高 偉 (福州市第一醫(yī)院神經(jīng)外科，福建 福州 350009)

腦出血是中老年高血壓患者一種常見的嚴(yán)重腦部并發(fā)癥，指非外傷性腦實質(zhì)內(nèi)血管破裂引起的出血，常見的病因是高血壓、腦動脈硬化、顱內(nèi)血管畸形等，常因用力、情緒激動等因素誘發(fā)，故大多數(shù)患者為在活動中突然發(fā)病[1]。臨床上腦出血發(fā)病十分迅速，主要表現(xiàn)為意識障礙、肢體偏癱、失語等神經(jīng)系統(tǒng)的損害[2]。治療超急性腦梗死的有效性，包括靜脈內(nèi)溶栓或取栓，通常限于缺血事件發(fā)生后6 h內(nèi)，因此快速、準(zhǔn)確的診斷是臨床決策的關(guān)鍵[3]。microRNAs(miRNAs)是一種小的類似于siRNA的分子，由高等真核生物基因組編碼。包括miRNA-602在內(nèi)的許多miRNA已被證明在多種表觀遺傳水平上調(diào)節(jié)基因表達(dá)與中風(fēng)的病理發(fā)生有關(guān)，中樞神經(jīng)特異性蛋白(S100β)蛋白具有廣泛的生物學(xué)活性，在細(xì)胞增生、分化、基因表達(dá)、細(xì)胞凋亡中具有重要作用，影響著神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的生長、增殖、分化，維持鈣穩(wěn)態(tài)[4-5]。然而，尚未有研究探討二者聯(lián)合檢測對急性腦出血患者的診斷價值。因此，本研究探討了miRNA-602聯(lián)合S100β檢測的臨床機制，以期為腦出血患者的早期診斷提供更多依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2019年1月～2021年5月我院收治的70例急性腦出血患者為病例組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)影像學(xué)手段確診為腦出血。②從卒中發(fā)作到入院的時間小于6 h。③年齡30～80歲。④臨床資料完整。排除合并免疫性疾病、創(chuàng)傷、冠狀動脈疾病、器官衰竭、惡性腫瘤和感染等疾病的患者。同時，選擇同期在我院行體檢的60名健康志愿者為對照組，兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。具有可比性。見表1。本研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。

表1 兩組基線資料比較(n)

1.2RT-PCR檢測：在患者入院后立即經(jīng)肘靜脈采集靜脈血5 ml，并立即離心。上清液轉(zhuǎn)移到無核糖核酸酶的EP管中，保存于-80℃冰箱。從血漿中提取總RNA，利用瓊脂糖凝膠電泳法測定RNA完整性。miRNA-602、S100β引物序列見表2。RT-PCR反應(yīng)條件如下：95℃預(yù)變性10 min，然后95℃變性30 s，50℃退火30 s，40個循環(huán)，最后70℃延伸10 min結(jié)束。

1.3神經(jīng)功能缺損評分：在患者入院后即進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分(NIHSS)。NIHSS量表主要用于腦中風(fēng)患者神經(jīng)功能狀態(tài)的評估，對病情合理評估，個體化治療。質(zhì)量表簡潔、可信度高、準(zhǔn)確性高，且具有共通性和低敏感度，其內(nèi)容包括11個評估項目，分別為意識程度、回答問題的能力、遵從指令的能力、眼球運動、視野、面癱、上肢運動功能、下肢運動功能、肢體協(xié)調(diào)功能、感覺、語言、構(gòu)音和忽視，每個項目計分分為3～5個等級，評分范圍0～42分，分?jǐn)?shù)越高表示神經(jīng)功能受損越嚴(yán)重[6]。

表2 miRNA-602、S100β引物序列

2 結(jié)果

2.1兩組患者血清中miRNA-602、S100β的表達(dá)水平：RT-PCR檢測結(jié)果顯示，病例組、對照組患者的miRNA-602相對表達(dá)水平分別為(27.68±1.42)、(6.74±0.52)，S100β相對表達(dá)水平分別為(24.39±2.03)、(6.57±1.03)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；病例組患者血清miRNA-602、S100β的表達(dá)水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2患者血清中miRNA-602、S100β表達(dá)的相關(guān)性分析：Pearson相關(guān)性分析顯示，腦出血患者血清中miRNA-602與S100β的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.769,P<0.001)，且miRNA-602(r=0.512,P<0.001)、S100β(r=0.446,P<0.001)表達(dá)水平也均于NIHSS評分呈顯著正相關(guān)(r=0.446,P<0.001)。見圖1。

圖1 腦出血患者miRNA-602與S100β表達(dá)的相關(guān)性

2.3血清中miRNA-602、S100β檢測對急性腦出血的診斷價值：ROC曲線分析顯示，血清miRNA-602、S100β對急性腦出血診斷的靈敏度分別為52.9%、46.8%，特異度分別為88.4%、76.3%，AUC分別為0.68、0.61，對二者進(jìn)行聯(lián)合檢測后，靈敏度提高至67.8%、特異度提高至81.5%。見表3、圖2。

表3 血清中miRNA-602、S100β檢測對急性腦出血的診斷價值

圖2 miRNA-602、S100β檢測對急性腦出血的診斷價值

3 討論

隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，急性腦出血的發(fā)生率呈明顯上升趨勢，其治療和康復(fù)已成為嚴(yán)重的社會負(fù)擔(dān)。腦出血超急性期的早期診斷極大地影響著患者的治療和管理方案[7]。本研究探討了miRNA-602、S100β作為早期診斷標(biāo)志物的價值。有研究者發(fā)現(xiàn)，S100β蛋白是自噬的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，可能在大腦中動脈閉塞損傷后發(fā)揮重要作用，其主要是通過抑制鞘磷脂合成酶活性，增加神經(jīng)酰胺水平，進(jìn)而上調(diào)p21誘導(dǎo)的細(xì)胞周期阻滯，對腦梗死后的腦組織具有保護(hù)作用[8]。腦缺血損傷時細(xì)胞損傷是一個漸進(jìn)的過程，腦缺血損傷后又出現(xiàn)再灌注損傷而引起腦水腫加重，使血腦屏障通透性進(jìn)一步增高，導(dǎo)致血液中的S100β蛋白增多，同時神經(jīng)細(xì)胞損傷也可能持續(xù)一段時間[9]。腦出血的神經(jīng)損傷源于血腫的原發(fā)性損傷外，更重要的是繼發(fā)性損傷，主要包括腦水腫、腦細(xì)胞的毒性損傷及繼發(fā)性缺血[10-12]。

本研究發(fā)現(xiàn)，急性卒中發(fā)生后，S100β蛋白濃度8～24 h即明顯升高，并在卒中發(fā)生72 h后S100β蛋白濃度隨著病情的好轉(zhuǎn)逐漸下降。許多經(jīng)典的信號通路也被發(fā)現(xiàn)參與了腦梗死的病情進(jìn)展，如miRNA-602介導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡參與了缺血性腦損傷[13]。與此同時，miRNA-602可影響NF-κB與p300的結(jié)合，阻斷NF-κB介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，還可影響P53轉(zhuǎn)移至線粒體的生物學(xué)過程，引起細(xì)胞色素酶的釋放[14]。本研究相關(guān)性分析也發(fā)現(xiàn)，腦出血患者血清中miRNA-602與S100β的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)，且miRNA-602、S100β達(dá)水平也均于NIHSS評分呈顯著正相關(guān)。這表明，miRNA-602與S100β在腦出血的發(fā)生發(fā)展過程中，可能存在著一定的協(xié)同作用，且二者表達(dá)量與患者神經(jīng)功能密切相關(guān)。

綜上所述，miRNA-602及S100β聯(lián)合檢測對急性腦出血有較高的診斷價值，值得臨床推廣。但本研究為單中心研究，且樣本量較小，未來在多中心聯(lián)合的基礎(chǔ)上實施更大樣本量的研究，或能得出更具說服力的證據(jù)。