陳宇恒，王正龍

遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，貴州遵義 563000

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的發(fā)生發(fā)展機(jī)制可簡(jiǎn)要概括為“損傷-應(yīng)答”學(xué)說(shuō)，即多因素導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascular endothelia cell，VEC)功能失調(diào)，單核-巨噬細(xì)胞(Mo-Mφ)及淋巴細(xì)胞介導(dǎo)動(dòng)脈內(nèi)膜炎癥，導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)遷移增殖及泡沫細(xì)胞沉積，最終以斑塊破裂、鈣化或纖維化為結(jié)局[1-3]。盡管目前針對(duì)AS的治療策略已明顯改善了患者的預(yù)后，但長(zhǎng)期用藥、藥物不耐受及用藥禁忌等問(wèn)題的存在，使AS的合理、規(guī)范化治療仍面臨一定挑戰(zhàn)[4-5]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一類核酸序列長(zhǎng)度大于200 bp的非編碼RNA，因其缺乏開(kāi)放閱讀框，不通過(guò)編碼蛋白調(diào)控生物體機(jī)能[6]，曾被認(rèn)為是人類基因組中的“噪點(diǎn)”及“暗物質(zhì)”。隨著高通量測(cè)序與蛋白組學(xué)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)lncRNA可在轉(zhuǎn)錄、翻譯、翻譯后修飾等多個(gè)層面影響疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程[7-10]，且目前已有l(wèi)ncRNA參與“損傷-應(yīng)答”調(diào)控流程的相關(guān)報(bào)道。因此，本文匯總了NEXN-AS1、MANTIS、LeXis、MALAT1等lncRNA調(diào)控“損傷-應(yīng)答”的機(jī)制，旨在為進(jìn)一步明確AS的發(fā)病機(jī)制、完善AS的診療提供參考。

1 LncRNA NEXN-AS1的抗炎效應(yīng)與“損傷-應(yīng)答”

1.1 NEXN與心血管病 NEXN(nexilin-F-actinbinding-protein)在心肌細(xì)胞中作為T管的核心，與Jph2(junctional protein junctophilin 2)、RyR2(type 2 reynoldin receptor)共定位于心肌肌質(zhì)網(wǎng)，組成膜連接復(fù)合體以調(diào)控心肌細(xì)胞膜的鈣電流及胞質(zhì)內(nèi)的鈣瞬變[11]，但在VSMC、VEC、Mo-Mφ細(xì)胞中則作為肌絲結(jié)合蛋白，并調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附及遷移[12]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，NEXN在人、鼠等多個(gè)物種間高度保守，且與多種心血管疾病存在較強(qiáng)的關(guān)聯(lián)，在小鼠模型中，NEXN已被證實(shí)參與了AS、擴(kuò)張型心肌病的病理生理過(guò)程[11,13]；一項(xiàng)大規(guī)模的多中心隨機(jī)對(duì)照臨床試驗(yàn)也提示NEXN參與了部分?jǐn)U張型心肌病的進(jìn)展[14]；此外，冠心病患者外周血、病灶中NEXN的表達(dá)水平也低于健康人[12]。

1.2 LncRNA NEXN-AS1調(diào)控“損傷-應(yīng)答”的機(jī)制 2019年，Hu等[12]報(bào)道，NEXN-AS1(NEXN antisense RNA 1)作為NEXN的反義RNA與NEXN共定位于1p31.1。

Hu等[12]通過(guò)高脂喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠模擬脂代謝紊亂，通過(guò)LPS處理VEC/VSMC/Mφ模擬血管內(nèi)炎癥，并基于此探討NEXN-AS1對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化“損傷-應(yīng)答”的調(diào)控機(jī)制，發(fā)現(xiàn)NEXN-AS1的5'端1～1000 nt序列可與組蛋白的重塑劑——溴基結(jié)構(gòu)域相鄰的鋅指結(jié)構(gòu)域蛋白1A (bromodomain adjacent to zinc finger domain 1A，BAZ1A)交聯(lián)，進(jìn)而使染色質(zhì)由致密變得疏松，上調(diào)NEXN的表達(dá)。此外，該研究還發(fā)現(xiàn)，作為NEXN-AS1在表觀遺傳性狀調(diào)控上的映射，VEC的Toll樣受體4/核因子κB(Toll like receptor-4/nucler factor-κB，TLR-4/NF-κB)通路被下調(diào)，單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukins-6，IL-6)、細(xì)胞黏附分子-1(intercellular adhesion molecule 1，ICAM-1)、血管黏附分子-1(vascular adhesion molecule 1，VCAM-1)的表達(dá)水平降低，最終，Mo-Mφ的趨化及VSMC的增殖被抑制，炎癥反應(yīng)對(duì)VEC的損傷作用減輕?？傊琋EXN-AS1的下游效應(yīng)幾乎涉及了“損傷-應(yīng)答”反應(yīng)的每一個(gè)階段，詳細(xì)過(guò)程見(jiàn)圖1。

1.3 NEXN-AS1/NEXN與細(xì)胞焦亡 細(xì)胞焦亡(pyroptosis)是有別于細(xì)胞凋亡、自噬性死亡的一種程序性死亡方式，以半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)、消皮素D(gasdermin D，GSDMD)、NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3)、白細(xì)胞介素-1β(interleukin 1β，IL-1β)作為分子標(biāo)志[15]，幾乎涉及“損傷-應(yīng)答”的各個(gè)環(huán)節(jié)：VEC焦亡促進(jìn)了Mo-Mφ在血管內(nèi)膜的募集，巨噬細(xì)胞焦亡加速了AS壞死核心的形成[16]，VSMC焦亡則削弱了斑塊纖維帽的厚度，可促進(jìn)不穩(wěn)定斑塊的形成[17]。

Wu 等[18]使用不同濃度的阿托伐他汀處理VEC，發(fā)現(xiàn)NEXN-AS1/NEXN的表達(dá)呈劑量依賴方式增加，而細(xì)胞焦亡的標(biāo)志分子caspase-1、GSDMD、NLRP3、IL-1β等則被抑制，NEXNAS1/NEXN被沉默后，阿托伐他汀的抗焦亡效應(yīng)消失，提示他汀的內(nèi)皮保護(hù)作用與lncRNA相關(guān)，為lncRNA作為AS的干預(yù)靶點(diǎn)提供了證據(jù)。

1.4 NEXN-AS1/NEXN的應(yīng)用前景 有研究采用基因微陣列分析正常及AS病變的主動(dòng)脈組織，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NEXN-AS1/NEXN在粥樣斑塊中的表達(dá)水平與病變程度呈負(fù)相關(guān)[12]。此外，人VEC NEXNAS1/NEXN沉默后，caspase-1、GSDMD、NLRP3、IL-1β的表達(dá)明顯增高，且小鼠體內(nèi)NEXN-AS1被沉默后，可明顯加速AS的進(jìn)展[18]。就機(jī)制來(lái)說(shuō)，NEXN-AS1廣泛參與了血管內(nèi)炎癥及細(xì)胞焦亡的調(diào)控(圖1)，就表觀性狀來(lái)說(shuō)，NEXN-AS1所調(diào)控的NEXN涉及AS在內(nèi)的多種心血管疾病，提示NEXNAS1或可成為治療疑難心血管疾病的新靶點(diǎn)。

圖1 NEXN-AS1通過(guò)NENX抑制“損傷-應(yīng)答”的機(jī)制Fig.1 NEXN-AS1 inhibits the progression of "Injury-Response"

2 LncRNA MANTIS的他汀樣作用與“損傷-應(yīng)答”

2.1 LncRNA MANTIS概述 2017年，Leisegang等[19]報(bào)道了lncRNA MANTIS，其基因位于2p13.3，為Anxa4的反義內(nèi)含子，在人與小鼠間高度保守，與VEC的增殖、分化密切相關(guān)。MANTIS受H3K4賴氨酸特異性去甲基化酶5(JARID1B)、肌肉細(xì)胞特異性增強(qiáng)因子2A(myocte specific-enhancer factor-2A，MEF2A)的負(fù)向調(diào)控及Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子2(KLF2)/KLF4、他汀類藥物的正向調(diào)控，廣泛表達(dá)于各種內(nèi)皮細(xì)胞[19-20]；此外，在食蟹猴的斑塊消退期可檢測(cè)到MANTIS的高表達(dá)，而在人頸動(dòng)脈粥樣斑塊內(nèi)MANTIS則呈低表達(dá)[19]。

2.2 LncRNA MANTIS與SOX18/SMAD6/COUP-TFⅡ在血管內(nèi)皮生長(zhǎng)、分化中的作用 目前認(rèn)為，性別決定區(qū)Y框蛋白18(sex determining region Y-box 18，SOX18)、Smad同源物6(SMAD6)、雞卵清蛋白上游啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄因子Ⅱ(chicken ovalbumin upstream promoter transcription factor Ⅱ，COUP-TF Ⅱ)在VEC的生長(zhǎng)、分化過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用[21-23]。當(dāng)敲除MANTIS后，SOX18、SMAD6、COUP-TF Ⅱ的表達(dá)下調(diào)，VEC的出芽、增殖、遷移能力受阻；此外，MANTIS不僅促進(jìn)了SOX18、SMAD6、COUPTF Ⅱ的表達(dá)，還促進(jìn)了三者間的功能整合[19]。

MANTIS的外顯子3為一段含Alu元件的序列，對(duì)SOX18、SMAD6、COUP-TF Ⅱ的功能整合及穩(wěn)定染色質(zhì)重構(gòu)復(fù)合物核心催化亞基(brahma related gene-1，BRG-1)/BAF155復(fù)合物至關(guān)重要：在球體生長(zhǎng)試驗(yàn)中，敲除VEC的MANTIS后，單純過(guò)表達(dá)SOX18、SMAD6、COUP-TFⅡ不能使內(nèi)皮的發(fā)芽正?；?，而過(guò)表達(dá)Alu元件則可抵消MANTIS敲除的效應(yīng)，提示MANTIS的生物學(xué)功能依賴于其含Alu元件的序列[19]。此外，MANTIS的Alu元件還可通過(guò)抑制ICAM-1的表達(dá)來(lái)抑制Mo-Mφ在血管內(nèi)膜的黏附、激活，提示其或可抑制由各種“損傷”引起的Mo-Mφ“應(yīng)答”[20]。

2.3 LncRNA MANTIS通過(guò)SWI/SNF調(diào)控內(nèi)皮功能的機(jī)制 SWI/SNF復(fù)合物(SWItch/sucrose nonfermentable complex)是廣泛存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞核中的ATP依賴的染色質(zhì)重塑劑，依托乙酰化組蛋白H3K27定位于染色質(zhì)[24]；目前認(rèn)為SWI/SNF復(fù)合物以BAF47/155/170(SWI/SNF complex 47/155/170 kD subunit)、BRG-1為分子核心[25]，通過(guò)BRG-1提供ATP酶活性，以滑動(dòng)、消除組蛋白的方式創(chuàng)建DNA區(qū)域，實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)的調(diào)控[24,26]。

LncRNA MANTIS可穩(wěn)定BRG-1/BAF155復(fù)合物，促進(jìn)SWI/SNF復(fù)合物介導(dǎo)的染色質(zhì)重塑，通過(guò)提高RNA聚合酶Ⅱ的轉(zhuǎn)錄活性來(lái)提高SOX18、SMAD6、COUP-TF Ⅱ的表達(dá)水平，促進(jìn)VEC的增殖分化及功能整合[19](圖2)。

圖2 LncRNA MANTIS對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的促進(jìn)作用Fig.2 Effect of lncRNA MANTIS promotes endothelial growth and differentiation

2.4 LncRNA MANTIS與他汀的多效性 盡管目前尚無(wú)lncRNA MANTIS直接參與AS發(fā)生發(fā)展的報(bào)道，但作為抗AS基石之一的他汀類藥物可通過(guò)增強(qiáng)MANTIS啟動(dòng)子活性、誘導(dǎo)KLF2/KLF4、抑制MEF2A等多種途徑調(diào)控MANTIS的表達(dá)[20]，且在MANTIS敲除的內(nèi)皮細(xì)胞中，阿托伐他汀的促血管再生、調(diào)控血栓調(diào)節(jié)蛋白轉(zhuǎn)錄譜、增加端粒酶活性等抗AS效應(yīng)均被抑制，提示lncRNA MANTIS或可抑制AS進(jìn)展，并成為抗AS治療的潛在靶點(diǎn)[20]。

3 LncRNA LeXis的調(diào)脂效應(yīng)與“損傷-應(yīng)答”

3.1 LncRNA LeXis概述 LncRNA LeXis(liverexpressed LXR-induced sequence)又名CT70，基因定位于9p31.1，由Sallam等[27]于2017年在探究肝X受體(liver X receptor，LXR)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(sterol regulatory element-binding protein，SREBP)調(diào)控膽固醇代謝的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)并報(bào)道，命名為L(zhǎng)eXis，其在人與小鼠間均高度保守。

3.2 LncRNA LeXis的調(diào)脂效應(yīng)與SREBP SREBP本身作為調(diào)控膽固醇生物合成的重要分子，在機(jī)體固醇含量豐富時(shí)被抑制，反饋性下調(diào)膽固醇的生物合成途徑[28-29]。LeXis通過(guò)促進(jìn)膽固醇流出肝臟，并抑制膽固醇生物合成的方式調(diào)控膽固醇穩(wěn)態(tài)，而LeXis的調(diào)脂效應(yīng)不同于他汀、前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草素/Kexin9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9，PCSK9)抑制劑的藥理作用，不影響肝功能，無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，也無(wú)需低密度脂蛋白受體(LDL-R)的參與，提示LeXis可能干預(yù)脂代謝紊亂所引起的“損傷”，進(jìn)而抑制下游的“應(yīng)答”[4,27]。

Sallam等[27]于小鼠肝細(xì)胞過(guò)表達(dá)LeXis后，提取核蛋白行質(zhì)譜分析時(shí)發(fā)現(xiàn)了含RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域、亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域的核糖核蛋白R(shí)ALY，其本身是小鼠肝臟膽固醇生物合成基因的轉(zhuǎn)錄輔助因子(transcriptional cofactor)激活劑，而LeXis正是通過(guò)與RALY交聯(lián)，減少RNA聚合酶Ⅱ在Srebp2等靶基因啟動(dòng)子上的起始轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而降低SREBP2、3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶、法尼基二磷酸法尼基轉(zhuǎn)移酶1(FDFT1)的表達(dá)，最終使膽固醇的生物合成明顯減少(圖3)。

圖3 LncRNA LeXis對(duì)脂代謝的調(diào)節(jié)機(jī)制Fig.3 Regulatory mechanism of lncRNA LeXis on lipid metabolism

3.3 LncRNA LeXis的應(yīng)用前景 家族性高膽固醇血癥(familial hypercholesterolemia，F(xiàn)H)是以血漿低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)明顯升高為特征的一種常染色體遺傳病，多數(shù)FH患者因涉及Ldlr、Apob的突變，即使高強(qiáng)度他汀、PCSK-9抑制劑治療也無(wú)法控制LDL-C達(dá)到指南的推薦目標(biāo)[4,30-31]。

Tontonoz等[31]將含LeXis的AAV-8質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入LDL-R-/-FH小鼠，發(fā)現(xiàn)LeXis處理后的小鼠總膽固醇及三酰甘油水平明顯降低，且AS病變程度明顯減輕(圖3)，提示LeXis可用于治療FH等難治性高脂血癥，強(qiáng)化AS或冠心病的各級(jí)預(yù)防，改善此類患者的預(yù)后，也再次為lncRNA可作為治療靶點(diǎn)提供了證據(jù)。

4 LncRNA MALAT1的免疫調(diào)控與“損傷-應(yīng)答”

4.1 LncRNA MAL AT1概述 肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT1)基因位于11q13.1，序列長(zhǎng)8 kb，在人與小鼠間高度保守。初始MALAT1在其多聚腺苷酸上游可形成類似tRNA的三葉草結(jié)構(gòu)，由RNA酶P (RNase P)識(shí)別、剪切形成兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本，其中的5'端側(cè)即為7000 nt的成熟MALAT1，而3'端側(cè)經(jīng)RNase Z、CCA添加酶修飾后進(jìn)入胞質(zhì)，形成MALAT1-associated small cytoplasmic RNA(mascRNA)[32](圖4)。

圖4 LncRNA MALAT1的加工過(guò)程及下游靶分子Fig.4 Processing of the lncRNA MALAT1 and its downstream target molecules

4.2 LncRNA MAL AT1的免疫活性調(diào)節(jié)機(jī)制MALAT1通過(guò)與巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞(dendrite cell，DC)中的NF-κB結(jié)合而沉默NF-κB，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞與DC的天然免疫應(yīng)答，調(diào)控血管內(nèi)膜炎癥[33]。T細(xì)胞在粥樣斑塊中占白細(xì)胞的25%～38%[34]，提示T細(xì)胞在“損傷-應(yīng)答”調(diào)控中占有重要地位，而MALAT1可通過(guò)抑制DC胞內(nèi)的NF-κB與CD80啟動(dòng)子結(jié)合，下調(diào)DC膜表面CD80的表達(dá)[35]，從而削弱初始T細(xì)胞的激活，進(jìn)一步減弱各種“損傷”因素引起的Mo-Mφ、DC-T細(xì)胞“應(yīng)答”。

M A L A T 1 的另一部分抗炎機(jī)制依賴于mascRNA：在MALAT1+/-骨髓源性巨噬細(xì)胞株(bone marrow macrophage，BMDM)的趨化、促炎癥因子(TNF、NOS2、CCL2、CCL7)水平明顯高于野生型BMDM的基礎(chǔ)上，利用鎖核酸修飾的反義寡核苷酸(lock nucleic acid modified antisense oligonucleotides，L N A-A S O)選擇性耗竭M(jìn) A L AT 1+/+B M D M s 的mascRNA后，其TNF、IL-6的表達(dá)水平可更進(jìn)一步升高，提示mascRNA也參與了免疫炎癥的調(diào)控，但目前尚缺乏其機(jī)制的研究報(bào)道[36]。

MALAT1還可通過(guò)miR-503的分子海綿效應(yīng)發(fā)揮對(duì)“損傷-應(yīng)答”的負(fù)調(diào)控作用：Cremer等[37]、Yan等[38]分析了MALAT1+/-小鼠與野生型小鼠的差異性microRNA，發(fā)現(xiàn)包括miR-503在內(nèi)的多種microRNA在轉(zhuǎn)錄水平不變的背景下含量增加，而抗miR-503可顯著降低TNF-α介導(dǎo)的VEC表型轉(zhuǎn)換，模擬MALAT1的內(nèi)皮保護(hù)效應(yīng)。

4.3 LncRNA MALAT1與AS的關(guān)聯(lián) Gast等[36]發(fā)現(xiàn)，即使在正常飲食喂養(yǎng)下，MALAT1+/-ApoE-/-小鼠的AS進(jìn)展也快于ApeE-/-小鼠。Cremer等[37]對(duì)MALAT1+/+ApoE-/-小鼠行MALAT1-/-ApoE-/-骨髓移植，發(fā)現(xiàn)可解除MALAT1的AS保護(hù)效應(yīng)，粥樣斑塊也更趨向發(fā)展為不穩(wěn)定斑塊。有臨床研究也發(fā)現(xiàn)粥樣斑塊內(nèi)的總MALAT1水平或與患者心腦血管事件的發(fā)生率呈負(fù)相關(guān)，提示MALAT1可抑制AS的進(jìn)展[36-37]。

5 其他參與調(diào)控“損傷-應(yīng)答”的lncRNA

5.1 LncRNA MeXis通過(guò)ABCA1調(diào)控“損傷-應(yīng)答”的機(jī)制 MeXis (macrophage-expressed LXR-induced sequence)由Sallam等[39]于2018年報(bào)道，在人與小鼠間高度保守，可被LXR激活，通過(guò)DDX17-ABCA1軸進(jìn)行調(diào)脂，抑制脂代謝紊亂引起的“損傷”，進(jìn)而抑制下游的“應(yīng)答”。

MeXis可協(xié)助DDX17(一種核受體輔助因子)與LXR在Abca1啟動(dòng)子上結(jié)合，激活A(yù)TP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)元件A1(ATP binding cassette transporter A1，ABCA1)的表達(dá)，而ABCA1則通過(guò)促進(jìn)游離膽固醇流向Apo A-1，加速HDL-C的生成，促進(jìn)巨噬細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)流出[40]。

在動(dòng)物模型中，MeXis-/-LDL-R-/-小鼠無(wú)論是AS進(jìn)展還是易損斑塊的發(fā)生率均高于LDL-R-/-小鼠，且一項(xiàng)基于1000個(gè)基因組的冠脈疾病全基因組關(guān)聯(lián)meta分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，人MeXis單核苷酸多態(tài)性與冠心病存在明顯相關(guān)性，提示MeXis可抑制AS的進(jìn)展[41]。

5.2 LncRNA SNGH-12促進(jìn)DNA修復(fù)調(diào)控“損傷-應(yīng)答”的機(jī)制 氧化應(yīng)激可致DNA損傷，加速VEC的功能障礙，繼而促進(jìn)“損傷-應(yīng)答”[42]，小核仁宿主基因-12(small nucleolar host gene-12，SNHG-12)在進(jìn)化上較為保守，可通過(guò)DNA依賴性蛋白激酶(DNAdependent protein kinase，DNA-PK)/DNA-PKcs-Ku70/Ku80途徑，輔助VEC的DNA損傷修復(fù)[43]。

大多數(shù)哺乳動(dòng)物以非同源末端連接(nonhomologous end-joining，NHEJ)的方式修復(fù)DNA雙鏈斷裂：通過(guò)Ku70/Ku80異二聚體快速識(shí)別斷裂的DNA末端并保護(hù)其免受核酸酶水解，隨后DNA-PK的催化亞基(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit，DNA-PKcs)提供激酶活性，磷酸化大量與之重疊的底物，促進(jìn)有效而準(zhǔn)確的DNA修復(fù)，通過(guò)抑制“損傷”的進(jìn)展，繼而抑制下游的“應(yīng)答”[44-46]。

LncRNA SNHG-12可與DNA-PK交聯(lián)，促進(jìn)DNA-PK/DNA-PKcs與Ku70/Ku80的相互作用，提高NHEJ的效率，抑制氧化應(yīng)激，而敲除SNHG-12可加速VEC的衰老，促進(jìn)AS進(jìn)展[43]。

5.3 LncRNA MARRS抑制胞葬作用調(diào)節(jié)“損傷-應(yīng)答”的機(jī)制 巨噬細(xì)胞相關(guān)動(dòng)脈粥樣硬化基因序列(macrophage-associated atherosclerosis lncRNA sequence，MARRS)由Simion等[47]于2020年報(bào)道，可通過(guò)調(diào)節(jié)HuR(一種RNA結(jié)合蛋白，可結(jié)合凋亡相關(guān)基因的mRNA，抑制細(xì)胞凋亡)而加速巨噬細(xì)胞的凋亡，抑制斑塊內(nèi)的胞葬作用，促進(jìn)“損傷-應(yīng)答”的進(jìn)展。

胞葬作用是細(xì)胞在發(fā)生進(jìn)一步壞死之前清除凋亡細(xì)胞的過(guò)程[48]。在斑塊早期，VSMC及巨噬細(xì)胞的凋亡可被胞葬作用清除，但隨著AS進(jìn)展，巨噬細(xì)胞凋亡的累積使胞葬作用不足以維持正常的血管內(nèi)膜結(jié)構(gòu)；最終，斑塊內(nèi)壞死不斷加重，斑塊性質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)橐讚p斑塊[49]。

LncRNA MARRS可通過(guò)沉默HuR，促進(jìn)p53、p27、caspase-8和caspase-9表達(dá)，增加巨噬細(xì)胞的凋亡，從而削弱巨噬細(xì)胞的胞葬作用，加速AS的進(jìn)展[47]。

5.4 其他調(diào)控“損傷-應(yīng)答”的LncRNA

5.4.1 促進(jìn)“損傷-應(yīng)答”的lncRNA

5.4.1.1 LncRNA VINAS LncRNA VINAS (Vascular INflammation and Atherosclerosis lncRNA Sequence)與人DEPDC4(DEP domain containing 4)同源，在VEC/VSMC/Mo-Mφ中均有表達(dá)，但主要表達(dá)于VEC[50]，可通過(guò)NF-κB和MAPK通路調(diào)節(jié)血管內(nèi)炎癥，敲低VINAS可減少VEC/VSMC/Mo-Mφ源的MCP-1、TNF-α、IL-1β水平，抑制AS的進(jìn)展，且人DEPDC4的敲低也可復(fù)制VINAS的抗炎效應(yīng)。

5.4.1.2 LncRNA MEG3 LncRNA MEG3(maternally expressed gene 3)在人、鼠間保守，并表達(dá)于多種組織[51]；MEG3可充當(dāng)miR-223(一種重要的抗炎miRNA[52])的分子海綿，以增加NLRP3、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(apoptosis-associated speck- like protein containing a CARD，ASC)、cleaved caspase-1及GSDMD的表達(dá)，促進(jìn)VEC的焦亡并加速AS進(jìn)展[53]，而具有抗AS效應(yīng)的褪黑素則可阻斷MEG3/miR-223/NLRP3軸以緩解MEG引起的VEC焦亡，提示lncRNA MEG3或可作為AS的干預(yù)靶點(diǎn)[53]。

5.4.1.3 LncRNA Kcnq1ot1 KCNQ1重疊轉(zhuǎn)錄本1(kcnq1 overlapping transcript 1，Kcnq1ot1)是Kcnq1基因座上的一種印記反義lncRNA[54]，在人與小鼠間保守[55]。lncRNA kcnq1qt1通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-452-3p以增強(qiáng)組蛋白去乙?；?(histone deacetylase 3，HDAC3)的表達(dá)，進(jìn)而減少ABCA1的表達(dá)，使巨噬細(xì)胞的膽固醇流出受抑制，最終加重脂代謝紊亂；kcnq1qt1敲除則可抑制人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系(human monocytic leukemia cell line，THP1)源巨噬細(xì)胞的脂質(zhì)積聚，并明顯減緩ApoE-/-小鼠的AS進(jìn)展[54]。

5.4.2 抑制“損傷-應(yīng)答”的lncRNA

5.4.2.1 LncRNA NORAD DNA損傷激活的非編碼RNA(non-coding RNA activated by DNA damage，NORAD)是一種在哺乳動(dòng)物高度保守，并參與調(diào)節(jié)基因組穩(wěn)定性的lncRNA[56]，可通過(guò)抑制NF-κB、p53-p21及IL-8來(lái)調(diào)控細(xì)胞周期、血管內(nèi)炎癥，并發(fā)揮VEC的保護(hù)效應(yīng)[57]。NORAD敲除后，ox-LDL誘導(dǎo)的活性氧、NF-κB及其下游的ICAM、VCAM、IL-8增加，加速了ApoE-/-小鼠的AS進(jìn)展[57]。

5.4.2.2 LncRNA PEBP1P2 LncRNA PEBP1P2是VSMC表型轉(zhuǎn)化的調(diào)節(jié)因子，不僅可直接與細(xì)胞周期依賴的蛋白激酶9(cyclin-dependent kinase 9，CDK9)結(jié)合，下調(diào)p38-MAPK通路的c-Jun、p38磷酸化水平以拮抗AS進(jìn)展，還可抑制血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)誘導(dǎo)的VSMC表型轉(zhuǎn)換[58]。基于PEBP1P2可直接結(jié)合CDK9而抑制VSMC增殖、遷移的特性，提示其可能成為晚期AS的治療靶點(diǎn)。

5.4.2.3 LncRNA-FA2H-2 LncRNA-FA2H-2的抗AS效應(yīng)主要依賴于混合譜系激酶結(jié)構(gòu)域樣蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein，MLKL)，后者可引起哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mechanistic target of rapamycin kinase，mTOR)/蛋白激酶B(protein kinase B)依賴的VEC/VSMC自噬缺陷，促進(jìn)MCP-1、VCAM-1、IL-6的表達(dá)[59]，而lncRNA-FA2H-2的-750～387序列可與MLKL的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，通過(guò)下調(diào)MLKL的表達(dá)而緩解自噬缺陷及炎癥反應(yīng)，減緩“損傷-應(yīng)答”的進(jìn)展[59]。其余參與“損傷-應(yīng)答”調(diào)控的lncRNA見(jiàn)表1。

表1 促進(jìn)及抑制“損傷-應(yīng)答”的lncRNATab.1 LncRNAs that accelerated and inhibit the "Injury-Response" process

6 總結(jié)與展望

NEXN-AS1、MANTIS、LeXis、MALAT1等lncRNA高度保守，具備強(qiáng)大的表觀遺傳調(diào)控能力，并參與調(diào)控“損傷-應(yīng)答”中的脂質(zhì)沉積、血管內(nèi)膜炎癥、細(xì)胞增殖與凋亡等過(guò)程，因此，lncRNA可能成為AS新的診療靶點(diǎn)。但目前仍存在一些爭(zhēng)議，如腫瘤相關(guān)lncRNA用于治療是否會(huì)增高腫瘤發(fā)病率，lncRNA促進(jìn)VEC增殖是否會(huì)加速支架置入術(shù)后的支架內(nèi)再狹窄，以及l(fā)ncRNA是否可改善AS的遠(yuǎn)期預(yù)后等。希望心血管領(lǐng)域的科研人員更加重視lncRNA的地位，早日解決上述問(wèn)題，以實(shí)現(xiàn)lncRNA的臨床應(yīng)用，改變目前AS診療的窘境，最終使AS患者獲益。