楊 丹，徐家法

（六盤(pán)水師范學(xué)院，貴州六盤(pán)水 553000）

茶葉是山茶科、山茶屬灌木，嫩枝無(wú)毛。葉革質(zhì)，橢圓形，茶葉指茶樹(shù)的葉子或芽，能夠用開(kāi)水直接泡飲，茶葉飲品被譽(yù)為“世界三大飲料之一”。茶葉含兒茶素、咖啡堿、肌醇和葉酸等成分，有利于人體健康。貴州屬于亞熱帶高原季風(fēng)濕潤(rùn)氣候，冬無(wú)嚴(yán)寒、四季分明、雨熱同季，得天獨(dú)厚的地理環(huán)境以及適宜的氣候，使得貴州省成為國(guó)內(nèi)綠茶主要產(chǎn)區(qū)。

茶葉中對(duì)人體有益的物質(zhì)較多，其中茶多酚，氨基酸最為重要。茶多酚是茶葉中一類(lèi)羥基酚類(lèi)化合物的總稱(chēng)，茶多酚類(lèi)化合物又稱(chēng)為類(lèi)黃酮化合物，是茶葉中一類(lèi)主要的化學(xué)成分[1]。茶多酚中又屬兒茶素最重要，其具有多種生物作用。根據(jù)李寧[2]的研究，兒茶素對(duì)化學(xué)致癌物為誘因的各種器官腫瘤均有防治作用。根據(jù)吳瓊潔[3]、劉波靜等[4]的研究顯示，茶多酚有調(diào)整血脂及抗脂質(zhì)氧化作用；閻金海等[5]研究發(fā)現(xiàn)茶多酚有抗癌，抑癌作用。而茶氨酸具有加強(qiáng)腦波中α波強(qiáng)度，使人產(chǎn)生輕松感和提高記憶力等作用[6]；YOKOGOSHI等[7]研究顯示，茶氨酸具有降血壓的作用。故探索茶葉理化性質(zhì)對(duì)研究茶葉的藥用功效具有非常高的價(jià)值和實(shí)際意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實(shí)驗(yàn)所用樣品與試劑如表1和表2所示。

表1 實(shí)驗(yàn)樣品

表2 實(shí)驗(yàn)試劑

1.2 儀器與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)所用儀器設(shè)備如表3所示。

表3 實(shí)驗(yàn)主要儀器與設(shè)備

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品處理、樣液的制備

（1）樣品處理。分別取某地明前茶、明后茶和水城春3種樣品100 g，用磨碎機(jī)磨碎，并使用60目篩子篩選，收集篩選好的樣品粉末，使用磨口錐形瓶加蓋保存。

（2）樣液制備。分別在電子分析天平上稱(chēng)取3種處理好的樣品1.5 g（準(zhǔn)確至0.001 g），放置于3個(gè)標(biāo)號(hào)且干燥好的圓底燒瓶中，加入沸騰蒸餾水100 mL，立即移入沸水浴，浸提40 min（每10 min搖晃一次，使得茶葉充分浸提），再將浸提液及茶渣減壓過(guò)濾（濾紙干燥并稱(chēng)取質(zhì)量），用沸蒸餾水洗滌茶渣數(shù)次，濾液冷卻后用蒸餾水定容于250 mL容量瓶，得到3瓶250 mL的樣液備用。

1.3.2 氨基酸總量的測(cè)定

（1）測(cè)定方法。本文采用國(guó)標(biāo)GB/T 8314—2013[8]方法，氨基酸在pH 8.0的環(huán)境下與茚三酮共熱形成紫色絡(luò)合物，在570 nm處有特定吸收峰。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作。稱(chēng)取質(zhì)量250 mg的谷氨酸，溶解，定容至25 mL容量瓶中，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，濃度為10 mg/mL，再?gòu)膬?chǔ)備液中分別取0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL和3.0 mL于50 mL容量瓶中并定容，配成濃度分別為0 mg/mL、0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.3 mg/mL、0.4 mg/mL、0.5 mg/mL和0.6 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。吸取谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液各1 mL于一組7只25 mL的比色管中，加入0.5 mL pH為8.0的磷酸緩沖溶液和0.5 mL 2%的茚三酮溶液，沸水浴15 min，待冷卻后定容至25 mL，放置10 min，在570 nm處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

（3）樣品測(cè)定。各取1.0 mL制備好的3種樣液，加入0.5 mL pH為8.0的磷酸緩沖溶液和0.5 mL 2%的茚三酮溶液，沸水浴15 min，待冷卻后定容至25 mL，放置10 min，在570 nm處測(cè)定吸光度，每組樣品取3個(gè)平行樣，取平均值。按照公式計(jì)算游離氨基酸總量：

游離氨基酸總量（以茶氨酸或谷氨酸計(jì)）=

式中：C為根據(jù)測(cè)定的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查到的茶氨酸或谷氨酸的毫克數(shù)，mg；V1為試液總量，mL；V2為測(cè)定用試液量，mL；m為試樣用量，g；ω為試樣干物質(zhì)含量，%。

1.3.3 茶多酚的測(cè)定

（1）測(cè)定方法。本文采用GB/T 8313—2018中方法[9]，多酚物質(zhì)溶于70%乙醇，福林酚試劑氧化茶多酚中的-OH，形成藍(lán)色絡(luò)合物，在675 nm處有獨(dú)特吸收峰。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作。稱(chēng)取0.110 g（準(zhǔn)確至0.001 g）沒(méi)食子酸，定容于100 mL容量瓶，再分別取0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL和5.0 mL于100 mL容量瓶中，得到濃度為0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL 和 50.0 μg/mL 的標(biāo)液，各取以上濃度標(biāo)液1.0 mL于10 mL容量瓶中，加入5.0 mL 10%福林酚，4.0 mL 7.5% Na2CO3，定容至10 mL，室溫放置60 min，675 nm處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

（3）樣液制作與測(cè)定。分別取磨碎試樣0.2 g（準(zhǔn)確到0.000 1 g）于圓底燒瓶中，加入70 ℃的70%甲醇，并且70 ℃水浴，回流提取4 h，過(guò)濾定容于10 mL容量瓶，取提取液1.0 mL于100 mL容量瓶中，定容。取此樣液1.0 mL于10 mL容量瓶中，加入5.0 mL 10%福林酚，4.0 mL 7.5% Na2CO3，定容至10 mL，室溫放置60 min，675 nm處測(cè)定吸光度。每個(gè)樣液3組平行樣，取平均值。按照公式計(jì)算茶多酚含量：

式中：C為根據(jù)試樣測(cè)得吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出茶多酚相應(yīng)含量，μg/mL；K為沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的斜率；m為樣品干物質(zhì)含量，%；m1為樣品質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與分析

2.1 氨基酸總量的測(cè)定

根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)方法，以谷氨酸吸光度為縱坐標(biāo)，濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如圖1所示。

圖1 谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到線(xiàn)性回歸方程y=0.014x+0.009 4，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 2，以國(guó)標(biāo)方法測(cè)定樣品吸光度，代入方程計(jì)算含量，得到表1樣品氨基酸含量。

由表4可知，清明前的樣品氨基酸含量明顯比清明后的高，說(shuō)明季節(jié)不同明顯影響茶葉的氨基酸含量，而與水城春比較可知，待測(cè)樣品氨基酸含量明顯低于水城春。

表4 3種樣品氨基酸含量

2.2 茶多酚含量的測(cè)定

根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)方法測(cè)得茶多酚含量相關(guān)數(shù)據(jù)，以沒(méi)食子酸吸光度為縱坐標(biāo)，濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，制作沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如圖2所示。

圖2 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到線(xiàn)性回歸方程y=85.047x+0.138 0，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 2，以國(guó)標(biāo)方法測(cè)定樣品吸光度，代入方程計(jì)算含量，得到表2樣品茶多酚含量。

根據(jù)表5可知，清明前的茶多酚含量高于清明后的，證明季節(jié)對(duì)樣品茶多酚含量有影響，與水城春比，樣品茶葉茶多酚含量明顯低于水城春。

表5 茶多酚含量

3 結(jié)論

所測(cè)樣品明前茶、明后茶和水城春氨基酸含量分別為65.89%、46.19%和82.85%；明前茶、明后茶和水城春樣品茶多酚含量分別為13.83%、10.76%和26.02%?？傮w上，農(nóng)戶(hù)自制茶葉與市場(chǎng)售賣(mài)水城春相比，氨基酸和茶多酚含量均較少，但農(nóng)戶(hù)自制茶葉明前茶的氨基酸和茶多酚含量均高于明后茶。