痛瀉要方對緩解期肝郁脾虛型潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 動物 SPF級雄性SD大鼠，60只，體質(zhì)量(200±10)g，購自長沙市天勤生物技術(shù)有限公司，動物生產(chǎn)許可證號SCXK(湘)2014-0011。實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)倫理審查委員會認(rèn)證。

1.2 藥物 從北京同仁堂貴陽藥店有限責(zé)任公司購買中藥飲片，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院嚴(yán)福林講師鑒定合格。按痛瀉要方經(jīng)典配伍比例(6∶4∶3∶2)稱取炒白術(shù)、炒芍藥、炒陳皮、防風(fēng)，在鍋中用蒸餾水浸泡半小時后，武火煮沸，文火煎煮30 min，將水煎液濃縮至100 mL，高、中、低劑量分別含生藥量為1、0.5、0.25 g/mL，置于4 ℃冰箱備用。

1.3 試劑 2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)(美國Sigma公司，貨號SLCG2384)；柳氮磺胺吡啶(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，貨號E1525058)；5-HT ELISA試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，貨號E-EL-0033c)；蘇木素染液、伊紅染液(武漢賽維爾生物技術(shù)有限公司，貨號G1005-1、G1001)；油紅O(合肥博美生物科技有限責(zé)任公司，貨號YO7512)；兔多抗GAPDH(杭州賢至生物科技有限公司，貨號AB-P-R001)；兔多抗5HT2AR[愛必信(上海)生物科技有限公司，貨號Abs138420]；鼠單抗SCD1[艾博抗(上海)貿(mào)易有限公司，貨號Ab19862]；兔多抗SREBP-1、Beclin1(江蘇親科生物研究中心有限公司，貨號Af6283、Af5128)；兔單抗LC3(美國Cell Signaling Technology公司，貨號2775)。

1.4 儀器 微型高速離心機(jī)(美國Labnet公司)；離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司)；電熱恒溫培養(yǎng)箱(日本ASONE公司)；全自動酶標(biāo)儀(美國Thermo Fisher Scientific公司)；水平搖床(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；磁力攪拌器(江蘇省金壇市中大儀器廠)；轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)(德國徠卡公司)；TSJ-Ⅱ型全自動封閉式組織脫水機(jī)、BMJ-Ⅲ型包埋機(jī)、PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀(常州市中威電子儀器有限公司)。

2 方法

2.1 模型建立 60只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，分別稱體質(zhì)量并標(biāo)記，隨機(jī)分為正常組(8只)和造模組(52只)。參照經(jīng)典的肝郁脾虛型潰瘍性結(jié)腸炎造模法，采取TNBS/乙醇溶液灌腸聯(lián)合束縛應(yīng)激+飲食失節(jié)，建立動物疾病模型[9-10]。將造模組大鼠禁錮于鼠籠中，并將其雙前肢反捆至背部以限制其活動，每天捆綁束縛2次，每次進(jìn)行45 min，并隔日足量或半量喂養(yǎng)飼料，模擬飲食失節(jié)，連續(xù)造模2周。將造模大鼠禁食1天后，使用10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射進(jìn)行麻醉，利用灌腸管將100 mg/kg TNBS與0.25 mL 50%乙醇混合溶液緩慢注入距離大鼠肛門約8 cm處深的結(jié)腸部位，固定大鼠尾部片刻，短暫夾閉肛門，使大鼠保持平躺姿勢，蘇醒后送回動物房繼續(xù)飼養(yǎng)，灌腸1次；正常組大鼠則以上述操作注入相同體積的0.9%氯化鈉生理鹽水。

2.2 分組及給藥 60只大鼠隨機(jī)分為正常組8只，造模組52只，其中造模組在進(jìn)行捆綁束縛及灌腸后，由于骨折、感染、相互撕咬等情況死亡10只，另外抽取2只進(jìn)行病理觀察評價。確定造模成功后，把40只造模組大鼠隨機(jī)分為模型組、柳氮磺胺吡啶組及痛瀉要方高、中、低劑量組，每組8只，給予藥物灌胃。痛瀉要方高、中、低劑量組分別按每天10、5、2.5 g/kg劑量灌胃(按人與大鼠體表面積折算[11]，相當(dāng)于60 kg成人每日劑量的12、6、3倍)痛瀉要方；柳氮磺胺吡啶組按每天0.3 g/kg灌胃柳氮磺胺吡啶；正常組、模型組均以等量0.9% 氯化鈉水溶液進(jìn)行灌胃，各給藥組大鼠連續(xù)給藥3周，每天1次。

2.3 肝郁脾虛型潰瘍性結(jié)腸炎動物模型評價指標(biāo)

2.3.1 宏觀表征 主要從大鼠精神狀態(tài)、攝食改變、活動規(guī)律、皮毛色澤、體質(zhì)量變化、糞便形態(tài)等方面進(jìn)行觀察，是評價動物模型的基本要素以及評定動物證候?qū)傩缘姆椒?，同時是探討病證結(jié)合動物模型的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[12]。宏觀表征是動物四診信息的直接體現(xiàn)，肝郁脾虛證動物會出現(xiàn)皮毛干枯無光澤、靜臥少動、乏力、食少便溏等宏觀表征，可作為評估肝郁脾虛證的四診指標(biāo)[13]。

2.3.2 疾病活動指數(shù)(DAI)評分 潰瘍性結(jié)腸炎的臨床表征主要為體質(zhì)量減輕、稀便、便血，通過對模型動物這3項(xiàng)指標(biāo)的評分，可以初步了解動物病癥發(fā)展的嚴(yán)重程度，是評價動物潰瘍性結(jié)腸炎模型的重要方法[14]。

2.3.3 行為學(xué)實(shí)驗(yàn) 曠場實(shí)驗(yàn)，利用動物在空曠場地中對新異環(huán)境的恐懼，與對新異事物的探究本性所產(chǎn)生的沖突行為，來評價模型的情緒狀態(tài)[15]；高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)，利用動物對新異環(huán)境的探究本性和對高懸敞開臂的恐懼形成矛盾沖突行為來考察動物的焦慮狀態(tài)，是動物焦慮行為學(xué)研究中較為經(jīng)典的測試[16]。不同疾病肝郁脾虛證在臨床中常出現(xiàn)情志類癥狀，因此在動物模型中常選用曠場實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)指標(biāo)評價肝郁脾虛證[17]。

2.3.4 結(jié)腸組織病理學(xué) 結(jié)腸病理顯示炎性細(xì)胞浸潤、杯狀細(xì)胞減少、腺體破壞及潰瘍形成等一系列變化，可確定潰瘍性結(jié)腸炎動物模型成立[18]。

2.4 宏觀表征觀察和DAI評分 在造模前、給藥前、給藥3周后，觀察大鼠精神狀態(tài)、毛發(fā)色澤、行為體態(tài)；記錄大鼠體質(zhì)量、大便性狀，采用鄰聯(lián)甲苯胺法檢測糞便隱血，作DAI評分。DAI評分參照文獻(xiàn)[19]標(biāo)準(zhǔn)，DAI=(體質(zhì)量下降分?jǐn)?shù)+大便性狀分?jǐn)?shù)+便血分?jǐn)?shù))/ 3，見表1。

2.5 曠場實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)觀察大鼠行為狀態(tài) 曠場實(shí)驗(yàn)，將大鼠放置于曠場中央?yún)^(qū)域，記錄其5 min內(nèi)總運(yùn)動距離和中央?yún)^(qū)域停留時間。高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)，記錄大鼠5 min內(nèi)開臂停留時間、進(jìn)入開臂次數(shù)、閉臂停留時間、進(jìn)入閉臂次數(shù)并計(jì)算開臂停留時間、進(jìn)入開臂次數(shù)百分比。

表1 大鼠DAI評分標(biāo)準(zhǔn)Tab.1 DAI scoring criteria for rats

2.6 大鼠組織標(biāo)本采集 給藥、DAI評分及行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，注射2%戊巴比妥鈉(2.5 mL/kg)進(jìn)行麻醉，隨后腹主動脈取血，靜置30 min后，3 000 r/min低溫離心15 min，分離收集血清，置于-80 ℃冰箱存放備用。摘取大鼠結(jié)腸、肝臟組織，分別4%多聚甲醛儲存及-80 ℃保存。

2.7 HE、油紅O染色法分別觀察大鼠結(jié)腸與肝臟組織病理學(xué)變化 大鼠結(jié)腸組織、肝臟組織經(jīng)4%多聚甲醛固定、脫水、包埋、切片，分別進(jìn)行HE染色和油紅O染色，光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)和肝臟組織脂質(zhì)沉積，并對結(jié)腸組織進(jìn)行評分，評分標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[20]，見表2。

表2 潰瘍性結(jié)腸炎炎癥分級評分標(biāo)準(zhǔn)Tab.2 Grading and scoring standards for ulcerative colon

2.8 ELISA法檢測大鼠血清5-HT水平 按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行檢測，在96孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行操作，經(jīng)過顯色后在酶標(biāo)儀內(nèi)以450 nm波長依序檢測各孔OD值并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品檢測目標(biāo)的濃度。

2.9 Western blot檢測大鼠肝臟5-HT2AR、SCD1、SREBP-1、LC3、Beclin1蛋白表達(dá) 按照試劑盒說明提取肝臟蛋白后，取上清液分裝并置于-20 ℃保存，根據(jù)蛋白樣品OD值，用BCA試劑盒檢測蛋白濃度。配置10% SDS-PAGE凝膠，上樣后進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜，用TBST封閉2 h，加入內(nèi)參GAPDH一抗(1∶1 000)，5-HT2AR、SCD1、SREBP1、LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin1一抗(1∶1 000)，4 ℃孵育過夜，TBST洗膜，加入相應(yīng)的二抗(1∶50 000)，37 ℃搖床孵育2 h。最后顯色曝光，掃描膠片，用IPP分析膠片灰度值。

3 結(jié)果

3.1 宏觀表征觀察和DAI評分 正常組大鼠精神活躍，毛發(fā)整齊光澤，活動性強(qiáng)，灌胃時抵抗強(qiáng)烈，糞便呈褐色顆粒狀且干稀適中；模型組大鼠時而易怒狂躁，時而萎靡不振，出現(xiàn)拖尾，毛發(fā)凌亂且色澤干枯晦暗，扎堆少動且蜷伏角落，灌胃時抵抗減弱，糞便稀溏伴有膿血；給藥組大鼠精神狀態(tài)良好但偶有易怒表現(xiàn)，毛發(fā)雖凌亂但逐漸恢復(fù)光澤，活動增加，時喜扎堆，糞便雖時有稀溏但逐漸成形，質(zhì)地變干。

各組大鼠DAI評分結(jié)果顯示，給藥前，各造模組之間無顯著性差異(P>0.05)，與正常組比較，各造模組大鼠DAI評分均升高(P<0.01)；給藥3周后，各給藥組大鼠DAI評分均降低(P<0.01)，以痛瀉要方中劑量組及柳氮磺胺吡啶組評分降低最為明顯，而痛瀉要方高劑量組次之。見表3。

表3 各組大鼠DAI評分(分，Tab.3 DAI scores of rats in each

3.2 曠場實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn) 曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠總運(yùn)動距離減少，中央?yún)^(qū)域停留時間降低(P<0.01)；與模型組比較，各給藥組大鼠總運(yùn)動距離增加，中央?yún)^(qū)域停留時間增加(P<0.05，P<0.01)，以痛瀉要方中劑量組和柳氮磺胺吡啶組最為明顯。高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠開臂停留時間和進(jìn)入開臂次數(shù)百分比均降低(P<0.01)；與模型組比較，各給藥組大鼠開臂停留時間和進(jìn)入開臂次數(shù)百分比均升高(P<0.05，P<0.01)，以痛瀉要方中劑量組和柳氮磺胺吡啶組最為明顯。見表4。

表4 各組大鼠曠場實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.4 Results of open field test and elevated plus maze test of rats in each

3.3 大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)變化 正常組大鼠結(jié)腸組織黏膜層、黏膜下層、肌層及漿膜層形態(tài)結(jié)構(gòu)完整且界限明晰，固有層內(nèi)大腸腺排列較為密集，未見壞死和炎癥細(xì)胞浸潤；模型組大鼠大量腸段形成潰瘍灶，累及結(jié)腸全層，正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失，由大量滲出纖維素、黏液、壞死組織和大量中性粒細(xì)胞替代，炎癥細(xì)胞浸潤累及肌層；給藥組大鼠結(jié)腸組織黏膜層、黏膜下層、肌層及漿膜層結(jié)構(gòu)較完整，固有層內(nèi)富含管狀腸腺。其中痛瀉要方高、中劑量組和柳氮磺胺吡啶組黏膜固有層內(nèi)少量中性粒細(xì)胞或淋巴細(xì)胞浸潤；痛瀉要方中劑量組部分固有層和黏膜下層內(nèi)見毛細(xì)淋巴管；痛瀉要方低劑量組部分腸腺變性、壞死及擴(kuò)張，部分區(qū)域出現(xiàn)潰瘍灶，累及結(jié)腸全層，可見大量中性粒細(xì)胞浸潤。見圖1。

圖1 各組大鼠結(jié)腸組織HE染色(×100)Fig.1 HE staining of rat colon tissue in each group(×100)

潰瘍性結(jié)腸炎炎癥評分結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠炎癥評分升高(P<0.01)；與模型組比較，痛瀉要方高、中劑量組和柳氮磺胺吡啶組大鼠炎癥評分降低(P<0.01)。見表5。

表5 各組大鼠炎癥評分結(jié)果Tab.5 Results of inflammatory score of rats in each

3.4 大鼠肝臟組織脂質(zhì)沉積變化 正常組大鼠肝臟組織中細(xì)胞核淺染，未見明顯橘紅色脂滴；與正常組比較，模型組大鼠肝臟組織中脂滴形成增多，細(xì)胞漿可見大量大泡樣橘紅色脂滴，形態(tài)較大，形狀不規(guī)則且排列緊密，脂肪變性明顯；與模型組比較，痛瀉要方高、中劑量組及柳氮磺胺吡啶組肝臟組織脂滴水平減少，脂肪變性程度減輕。見圖2。

圖2 各組大鼠肝臟組織油紅O脂類染色(×400)Fig.2 Oil red O lipid staining of rats in each group(×400)

3.5 大鼠血清5-HT水平 如表6所示，模型組大鼠血清5-HT水平高于正常組(P<0.01)；與模型組比較，各給藥組大鼠血清5-HT水平均降低(P<0.01)，痛瀉要方中劑量組和柳氮磺胺吡啶組降低趨勢最為明顯，痛瀉要方高劑量組次之。

表6 各組大鼠血清5-HT水平Tab.6 Serum 5-HT level of rats in each

3.6 大鼠肝臟5-HT2AR、SCD1、SREBP-1、LC3、Beclin1蛋白表達(dá) 與正常組比較，模型組大鼠肝臟SCD1蛋白表達(dá)降低(P<0.01)，5-HT2AR、SREBP-1、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表達(dá)升高(P<0.01)；與模型組比較，痛瀉要方中劑量組和柳氮磺胺吡啶組大鼠肝臟5-HT2AR蛋白表達(dá)降低(P<0.01)，痛瀉要方高、中劑量組和柳氮磺胺吡啶組肝臟SCD1蛋白表達(dá)升高(P<0.05，P<0.01)，SREBP-1、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表達(dá)降低(P<0.05，P<0.01)。見圖3、表7。

注：A為正常組，B為模型組，C為痛瀉要方高劑量組，D為痛瀉要方中劑量組，E為痛瀉要方低劑量組，F(xiàn)為柳氮磺胺吡啶組。圖3 各組大鼠肝臟5-HT2AR、SCD1、SREBP-1、LC3、Beclin1蛋白電泳圖Fig.3 Electrophoresis images for 5-HT2AR，SCD1，SREBP-1，LC3 and Beclin1 proteins in the liver of rats in each group

表7 各組大鼠肝臟5-HT2AR、SCD1、SREBP-1、LC3、Beclin1蛋白表達(dá)Tab.7 Protein expressions of 5-HT2AR，SCD1，SREBP-1，LC3 and Beclin1 in the liver of rats in each

4 討論

本實(shí)驗(yàn)中模型大鼠與正常大鼠比較，宏觀表征改變，DAI評分較高；探究特性和好奇心行為減少；結(jié)腸組織全層形成潰瘍灶，炎癥評分升高，提示肝郁脾虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型造模成功。經(jīng)痛瀉要方給藥后能改善大鼠肝郁脾虛癥狀，修復(fù)結(jié)腸病理損傷，抑制炎癥反應(yīng)，對結(jié)腸具有保護(hù)作用。

外周5-HT及肝臟5-HT2AR介導(dǎo)著肝臟脂肪變性，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)[21-22]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ痛笫蟾闻K5-HT2AR表達(dá)升高，與血清5-HT變化趨勢一致，肝臟脂質(zhì)沉積；痛瀉要方通過調(diào)控外周5-HT作用于肝臟5-HT2AR表達(dá)，減輕脂質(zhì)沉積，從而影響肝郁脾虛型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠肝臟脂質(zhì)代謝。

肝臟SCD1參與脂質(zhì)代謝過程，是將飽和脂肪酸轉(zhuǎn)化為不飽和脂肪酸的關(guān)鍵酶，當(dāng)二者平衡失調(diào)時會造成肝細(xì)胞應(yīng)激損傷，加重腸道炎癥反應(yīng)[23]。SREBP-1與肝臟脂肪變性密切關(guān)聯(lián)，是評價脂質(zhì)代謝的關(guān)鍵指標(biāo)[24]。SREBP-1可以激活SCD1參與脂質(zhì)合成，二者間的表達(dá)具有相關(guān)性[25]，抑制肝臟SCD1表達(dá)會導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)代謝改變，影響脂肪生成轉(zhuǎn)錄因子SREBP-1表達(dá)[26]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ痛笫蟾闻K脂質(zhì)沉積，SCD1表達(dá)降低，而SREBP-1表達(dá)升高，結(jié)腸黏膜損傷和炎癥反應(yīng)加重；痛瀉要方通過調(diào)節(jié)肝臟SCD1和SREBP-1表達(dá)，使飽和脂肪酸轉(zhuǎn)化為不飽和脂肪酸，平衡肝臟脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)，進(jìn)而減輕肝細(xì)胞應(yīng)激損傷，緩解潰瘍性結(jié)腸炎結(jié)腸黏膜損傷和炎癥反應(yīng)。

Beclin1是自噬啟動的調(diào)節(jié)因子[27]，而LC3是反映自噬激活與否的重要標(biāo)志物，包括LC3Ⅰ和激活的LC3Ⅱ。生理狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)LC3Ⅰ呈常規(guī)表達(dá)，當(dāng)各種應(yīng)激反應(yīng)激活自噬時，LC3Ⅰ轉(zhuǎn)化為自噬膜形式的LC3Ⅱ[28]，其蛋白表達(dá)已成為判斷自噬水平的主要標(biāo)準(zhǔn)[29]。脂滴是主要的脂質(zhì)儲存形式[30]，自噬參與脂滴的分解代謝[31]，改善肝臟脂質(zhì)代謝紊亂[32]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ痛笫蟾闻K脂質(zhì)沉積，LC3Ⅱ、Beclin1表達(dá)升高，提示肝臟脂質(zhì)代謝紊亂會激活細(xì)胞自噬功能；痛瀉要方通過平衡肝臟脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)以及改變細(xì)胞自噬水平，影響腸道病理損傷。

綜上所述，潰瘍性結(jié)腸炎肝郁脾虛證的證候?qū)嵸|(zhì)，一方面可能在于外周5-HT作用于肝臟5-HT2AR，抑制SCD1表達(dá)，升高SREBP-1表達(dá)，使飽和脂肪酸無法轉(zhuǎn)化為不飽和脂肪酸，影響二者動態(tài)平衡，導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)沉積增加，出現(xiàn)脂質(zhì)代謝紊亂，造成肝細(xì)胞應(yīng)激損傷，加重腸道病理損傷和炎癥反應(yīng)；另一方面可能在于脾失健運(yùn)，肝失疏泄致使膏脂蘊(yùn)結(jié)于肝，出現(xiàn)肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝紊亂，激活肝細(xì)胞自噬功能。綜合各項(xiàng)檢測數(shù)據(jù)，痛瀉要方中劑量組給藥效果接近柳氮磺胺吡啶組，且優(yōu)于高、低劑量組。由此可知痛瀉要方中劑量相對藥效活性最佳，其補(bǔ)脾柔肝的機(jī)制可能是通過調(diào)控外周5-HT作用于肝臟5-HT2AR表達(dá)，維持肝臟脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)以及改變肝細(xì)胞自噬水平，從而改善結(jié)腸組織病理變化，影響緩解期肝郁脾虛型潰瘍性結(jié)腸炎。