盧斯霞 胡旭東 高 欣 程 聰 陳 思 （華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢金銀潭醫(yī)院肝病科，湖北省傳染病臨床醫(yī)學(xué)研究中心，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院武漢傳染性疾病診治研究中心，中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所&武漢市金銀潭醫(yī)院感染性疾病與健康聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，武漢 430010）

TGF-β1 是引起纖維化的關(guān)鍵因子，TGF-β1 可激活Smad，從而誘導(dǎo)纖維化相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄和翻譯，導(dǎo)致膠原蛋白（collagen，Col）大量表達(dá)，參與纖維化過(guò)程［1］。近年研究顯示，機(jī)體免疫也參與肝纖維化過(guò)程，肝纖維化患者體內(nèi)存在T淋巴細(xì)胞亞群改變，具有抗炎作用的T 輔助細(xì)胞17（T helper cells 17，Th17）比例提高，而具有抗炎作用的調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（regulatory T cells，Treg）水平則降低［2］。研究顯示，Th17/Treg 平衡受TGF-β/Smad 通路調(diào)控［3］。骨髓間充質(zhì)肝細(xì)胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs）可輕易從骨髓中收集并在體外擴(kuò)增，并分化為多種細(xì)胞類型，且具有免疫耐受優(yōu)勢(shì)，在多種疾病治療中發(fā)揮作用［4］。一項(xiàng)臨床研究顯示，通過(guò)門靜脈給予BMSCs 可緩解乙型肝炎病毒相關(guān)慢性肝衰竭，并保護(hù)肝功能［5］。最新研究發(fā)現(xiàn)BMSCs可緩解由四氯化碳誘導(dǎo)的肝損傷和纖維化［6］。研究顯示，BMSCs 可誘導(dǎo)Th17/Treg 平衡［7］。但BMSCs 對(duì)肝纖維化的影響及作用機(jī)制尚不明確。本文主要分析BMSCs 通過(guò)TGF-β1/Smad 通路對(duì)肝纖維化和免疫情況的影響，為臨床更好地治療肝纖維化提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 SD 大鼠（SPF 級(jí)，雄性，6 周齡，體質(zhì)量210～230 g，北京維通利華動(dòng)物公司）；四氯化碳、TRIzol（美國(guó)Sigma 公司）；DMEM 培養(yǎng)基和牛血清（美國(guó)Gibco-BRL 公司）；Ficoll 密度梯度培養(yǎng)基（德國(guó)Biochrom 公司）；FITC 偶聯(lián)的抗大鼠CD29 抗體、PE偶聯(lián)的抗大鼠CD34抗體以及CYTOMICS FC 500流式細(xì)胞儀（美國(guó)Beckman Coulter 公司）；ELISA 試劑盒、HE染色、Masson染色和TUNEL染色試劑盒（碧云天公司）；Model 680酶標(biāo)儀、PVDF膜（美國(guó)Bio-Rad）；流式細(xì)胞儀及小鼠Treg/Th17 表型抗體試劑（美國(guó)Becton Dickinson 公司）；免疫磁珠（美國(guó)Invitrogen 公司）；組織勻漿機(jī)（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）；PrimeScript-RT 和SYBR Premix Ex Taq 試劑盒（日本TaKaRa 公司）；RIPA 裂解緩沖液（北京Beyotime）；BCA 試劑盒（武漢博斯特生物技術(shù)有限公司）；抗體（美國(guó)Abcam公司）。

1.2 方法

1.2.1 BMSCs 分離、純化和鑒定 采用含10%牛血清的DMEM 沖洗大鼠整脛骨和股骨骨髓，根據(jù)Ficoll 密度梯度培養(yǎng)基說(shuō)明書將沖洗的細(xì)胞重懸于完全培養(yǎng)基，37 ℃、5%CO2孵育14 d。細(xì)胞80%融合時(shí)，磷酸鹽緩沖鹽水洗滌2次并消化，為第一代細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞傳代到第4代時(shí)，分別采用CD29抗體和CD34抗體染色，暗中孵育30 min，流式細(xì)胞術(shù)鑒定。

1.2.2 大鼠分組、建模和干預(yù) 36 只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組和BMSCs 組，每組12 只。模型組和BMSCs 組大鼠根據(jù)文獻(xiàn)［8］構(gòu)建肝纖維化模型：將四氯化碳溶于橄欖油，濃度為10%，腹腔注射，1 ml/（kg·次），2 次/周，連續(xù)8 周，對(duì)照組注射等量生理鹽水。最后1次注射四氯化碳后尾靜脈注射BMSCs（3×106個(gè)），移植后第4周處死大鼠進(jìn)行檢測(cè)［9］。

1.2.3 ELISA 檢測(cè)肝功能 取大鼠尾靜脈血5 ml，300 r/min離心15 min收集上清，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書加入抗體和顯色劑，終止顯色后15 min 內(nèi)酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm處吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算AST和ALT濃度。

1.2.4 HE 染色檢測(cè)肝組織損傷 斷頭處死大鼠，收集肝動(dòng)脈血管組織，多聚甲醛固定48 h，不同濃度乙醇脫水，二甲苯透明處理，石蠟包埋，切片（4 μm）。切片水化后制成玻片標(biāo)本，加入蘇木精孵育5 min，加入0.5%伊紅染色5 min，洗滌后透化，固定，顯微鏡下觀察。

1.2.5 Masson 染色檢測(cè)纖維化 將1.2.4 的玻片標(biāo)本加入Masson 三色染料染色，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書操作，顯微鏡下觀察并拍照，IPP 6.0 圖像分析系統(tǒng)計(jì)算膠原蛋白體積分?jǐn)?shù)（collagen volume fraction，CVF）=膠原蛋白陽(yáng)性藍(lán)色面積/組織總面積×100%。

1.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th17和Treg水平 將外周血經(jīng)過(guò)密度梯度離心后抽吸淋巴細(xì)胞層，獲得單個(gè)淋巴細(xì)胞懸浮液。細(xì)胞用20 μl預(yù)冷的1×BD Mouse Foxp3 緩沖液4 ℃暗室固定30 min，洗滌固定劑并收集細(xì)胞，加入200 μl 通透緩沖液37 ℃避光孵育30 min，透化2 次后洗滌細(xì)胞，與20 μl 小鼠Treg/Th17 表型抗體試劑或?qū)φ湛贵w室溫孵育30 min，洗掉抗體，重懸，F(xiàn)ACSCalibur 流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th17 細(xì)胞和Treg占比。

1.2.7 RT-qPCR 檢測(cè)mRNA 水平 密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞，免疫磁珠分離淋巴細(xì)胞，TRIzol獲得肝組織及淋巴細(xì)胞中總RNA，逆轉(zhuǎn)錄1 μg RNA為cDNA（42 ℃60 min，70 ℃5 min，4 ℃保存）。采用SYBR Green PCR Master Mix 和PCR 檢 測(cè) 系 統(tǒng) 進(jìn) 行qPCR 實(shí)驗(yàn)（95 ℃10 min，40 個(gè)循環(huán)，94 ℃15 s，60 ℃1 min，60 ℃1 min，4 ℃保存）。以GAPDH為內(nèi)參，通過(guò)比較循環(huán)閾值分析mRNA表達(dá)。

兩人在中南海愉快地住了幾天，到北京城看了看，算是開了眼界，見了世面，然后就準(zhǔn)備回湖南老家。臨行前，毛澤東用自己的稿費(fèi)為他們每人做了一套新衣服。

1.2.8 Western blot 檢測(cè)蛋白表達(dá) 勻漿機(jī)均勻研磨肝組織及淋巴細(xì)胞萃取總蛋白，BCA 試劑盒測(cè)量濃度。分別取40 μg 總蛋白采用10%聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳（PAGE，80～120 V，90 min）。100 mV 恒定電壓下濕轉(zhuǎn)至PVDF 膜，5%牛血清白蛋白（BSA）中室溫孵育1 h，加入一抗（1∶500 稀釋）4 ℃孵育過(guò)夜，洗滌，添加二抗室溫孵育1 h，化學(xué)發(fā)光試劑顯影，以GAPDH 為內(nèi)參，Image J 軟件分析目標(biāo)條帶灰度值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以±s表示。多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BMSCs 鑒定結(jié)果 流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，CD29 和CD90 呈陽(yáng)性，CD34 呈陰性，提示BMSCs 分離成功（圖1）。

圖1 流式細(xì)胞術(shù)鑒定BMSCsFig.1 Identification of BMSCs by flow cytometry

2.2 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠肝功能指標(biāo)的影響 模型組大鼠ALT 和AST 水平顯著高于對(duì)照組（P<0.05），BMSCs 組大鼠ALT 和AST 水平顯著低于模型組（P<0.05，表1）。

表1 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠肝功能指標(biāo)的影響（±s，n=12，U/L）Tab.1 Effect of BMSCs on liver function indexes of liver fibrosis model mice（±s，n=12，U/L）

表1 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠肝功能指標(biāo)的影響（±s，n=12，U/L）Tab.1 Effect of BMSCs on liver function indexes of liver fibrosis model mice（±s，n=12，U/L）

Note：Compared with control group，1）P<0.05；compared with model group，2）P<0.05.

AST 109.43±10.64 252.67±25.491）174.82±21.902）86.315 0.000 Groups Control Model BMSCs F P ALT 38.62±421.00 142.35±17.181）85.18±10.442）136.743 0.000

2.3 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠肝組織損傷的影響 對(duì)照組大鼠肝組織染色均勻，細(xì)胞核呈圓形，排列有序，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰；模型組大鼠肝細(xì)胞膨大，肝小葉結(jié)構(gòu)損傷，并出現(xiàn)嚴(yán)重出血和炎癥浸潤(rùn)；BMSCs 組大鼠可觀察到肝小葉結(jié)構(gòu)，炎癥浸潤(rùn)情況較模型組減輕（圖2）。

圖2 HE 染色檢測(cè)BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠肝組織損傷的影響（×200）Fig.2 HE staining to detect effects of BMSCs on liver tissue damage in mice with liver fibrosis（×200）

2.4 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠肝纖維化的影響 紅色為細(xì)胞，藍(lán)色為被染色的Col 等纖維化組織。模型組大鼠CVF 水平顯著高于對(duì)照組（P<0.05），BMSCs 組大鼠CVF 水平顯著低于模型組（P<0.05，圖3、表2）。

表2 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠肝纖維化的影響（±s，n=12）Tab.2 Effects of BMSCs on liver fibrosis in mice with liver fibrosis（±s，n=12）

表2 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠肝纖維化的影響（±s，n=12）Tab.2 Effects of BMSCs on liver fibrosis in mice with liver fibrosis（±s，n=12）

Note：Compared with control group，1）P<0.05；compared with model group，2）P<0.05.

CVF/%0.91±0.12 11.47±1.451）4.82±0.792）159.431 0.000 Groups Control Model BMSCs FP

圖3 Masson染色觀察BMSCs對(duì)肝纖維化模型大鼠肝纖維化的影響（×200）Fig.3 Effect of BMSCs on liver fibrosis in mice with liver fibrosis detected by Masson staining（×200）

2.5 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠Col Ⅰ和Col ⅢmRNA 表達(dá)的影響 模型組大鼠Col Ⅰ和Col ⅢmRNA 表達(dá)平顯著高于對(duì)照組（P<0.05），BMSCs 組Col Ⅰ和Col ⅢmRNA 表達(dá)顯著低于模型組（P<0.05，表3）。

表3 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠Col Ⅰ和Col ⅢmRNA表達(dá)的影響（±s，n=12）Tab.3 Effects of BMSCs on expressions of Col Ⅰand ColⅢmRNA in liver fibrosis model rats（±s，n=12）

表3 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠Col Ⅰ和Col ⅢmRNA表達(dá)的影響（±s，n=12）Tab.3 Effects of BMSCs on expressions of Col Ⅰand ColⅢmRNA in liver fibrosis model rats（±s，n=12）

Note：Compared with control group，1）P<0.05；compared with model group，2）P<0.05.

Col ⅢmRNA 1.22±0.12 5.84±0.551）3.09±0.282）162.799 0.000 Groups Control Model BMSCs FP Col ⅠmRNA 1.43±0.13 6.27±0.451）3.56±0.312）197.357 0.000

2.6 BMSCs對(duì)肝纖維化模型大鼠Col Ⅰ和Col Ⅲ蛋白表達(dá)的影響 模型組大鼠Col Ⅰ和Col Ⅲ表達(dá)顯著高于對(duì)照組（P<0.05），BMSCs 組Col Ⅰ和Col Ⅲ表達(dá)顯著低于模型組（P<0.05，圖4、表4）。

表4 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠Col Ⅰ和Col Ⅲ表達(dá)的影響（±s，n=12）Tab.4 Effects of BMSCs on expressions of Col Ⅰand Col Ⅲin liver fibrosis model rats（±s，n=12）

表4 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠Col Ⅰ和Col Ⅲ表達(dá)的影響（±s，n=12）Tab.4 Effects of BMSCs on expressions of Col Ⅰand Col Ⅲin liver fibrosis model rats（±s，n=12）

Note：Compared with control group，1）P<0.05；compared with model group，2）P<0.05.

Col Ⅲ0.93±0.09 3.84±0.351）1.89±0.202）162.799 0.000 Groups Control Model BMSCs FP Col Ⅰ0.96±0.09 4.57±0.371）2.04±0.192）197.357 0.000

圖4 Western blot檢測(cè)BMSCs對(duì)肝纖維化模型大鼠Col Ⅰ和Col Ⅲ表達(dá)的影響Fig.4 Western blot detection of effect of BMSCs on expressions of Col Ⅰand Col Ⅲin liver fibrosis model rats

表5 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠TGF-β1 和Smad mRNA表達(dá)的影響（±s，n=12）Tab.5 Effect of BMSCs on expressions of TGF-β1 and Smad mRNA in liver fibrosis model rats（±s，n=12）

表5 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠TGF-β1 和Smad mRNA表達(dá)的影響（±s，n=12）Tab.5 Effect of BMSCs on expressions of TGF-β1 and Smad mRNA in liver fibrosis model rats（±s，n=12）

Note：Compared with control group，1）P<0.05；compared with model group，2）P<0.05.

Smad mRNA 1.47±0.13 5.72±0.561）3.01±0.292）165.488 0.000 Groups Control Model BMSCs FP TGF-β1 mRNA 1.51±0.13 5.84±0.541）3.23±0.302）172.148 0.000

2.8 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠TGF-β1/Smad 通路中蛋白表達(dá)的影響 模型組大鼠TGF-β1和Smad蛋白表達(dá)顯著高于對(duì)照組（P<0.05），BMSCs 組TGF-β1和Smad蛋白表達(dá)顯著低于模型組（P<0.05，圖5、表6）。

表6 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠TGF-β1/Smad 通路中蛋白表達(dá)的影響（±s，n=12）Tab.6 Effect of BMSCs on protein expressions of TGF-β1/Smad pathway in liver fibrosis model rats（±s，n=12）

表6 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠TGF-β1/Smad 通路中蛋白表達(dá)的影響（±s，n=12）Tab.6 Effect of BMSCs on protein expressions of TGF-β1/Smad pathway in liver fibrosis model rats（±s，n=12）

Note：Compared with control group，1）P<0.05；compared with model group，2）P<0.05.

Smad 0.91±0.09 3.06±0.281）1.67±0.162）113.994 0.000 Groups Control Model BMSCs FP TGF-β1 0.86±0.08 3.45±0.331）1.62±0.152）124.715 0.000

圖5 Western blot檢測(cè)BMSCs對(duì)肝纖維化模型大鼠TGF-β1/Smad通路中蛋白表達(dá)的影響Fig.5 Western blot detection of effect of BMSCs on pro?tein expressions of TGF-β1/Smad pathway in liver fibrosis model rats

2.9 BMSCs對(duì)肝纖維化模型大鼠Th17/Treg水平的影響 模型組大鼠Th17 水平和Th17/Treg 顯著高于對(duì)照組，Treg水平顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。BMSCs組Th17水平和Th17/Treg顯著低于模型組，Treg水平顯著高于模型組（P<0.05，圖6、表7）。

表7 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠Th17 細(xì)胞、Treg 水平的影響（±s，n=12）Tab.7 Effect of BMSCs on Th17 cells and Treg levels in liver fibrosis model rats（±s，n=12）

表7 BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠Th17 細(xì)胞、Treg 水平的影響（±s，n=12）Tab.7 Effect of BMSCs on Th17 cells and Treg levels in liver fibrosis model rats（±s，n=12）

Note：Compared with control group，1）P<0.05；compared with model group，2）P<0.05.

Th17/Treg 0.19±0.02 1.50±0.101）0.39±0.032）97.390 0.000 Groups Control Model BMSCs FP Th17/%0.95±0.07 3.84±0.271）1.66±0.112）74.785 0.000 Treg/%5.12±0.40 2.56±0.191）4.21±0.352）62.637 0.000

圖6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMSCs 對(duì)肝纖維化模型大鼠Th17細(xì)胞、Treg水平的影響Fig.6 Flow cytometry to detect effect of BMSCs on Th17 cells and Treg levels in liver fibrosis model rats

2.10 BMSCs對(duì)外周血淋巴細(xì)胞TGF-β1/Smad通路的影響 模型組大鼠單個(gè)核細(xì)胞中TGF-β1和Smad蛋白水平顯著高于對(duì)照組（P<0.05），BMSCs 組單個(gè)核細(xì)胞中TGF-β1 和Smad 蛋白顯著低于模型組（P<0.05，圖7、表8）。

表8 BMSCs 對(duì)外周血淋巴細(xì)胞中TGF-β1/Smad 通路的影響（±s，n=12）Tab.8 Effect of BMSCs on TGF-β1/Smad pathway in pe?ripheral blood lymphocytes（±s，n=12）

表8 BMSCs 對(duì)外周血淋巴細(xì)胞中TGF-β1/Smad 通路的影響（±s，n=12）Tab.8 Effect of BMSCs on TGF-β1/Smad pathway in pe?ripheral blood lymphocytes（±s，n=12）

Note：Compared with control group，1）P<0.05；compared with model group，2）P<0.05.

Smad 0.87±0.09 3.04±0.281）1.75±0.162）158.406 0.000 Groups Control Model BMSCs F P TGF-β1 0.53±0.06 2.79±0.251）1.27±0.112）163.786 0.000

圖7 Western blot 檢測(cè)BMSCs 對(duì)外周血淋巴細(xì)胞TGF-β1/Smad通路的影響Fig.7 Western blot detection of effect of BMSCs on TGF-β1/Smad pathway in peripheral blood lymphocytes

3 討論

肝纖維化是持續(xù)性和慢性肝損傷的結(jié)果，肝纖維化過(guò)程中，肝細(xì)胞凋亡，內(nèi)皮屏障受損，炎癥細(xì)胞被募集，肝星狀細(xì)胞被激活，從而導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)合成和降解失調(diào)，最終導(dǎo)致肝功能衰竭［10-11］。肝纖維化發(fā)病機(jī)制尚不清楚，研究認(rèn)為病毒性肝炎、酒精、藥物、代謝性疾病和自身免疫性疾病均可能引起慢性肝損傷導(dǎo)致肝纖維化，肝纖維化若得不到控制會(huì)發(fā)展為肝硬化甚至肝衰竭，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量和生命健康，但目前尚無(wú)可用于治療肝纖維化的特異性有效療法［12］。尋找可有效緩解肝纖維化的方法具有重要臨床意義。

BMSCs 具有歸巢效應(yīng)，當(dāng)組織損傷時(shí)，機(jī)體中的干細(xì)胞會(huì)向損傷部位遷移并分泌各種因子保護(hù)組織損傷，研究顯示BMSCs 移植可有效緩解肝衰竭，保護(hù)肝功能［13］。近年研究發(fā)現(xiàn)BMSCs 對(duì)組織纖維化也具有緩解作用，如肺纖維化［14］。肝纖維化中，BMSCs 也具有緩解作用，但其效果和作用機(jī)制尚不明確。本研究顯示，BMSCs 抑制可明顯緩解肝組織損傷，抑制Col Ⅰ和Col Ⅲ轉(zhuǎn)錄和翻譯，并抑制纖維化保護(hù)肝功能。此外，本研究顯示，BMSCs 也可減少肝組織TGF-β1/Smad通路關(guān)鍵蛋白轉(zhuǎn)錄和翻譯。TGF-β1是纖維化的最關(guān)鍵因子之一，其高表達(dá)會(huì)激活Smad 轉(zhuǎn)錄功能，從而促進(jìn)Col Ⅰ和Col Ⅲ轉(zhuǎn)錄和翻譯，導(dǎo)致肝纖維化［15］。王磊等［16］研究顯示，BMSCs抑制可通過(guò)抑制肺組織TGF-β1/Smad信號(hào)通路緩解炎癥反應(yīng)，從而減輕大鼠急性肺損傷。胰腺炎大鼠模型中，BMSCs 也通過(guò)調(diào)控TGF-β1/Smad 信號(hào)通路緩解胰腺組織損傷［17］。BMSCs 也會(huì)通過(guò)外泌體抑制TGF-β1/Smad 途徑誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜修復(fù)［18］。提示四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠模型中，BMSCs可能通過(guò)抑制肝組織中TGF-β1/Smad通路從而抑制Col轉(zhuǎn)錄和翻譯，進(jìn)而緩解肝纖維化，保護(hù)肝功能。

近年研究顯示免疫炎癥反應(yīng)在肝纖維化進(jìn)程中發(fā)揮重要作用，肝纖維化病理過(guò)程中，Th17 細(xì)胞比例升高，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等活化誘發(fā)炎癥反應(yīng)，并可通過(guò)誘導(dǎo)IL-6和TGF-β1表達(dá)促進(jìn)纖維化［19］。Treg 可拮抗Th17 細(xì)胞功能，分泌抗炎因子IL-4 和IL-10 等，從而抑制纖維化［20］。本研究顯示，BMSCs移植不僅可誘導(dǎo)Th17/Treg平衡向Treg偏移，還可抑制淋巴細(xì)胞TGF-β1/Smad通路。王凱等［21］研究顯示，BMSCs對(duì)不同淋巴細(xì)胞的影響不同，BMSCs可抑制Th17 細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)Treg 增殖。BMSCs 可通過(guò)分泌鞘氨醇1 調(diào)節(jié)再生障礙性貧血患者Treg/Th17平衡［22］。也有研究顯示BMSCs通過(guò)調(diào)節(jié)TGF-β相關(guān)通路上調(diào)Treg水平并下調(diào)Th17細(xì)胞水平，從而緩解系統(tǒng)性紅斑狼瘡［23］。

綜上所述，BMSCs 可能通過(guò)抑制TGF-β1/Smad通路減少肝組織中Col 表達(dá)，并誘導(dǎo)Th17/Treg 向Treg 偏移，從而緩解肝纖維化。但BMSCs 抑制肝纖維化的療效仍需臨床研究，其作用機(jī)制需進(jìn)一步探究。