王文濤,曹寧,張國(guó)來(lái)
1西北大學(xué)附屬醫(yī)院/西安市第三醫(yī)院神經(jīng)外科,西安710021
2延安大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科,陜西 延安7160000
室管膜瘤是一種低度惡性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤,該腫瘤生長(zhǎng)速度較慢,由于其發(fā)病部位較為特殊,可嚴(yán)重影響患者的身體功能和生命安全。流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,室管膜瘤發(fā)生率較低,可見(jiàn)于各年齡層中,特別是兒童和青少年[1]。室管膜瘤的癥狀主要包括顱內(nèi)壓增高及不同生長(zhǎng)部位相應(yīng)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀,如頭痛、吞咽困難、聽(tīng)力減退等,嚴(yán)重者可出現(xiàn)顱內(nèi)出血、腦水腫及神經(jīng)功能缺損等癥狀,且患者的預(yù)后相對(duì)較差。目前關(guān)于室管膜瘤的發(fā)病機(jī)制尚未明確,隨著研究的不斷深入,有研究發(fā)現(xiàn),室管膜瘤與多種因子密切相關(guān)[2]。其中Ki-67蛋白作為腫瘤細(xì)胞增殖活性評(píng)估的重要指標(biāo),腫瘤的惡性程度越高,Ki-67 表達(dá)水平也就越高[3]。表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)作為跨膜糖蛋白,作用于細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育和分化過(guò)程,在多種實(shí)體瘤中過(guò)表達(dá)。但目前臨床對(duì)Ki-67、EGFR 在室管膜瘤中表達(dá)的相關(guān)研究較少見(jiàn)[4-6]。因此,本研究旨在探討Ki-67、EGFR在室管膜瘤中的表達(dá)及與患者預(yù)后的關(guān)系,現(xiàn)報(bào)道如下。
選取2018 年1 月至2020 年1 月西安市第三醫(yī)院收治的室管膜瘤患者。納入標(biāo)準(zhǔn):①術(shù)前行影像學(xué)檢查證實(shí)存在顱內(nèi)占位病變,經(jīng)病理學(xué)檢查確診為室管膜瘤;②臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并心理障礙或精神疾病,不能正常溝通交流;②隨訪資料不完整;③合并凝血功能異常;④合并其他顱內(nèi)腫瘤。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn),本研究共納入84 例室管膜瘤患者,其中男56 例,女28 例;年齡24~55 歲,平均(32.71±2.53)歲;組織學(xué)分級(jí):Ⅰ~Ⅱ級(jí)45 例,Ⅲ~Ⅳ級(jí)39 例。取84 例室管膜瘤患者的腫瘤組織及相應(yīng)癌旁組織(距腫瘤組織>3 cm)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò),所有患者均知情同意并簽署知情同意書。
取84 例室管膜瘤患者的腫瘤組織及相應(yīng)癌旁組織,石蠟包埋連續(xù)切片,厚度為5 mm,抗原修復(fù),采用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered solution,PBS)作為陰性對(duì)照,用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。滴加鼠抗人Ki-67 單克隆抗體、兔抗人EGFR單克隆抗體,二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine,DAB)顯色,蘇木素復(fù)染后封片。
結(jié)果判定:Ki-67 主要定位于細(xì)胞核,細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒判定為陽(yáng)性;EGFR 主要定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色判定為陽(yáng)性。每張切片隨機(jī)觀察5 個(gè)高倍視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞,取平均值。Ki-67、EGFR均采用半定量積分法進(jìn)行評(píng)估。依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例進(jìn)行評(píng)分:未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0 分,陽(yáng)性細(xì)胞所占比例≤25%計(jì)1 分,陽(yáng)性細(xì)胞所占比例為26%~50%計(jì)2分,陽(yáng)性細(xì)胞所占比例為51%~75%計(jì)3 分,陽(yáng)性細(xì)胞所占比例>75%計(jì)4 分;依據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分:黃色染色計(jì)1 分,棕黃色染色計(jì)2 分,棕褐色染色計(jì)3 分;將陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分和染色強(qiáng)度評(píng)分相乘,0 分為陰性(-),l~4 分為弱陽(yáng)性(+),5~8 分為中度陽(yáng)性(++),9~12 分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++);(-)(+)判定為陰性表達(dá),(++)(+++)判定為陽(yáng)性表達(dá)。
收集84 例室管膜瘤患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤直徑、組織學(xué)分級(jí)、術(shù)后放療情況、術(shù)后化療情況等。采用到院復(fù)查的方式對(duì)所有患者進(jìn)行為期2 年的隨訪,每3 個(gè)月復(fù)查1 次,依據(jù)影像學(xué)檢查結(jié)果、腦神經(jīng)受損體征評(píng)估患者的預(yù)后,腦干受侵犯判定為預(yù)后不良,腦干未侵犯、無(wú)復(fù)發(fā)判定為好轉(zhuǎn)。
采用SPSS 22.0 軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率(%)表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn);室管膜瘤患者預(yù)后的影響因素采用多元Logistic 回歸模型分析;以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67 陽(yáng)性表達(dá)率為64.29%(54/84),EGFR 陽(yáng)性表達(dá)率為67.86%(57/84),均明顯高于癌旁組織,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(表1)
表1 室管膜瘤患者腫瘤組織和癌旁組織中Ki-67、EGFR表達(dá)情況的比較[n(%)]
組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ~Ⅳ級(jí)的室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于Ⅰ~Ⅱ級(jí)患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(表2)
表2 不同組織學(xué)分級(jí)室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 表達(dá)情況的比較[n(%)]
隨訪2 年,84 例室管膜瘤患者預(yù)后好轉(zhuǎn)68 例,預(yù)后不良16 例。預(yù)后好轉(zhuǎn)與預(yù)后不良患者年齡、性別、腫瘤直徑、術(shù)后放療情況、術(shù)后化療情況比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);預(yù)后好轉(zhuǎn)與預(yù)后不良室管膜瘤患者腫瘤部位、組織學(xué)分級(jí)、Ki-67
表達(dá)情況、EGFR 表達(dá)情況比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(表3)
表3 室管膜瘤患者預(yù)后不良影響因素的單因素分析
將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的腫瘤部位、組織學(xué)分級(jí)、Ki-67 表達(dá)情況、EGFR 表達(dá)情況作為自變量,室管膜瘤患者的預(yù)后作為因變量,納入多元Logistic 回歸分析,結(jié)果顯示,腫瘤部位為幕下、組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ~Ⅳ級(jí)、Ki-67 陽(yáng)性表達(dá)、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)均為室管膜瘤患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。(表4)
表4 室管膜瘤患者預(yù)后不良影響因素的多元Logistic 回歸分析
Ki-67 是增殖細(xì)胞相關(guān)核抗原,在腫瘤患者的病理報(bào)告中,Ki-67 表達(dá)水平可提示細(xì)胞的增殖活躍程度,Ki-67 的表達(dá)水平越高表示細(xì)胞增殖越活躍,惡性程度也會(huì)越高,越容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[7]。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn),肺腺癌患者中Ki-67 的表達(dá)明顯上調(diào),且Ki-67 高表達(dá)患者的復(fù)發(fā)率較高,總生存率明顯降低,預(yù)后不佳,因此,認(rèn)為Ki-67 高表達(dá)患者手術(shù)治療后仍需積極進(jìn)行輔助治療[8]。Jensen等[9]的研究認(rèn)為,腫瘤細(xì)胞的分化程度與其抗原抗體反應(yīng)中Ki-67 的陽(yáng)性檢出率呈負(fù)相關(guān)。EGFR 具有酪氨酸激酶活性,可與表皮生長(zhǎng)因子結(jié)合并在細(xì)胞核內(nèi)啟動(dòng)相關(guān)因子,從而促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖[10]。EGFR 表達(dá)異??蓪?dǎo)致下游信號(hào)增強(qiáng),尤其是突變型EGFR 蛋白表達(dá)增強(qiáng),可導(dǎo)致其持續(xù)激活[11]。但多項(xiàng)研究在胃癌、乳腺癌等惡性腫瘤中也發(fā)現(xiàn)了EGFR 異常表達(dá)[12-13]。本研究通過(guò)比較室管膜瘤腫瘤組織及癌旁組織中Ki-67、EGFR 表達(dá)情況,結(jié)果顯示,室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于癌旁組織,且組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ~Ⅳ級(jí)的室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于Ⅰ~Ⅱ級(jí)患者。表明Ki-67、EGFR 表達(dá)情況可能與室管膜瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),或可作為評(píng)估細(xì)胞增殖的指標(biāo),患者的組織學(xué)分級(jí)越高,Ki-67、EGFR 的陽(yáng)性表達(dá)率越高,表明Ki-67、EGFR 可能與組織學(xué)分級(jí)存在共線性關(guān)系。這可能是因?yàn)镵i-67 是細(xì)胞周期重要的調(diào)節(jié)因子,其高表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞增殖,而EGFR 高表達(dá)與基因擴(kuò)增密切相關(guān)[14]。
研究顯示,室管膜瘤患者的總體預(yù)后較差,5年生存率約為15%,目前臨床關(guān)于室管膜瘤患者預(yù)后的影響因素尚無(wú)統(tǒng)一定論,通常與腫瘤部位、病理類型、復(fù)發(fā)情況等因素有關(guān)[15-16]。本研究單因素分析結(jié)果顯示,預(yù)后好轉(zhuǎn)與預(yù)后不良患者腫瘤部位、組織學(xué)分級(jí)、Ki-67 表達(dá)情況、EGFR 表達(dá)情況比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);多元Logistic 回歸分析結(jié)果顯示,腫瘤部位為幕下、組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ~Ⅳ級(jí)、Ki-67 陽(yáng)性表達(dá)、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)均為室管膜瘤患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05),表明Ki-67、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)均是室管膜瘤患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,且預(yù)后不良患者機(jī)體免疫功能損傷程度更高,機(jī)體免疫功能亢進(jìn)引發(fā)的病理?yè)p傷可能會(huì)促進(jìn)室管膜瘤的發(fā)生發(fā)展。但影響室管膜瘤患者預(yù)后的因素較多,尚需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行多中心研究驗(yàn)證。
綜上所述,Ki-67、EGFR 在室管膜瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率較高,腫瘤部位為幕下、組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ~Ⅳ級(jí)、Ki-67 陽(yáng)性表達(dá)、EGFR 陽(yáng)性表達(dá)均為室管膜瘤患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。