鐘綺媚，張晶晶，楊志友，鄧淑怡，王佳佳，張 才，張永平，宋 采

（1.廣東海洋大學食品科技學院，廣東 湛江 524088；2.廣東海洋大學深圳研究院，廣東 深圳 518120；3.廣東省水產品加工與安全重點實驗室，廣東 湛江 524088；4.廣東醫(yī)科大學附屬醫(yī)院，廣東 湛江 524088）

阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）是常見的進行性神經退行性疾病，臨床上以認知障礙、記憶衰退等表現(xiàn)為特征。AD 發(fā)病因子包括細胞外沉積的β 淀粉樣蛋白（β-amyloid，Aβ）、磷酸化tau（ptau）形成的胞內神經元纖維纏結和乙酰膽堿（acetyl‐choline，ACh）缺乏。目前針對這些因子的藥物療效極微。近年來，筆者團隊和其他研究者提出并證明神經炎癥在AD 發(fā)病中的重要角色。神經炎癥以小膠質細胞和星形膠質細胞激活為主要特征。神經元老化和活性氧產生增加，外周免疫炎癥反應均可能激活膠質細胞的炎癥反應[1]。其中小膠質細胞的激活分為促炎M1 和抗炎M2 亞型。小膠質細胞和中樞神經系統(tǒng)相關的巨噬細胞（CAMs）功能十分相似，前者過度激活是誘導情感和神經退行性疾病的原因之一。最新研究比較小膠質細胞和CAMs的特征，確定己糖胺半乳糖苷酶亞基β（Hexb）是穩(wěn)定表達的小膠質細胞核心基因[2]。在突變Hexb 和APP轉基因小鼠中，皮質和海馬中的Aβ 斑塊減少[3]。此外，在AD 患者大腦中還發(fā)現(xiàn)Hexb 增加[4]，Hexb 被認為與M1型激活相關，因此，本研究選擇Hexb作為小膠質M1亞型激活標記物。與此相似，星形膠質細胞的極化亦可產生促進炎癥級聯(lián)反應和神經保護的作用（如釋放BDNF）。由于膠質纖維酸性蛋白（gli‐al fibrillary acidic protein，GFAP）作為整體星形膠質細胞標志物，在AD 患者中表達增加[5]，本研究選擇GFAP 和BDNF 作為星形膠質細胞標志物。外周炎癥激活腦內的膠質細胞引起神經炎癥，環(huán)境毒素如鋁造成外周炎癥過度反應，促炎因子通過血腦屏障，激活腦內膠質細胞并釋放促炎癥因子，促進Aβ 產生，神經元纖維纏結和乙酰膽堿酯酶活性增強，加速神經元變性死亡[6]。由于目前尚無藥物能阻止或逆轉AD 進程，且大部分臨床藥物毒副作用顯著。因此，探索AD 神經免疫學機制，尋找天然具有抗炎作用的活性物質或藥物成為治療AD熱點。

ω-3 PUFAs包括二十碳五烯酸（Eicosapentaenoic acid，EPA）、二十二碳五烯酸（Docosapentaenoic acid，DPA)和二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid，DHA），主要來源于海洋生物或深海魚類等。紅細胞ω-3 PUFAs含量的降低與神經細胞衰老和大腦認知功能減退成正比[7]。筆者團隊曾首次和多次報道EPA 的抗炎機制，如抑制促炎細胞因子的合成，促使巨噬細胞/小膠質細胞向M2 表型極化[8]，刺激星型膠質細胞A2 的激活，增加BDNF 的產生[9]，逆轉IL-1β 對記憶神經遞質ACh 釋放的抑制，進而改善記憶[10]。近年來，筆者團隊發(fā)現(xiàn)EPA 可能通過增加DPA 含量發(fā)揮抗炎和改善記憶的作用，其機制為DPA 激活神經元BDNF/TrkB-PI3K/AKT 通路，保護神經元免受炎癥誘導的損傷[11]。但DPA 在抑制中樞神經炎癥和膠質細胞功能，以致改善認知的作用尚不明晰。而腦內含量最高的PUFAs DHA 被報道具有更顯著的抗衰老和改善記憶的作用。例如，紅細胞DHA 含量的降低與神經細胞衰老和大腦認知功能減退成正比[7]。目前，尚未見三種ω-3 PUFAs在預防和改善AD 認知和記憶障礙差異和各自優(yōu)勢，以及其對神經炎癥治療機制的研究報道。

斑馬魚（Danio rerio）因腦區(qū)功能與哺乳動物具有較大的同源性，如端腦負責記憶功能與哺乳動物海馬區(qū)功能相似[12]，而被逐步用于研究神經退行性疾病。鋁離子能夠誘導AD 相似的神經免疫學變化，文獻[13]報道鋁能夠成功地誘導斑馬魚AD 模型。因此，本研究采用鋁誘導斑馬魚AD 模型并檢測其認知和記憶行為、腦內Aβ、p-tau、AChE、IL-1β濃度和小膠質細胞標志物Hexb、星形膠質細胞標志物GFAP、BDNF的mRNA變化，比較研究EPA、DPA和DHA對AD模型的影響，以期為海洋天然產物ω-3 PUFAs保健產品應用和開發(fā)提供支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

6-8 月齡野生型斑馬魚（上海佳譽水族館）；棕櫚油（廣州果漾生物科技有限公司，批號FC-0320）；EPA（純度85%，批號20180705）、DPA（純度60%，批 號TZSW210402-1）和DHA（純 度85%，批 號20171105）均購自西安通澤生物科技有限公司；六水合氯化鋁（西隴科學股份有限公司，批號7784-13-6）；斑馬魚AChE（批號202110）、p-tau（批號202101）、Aβ1-42（批號201911）和IL-1β（批號202110）試劑盒均購自深圳子科生物科技有限公司；Trizol RNA 抽提試劑（湖南艾科瑞生物工程有限公司）；反轉錄試劑盒（批號R223-01）和SYBR Green 熒光染料（批號Q311-02）均購自南京諾維贊生物科技有限公司；引物由上海生物工程股份有限公司合成。

1.2 實驗方法

1.2.1 鋁激活轉基因幼魚腦內小膠質細胞 應用小膠質細胞被熒光蛋白標記的轉基因斑馬魚Tg（coro1α:eGFP）（由廣東醫(yī)科大學附屬醫(yī)院臨床研究中心斑馬魚平臺提供）產卵，將受精后3 d（days post-fertilization，dpf）的具有熒光標記的幼魚隨機分組，在盛有胚胎水的24 孔板(孔徑15.6 mm)中進行實驗，每天定時記錄存活率。通過前期毒性篩選，確定分組為對照組，使用pH 計（上海力辰儀器科技有限公司）調節(jié)溶液酸堿度至6.0±0.2，含鋁質量濃度40、45 mg/L為模型組，使用質量濃度0.002%三卡因麻醉和羧甲基纖維素固定后，在共聚焦顯微鏡（日本奧林巴斯有限公司）20 倍鏡下采集經鋁誘導4 d 后的幼魚相同位置的小膠質細胞激活情況，激發(fā)波長為488 nm，曝光時間1 s，所有圖像均在相同條件下進行采集[14]。使用Image J 軟件進行熒光強度統(tǒng)計。

1.2.2 實驗分組與處理 野生型斑馬魚隨機分成5組：對照組、模型組及EPA、DPA和DHA治療組。參照文獻[13]的AD模型建立方法，其中模型組及治療組斑馬魚暴露在pH 為6.0 ± 0.2 含鋁離子質量濃度為100 μg/L 水中，同時模型組喂食含質量分數1%的棕櫚油飼料，EPA、DPA 和DHA 治療組對應地喂食含飼料質量分數1%的EPA、DPA和DHA飼料[15]；對照組僅在pH 為6.0±0.2的水中養(yǎng)殖；每天測量并使用鹽酸調節(jié)酸堿度。實驗周期為30 d。

1.2.3 行為學實驗 行為學實驗分為新物體識別實驗和獎賞記憶實驗，行為結果由欣軟軟件（上海欣軟信息科技有限公司）分析。

新物體識別實驗檢測成年斑馬魚認知水平，參照Cognato 等[16]的測試方法。T 迷宮由透明有機玻璃制成，外部各臂粘有黑色塑料自黏膜，黑色塑料自黏膜上被裁出正方形、三角形和圓形的視覺提示卡片。實驗時長共2 d，訓練期：測試前一天將每組斑馬魚從開始臂放入，關閉新臂，讓其在開始臂、訓練臂自由活動30 min；測試期：打開新臂，逐一把斑馬魚從開始臂放入，使其自由探索迷宮5 min，記錄到達新臂的潛伏期（第一次進入新臂的時間）和在新臂活動的時長。

獎賞記憶實驗參考Darland等[17]的方法，略有修改，應用食物獎勵使斑馬魚對投食臂具有偏好性，以評價其記憶能力。訓練期：將投食環(huán)放置在左右末端處，把每組斑馬魚從開始臂放入，每10 min 向獎勵臂端投食環(huán)中放入少量飼料，自由活動30 min。測試期：訓練結束后24 h，撤去投食環(huán)，把魚從長臂放入，使其探索迷宮5 min，記錄到達喂食臂的潛伏期（第一次進入獎勵臂的時間）和在喂食臂活動的時長。測試完畢后，當天按訓練模式放置投食環(huán)進行強化記憶訓練，每組20 min，每10 min 在投食環(huán)中放入少量魚食。第3、4、5 天重復第2 天的實驗步驟，第5天測試完畢后不再強化記憶訓練。

1.2.4 Aβ、p-tau、AChE、IL-1β 濃度檢測 根據Elisa試劑盒說明書檢測斑馬魚腦組織AChE、p-tau、Aβ1-42和IL-1β蛋白質量分數。

1.2.5 熒光定量PCR 檢測 提取斑馬魚腦組織mRNA，根據反轉錄試劑盒說明書反轉錄得cDNA，進行RT-PCR 檢測小膠質細胞標志物Hexb、星形膠質細胞標志物GFAP 和BDNF 的mRNA 變化（引物序列見表1），將目的基因相對于管家基因Actin的表達進行△△CT校正[18]。

表1 熒光定量PCR引物序列Table1 Primer sequence of qPCR

2 數據處理

本研究數據均采用Graph Pad Prism 8.0.2 統(tǒng)計軟件處理，方差齊性數據采用單因素方差分析（One-way ANOVA），進行LSD 檢驗，其中小膠質細胞熒光強度和獎賞記憶行為結果使用t檢驗。P<0.05被認為具有顯著的統(tǒng)計學差異。

3 結果與分析

3.1 鋁質量濃度對斑馬魚幼魚腦內小膠質細胞的影響

由圖1可見，與對照組相比，鋁處理后轉基因斑馬魚Tg（coro1α:eGFP）幼魚腦中，熒光標記的小膠質細胞數量顯著增多，在一定濃度范圍內，小膠質細胞熒光強度隨鋁質量濃度升高而增強，證明斑馬魚幼魚小膠質細胞被鋁激活。

圖1 鋁對Tg（coro1α:eGFP）斑馬魚小膠質細胞的影響Fig.1 Effect of aluminum on Tg(coro1α:eGFP)zebrafish microglia

3.2 EPA、DPA和DHA對鋁致斑馬魚認知障礙的影響

由圖2可見，與對照組相比，鋁顯著延長斑馬魚到達新臂的潛伏期（P<0.05）并顯著降低在新臂的活動時間（P<0.01）；與模型組相比，EPA、DPA 和DHA 顯著增加斑馬魚在新臂的活動時間（P<0.01），但對到達新臂的潛伏期無顯著影響。這表明EPA、DPA 和DHA 均可部分改善鋁致斑馬魚的新物體識別障礙。

圖2 EPA、DPA和DHA對鋁致斑馬魚認知障礙的影響Fig.2 Effects of EPA,DPA and DHA on aluminum-induced cognitive impairment in zebrafish

3.3 EPA、DPA和DHA對鋁致斑馬魚記憶障礙的影響

由圖3可見，與對照組相比，鋁顯著增加斑馬魚到達獎勵臂的潛伏期（D1：P<0.05，D4：P<0.001）；與模型組相比，EPA、DPA 和DHA 均顯著降低模型組到達獎勵臂的潛伏期（D1：P<0.05）。與對照組相比，模型組顯著減少獎勵臂的活動時間（D1：P<0.05，后三天均為P<0.001）；與模型組相比，EPA（前三天均為P<0.05，D4：P<0.01）、DPA（D1：P<0.05，D3：P<0.01，D4：P<0.05）和DHA（D4：P<0.01）治療組均顯著增加在獎勵臂的活動時間。這表明，EPA、DPA 和DHA 均可部分改善鋁導致斑馬魚的記憶障礙。其中，EPA 的改善效果最佳，DHA次之，DPA較差。

圖3 EPA、DPA和DHA對鋁致斑馬魚記憶障礙的影響Fig.3 Effects of EPA,DPA and DHA on memory impairment caused by aluminum in zebrafish

3.4 EPA、DPA 和DHA 對鋁致斑馬魚Aβ1-42蛋白質量分數的影響

由圖4可見，與對照組相比，模型組斑馬魚腦內Aβ蛋白質量分數極顯著增加（P<0.001）；與模型組相比，EPA、DPA 和DHA 均顯著降低Aβ 蛋白的濃度（P<0.001）。這表明三種ω-3 PUFAs 均有抑制Aβ沉積的效果。

圖4 EPA、DPA和DHA對鋁致Aβ1-42蛋白質量分數的影響Fig.4 Effects of EPA,DPA and DHA on the amount fraction of Aβ1-42 protein caused by aluminum

3.5 EPA、DPA 和DHA 對鋁致斑馬魚p-tau 蛋白質量分數的影響

由圖5可見，與對照組相比，模型組斑馬魚腦組織p-tau蛋白質量分數顯著增加（P<0.01）；EPA（P<0.001）和DPA（P<0.01）均顯著降低p-tau 質量分數，DHA 無顯著影響。這表明EPA 降低p-tau 的作用最佳，DPA次之，DHA較差。

圖5 EPA、DPA和DHA對鋁致p-tau蛋白質量分數的影響Fig.5 Effects of EPA,DPA and DHA on the amount fraction of p-tau protein caused by aluminum

3.6 EPA、DPA 和DHA 對鋁致斑馬魚AChE 蛋白質量分數的影響

由圖6可見，與對照組相比，模型組斑馬魚腦組織的AChE 蛋白質量分數顯著增加（P<0.01）；與模型組相比，EPA（P<0.05）、DHA（P<0.01）顯著降低AChE 蛋白質量分數，DPA 治療組與模型組比較無顯著影響。這表明DHA 降低AChE 的作用最佳，EPA次之，DPA的效果較差。

圖6 EPA、DPA和DHA對鋁致AChE蛋白質量分數的影響Fig.6 Effects of EPA,DPA and DHA on the amount fraction of AChE protein caused by aluminum

3.7 EPA、DPA 和DHA 對鋁致斑馬魚IL-1β 蛋白質量分數的影響

由圖7可見，與對照組相比，模型組斑馬魚腦組織IL-1β 蛋白質量分數顯著增加（P<0.01）；與模型組相比，EPA 顯著降低IL-1β（P<0.05）；DPA 和DHA與模型組比較，無顯著影響。這表明EPA抗中樞炎癥的作用最佳。

圖7 EPA、DPA和DHA對鋁致IL-1β蛋白質量分數的影響Fig.7 Effects of EPA,DPA and DHA on the fraction of IL-1β protein caused by aluminum

3.8 EPA、DPA 和DHA 對鋁致Hexb mRNA 表達的影響

由圖8可見，與對照組相比，模型組斑馬魚腦組織總的小膠質細胞標志物Hexb 的mRNA 表達顯著增加（P<0.05）；在EPA治療組，Hexb的mRNA表達顯著降低（P<0.01），DPA 和DHA 組無顯著影響。表明EPA抑制小膠質細胞激活的作用最佳。

圖8 EPA、DPA和DHA對鋁致Hexb mRNA表達的影響Fig.8 Effects of EPA,DPA and DHA on Hexb mRNA expression caused by aluminum

3.9 EPA、DPA 和DHA 對鋁致GFAP mRNA 表達的影響

由圖9 可見，與對照組相比，鋁誘導后，斑馬魚腦組織星形膠質細胞標志物GFAP的mRNA表達顯著增加（P<0.01）；EPA、DPA 和DHA 均顯著降低其表達（P<0.01），表明EPA、DPA 和DHA 均有抑制星型膠質細胞激活的作用。

圖9 EPA、DPA和DHA對鋁致GFAP mRNA表達的影響Fig.9 Effects of EPA,DPA and DHA on GFAP mRNA expression caused by aluminum

3.10 EPA、DPA 和DHA 對鋁致BDNF mRNA 表達的影響

由圖10 可見，與對照組相比，模型組斑馬魚腦組織BDNF 僅有輕度下降；EPA（P<0.05）干預顯著增加BDNF 的mRNA 表達。DPA 和DHA 組與模型組比較無顯著影響。

圖10 EPA、DPA和DHA對鋁致BDNF mRNA表達的影響Fig.10 Effects of EPA,DPA and DHA on aluminuminduced BDNF mRNA expression

4 討論

本研究證明在熒光標記小膠質細胞的轉基因斑馬魚Tg（coro1α:eGFP）幼魚腦中鋁激活小膠質細胞并隨鋁質量濃度升高而加劇。與之對應，成年斑馬魚腦內小膠質細胞標志物Hexb 的mRNA 水平上升，增加釋放促炎因子IL-1β，這與鋁引起大鼠小膠質細胞激活的結果一致[19]。但由于喂食斑馬魚幼魚ω-3 PUFAs 較為困難，則在成年野生型斑馬魚比較研究ω-3 PUFAs 對鋁致斑馬魚認知、記憶損傷和病理變化的改善作用。

本研究結果顯示鋁誘導的斑馬魚模型出現(xiàn)認知和記憶障礙，且腦內Aβ、p-tau、AChE 和IL-1β 顯著增高，以神經炎癥為標志的小膠質細胞和星形膠質細胞被顯著激活，這些變化均符合AD 患者的病理變化，表明此AD斑馬魚模型成立。

臨床實驗表明，長期攝入ω-3 PUFAs 能夠改善衰老和早期AD 引起的認知和記憶衰退[20]，本研究的行為結果進一步支持該臨床研究發(fā)現(xiàn)。在新物體識別實驗中，EPA、DPA 和DHA 均可部分改善鋁致斑馬魚的新物體識別障礙，三者效果相似。在獎賞記憶實驗中，EPA、DPA 和DHA 均可部分改善鋁致斑馬魚的記憶障礙，EPA 改善效果最佳，DHA 次之，DPA 較差。針對AD 的有關病理標志物，本研究發(fā)現(xiàn)EPA、DPA和DHA改善作用機制各不相同。

從ω-3 PUFAs 合成代謝途徑來看，EPA 在體內通過產生中間代謝物DPA 形成DHA，DPA 在肝臟和大腦中可部分轉化為EPA[21]。然而，大腦中DHA 的內源性合成高于EPA 和DPA，三者的含量和代謝合成途徑均不相同。筆者團隊和其他學者在臨床和其它動物模型曾報道EPA 和DHA 在改善抑郁癥和記憶障礙方面的差異[22-27]。在大鼠的慢性應激抑郁模型中，EPA 比DHA 更好地抑制小膠質細胞激活和相關的神經炎癥以及NF-kB 信號，EPA 在改善星形膠質細胞活性降低，促進GDNF、NGF、BDNF 神經營養(yǎng)素表達方面優(yōu)于DHA[28]。本研究在斑馬魚的AD 模型中再次證實EPA 在抗炎和恢復BDNF 表達方面比DHA 更有優(yōu)勢。由于EPA 在體內含量極低及代謝迅速，但功能顯著，被認 為EPA相當于第二信使[29]。而DPA 是EPA 向DHA 轉化的中間產物。筆者團隊最新發(fā)現(xiàn)在抑郁的細胞模型DPA 可平衡小膠質細胞M1 和M2 極化，并激活神經元-BDNF/TrkB-PI3K/AKT 通路，發(fā)揮保護神經元的作用[11]。在其他疾病干預中，DPA功能亦為獨特。例如，在葡聚糖硫酸鈉誘導的潰瘍性結腸炎的小鼠模型中，DPA 表現(xiàn)出比EPA和DHA 更強的抗炎能力，其作者認為可能源于DPA抑 制PGE2 和LTB4基質的合成[30]。DPA在功能上也與DHA 具有更大的相似性，在心肌梗死發(fā)病后和出現(xiàn)癥狀之前，血漿中DPA 和DHA 衍生保護蛋白增加[31]。但在腦內，本研究首次研究DPA 對AD樣病理變化的作用，其結果與其他學者在外周疾病的研究結果不盡相同，有待進一步的探究。本研究使用的DPA 純度為60%，EPA 和DHA 的純度均為85%，在計算ω-3 PUFAs 占飼料質量分數1%時，均除以其對應純度，因此，喂食的ω-3 PUFAs 三者總量一致。此外，在廠家提供的檢測報告中，酸價（≤2.0 mg/g)、過氧化物(≤1.5 mmol)和膽固醇（≤2.0 mg/g）等含量極低，且在已有研究報道中，未發(fā)現(xiàn)以上濃度會影響DPA 功效和對中樞學習記憶具有改善作用[32]。

針對AD 最重要的標記物Aβ，本研究發(fā)現(xiàn)ω-3 PUFAs 顯著降低斑馬魚腦內Aβ 蛋白，這和被喂食含ω-6/ω-3 比值較高的飼料的APP/PS1 轉基因小鼠大腦中Aβ增加的發(fā)現(xiàn)一致[33]；支持Grimm等[34]發(fā)現(xiàn)的EPA 和DHA 促進Aβ 降解的結果，其機制可能與增加神經元和小膠質細胞中胰島素降解酶相關。而本研究結果提示Aβ 降低也可能與EPA 的抗炎作用有關，因為筆者團隊曾報道EPA 能夠抑制IL-1β誘導的Aβ 前體APP 的表達[35]。本研究結果進一步證明EPA 降低IL-1β，抑制小膠質細胞激活進而降低Aβ 蛋白濃度。據報道，膳食補充DHA 可通過不同機制減少Aβ的生成，包括調節(jié)APP 的定位，增加α-裂解和抑制β-裂解等[36]。然而DPA 抑制腦內Aβ濃度的作用機制未見報道，需進一步探究。

另一重要AD 病理標記物，過度磷酸化tau 亦被ω-3 PUFAs 所改善。本研究發(fā)現(xiàn)，EPA 和DPA 可以顯著逆轉鋁升高的腦內p-tau 濃度，Wen 等[37]也曾發(fā)現(xiàn)EPA 能夠抑制tau 過度磷酸化；而DHA 在哺乳動物中可以抑制p-tau 濃度[38]，本研究首次在斑馬魚AD 模型中研究DHA 對p-tau 濃度的作用，未發(fā)現(xiàn)DHA 顯著的變化，可能與實驗動物種屬有關或需設計不同的實驗。

針對AD 腦內ACh 缺失，本研究發(fā)現(xiàn)EPA 和DHA均可以降低此代謝酶的濃度。這與De Oliveira等[39]報道攝入EPA 和DHA 可恢復腦內AChE 濃度一致。筆者團隊曾報道外周和中樞炎癥能夠增加Aβ、p-tau 的表達，降低ACh 的釋放，本研究證明鋁離子引起促炎因子IL-1β 升高。EPA 降低IL-1β 蛋白濃度并抑制小膠質細胞和星形膠質細胞的激活作用，但其他兩種ω-3 PUFAs 沒有顯著的作用。這與筆者團隊前期在抑郁癥和AD 模型上的多項發(fā)現(xiàn)相似，即EPA 在抗炎、抑制膠質細胞炎癥亞型方面具有顯著的功能。在星形膠質細胞方面，A1型星形膠質細胞促炎，加速AD 進程，而A2 型則產生BDNF，發(fā)揮神經保護作用。BDNF 顯著改善AD 大鼠（Rattus norvegicus）的空間學習和記憶能力，增加海馬（Hippocampus）中乙酰膽堿的釋放和乙酰膽堿轉移酶的表達，降低Aβ 蛋白濃度，抑制神經元凋亡，促進神經發(fā)生[40]。GFAP 增加是星形膠質細胞激活的標志之一，可觸發(fā)神經炎癥，而抑制炎癥可使GFAP 表達降低，促進A2 型星形膠質細胞分泌BDNF[41]。此外，本研究發(fā)現(xiàn)三種ω-3 PUFAs均能抑制鋁激活的星形膠質細胞，在斑馬魚的AD 模型上進一步確認其他學者的發(fā)現(xiàn)，即缺乏ω-3 PUFAs 的飲食造成星形膠質細胞增生和激活[42]。有研究顯示，在3×Tg AD 小鼠中，GFAP 的蛋白表達顯著下降[43]，這可能與斑馬魚強大的神經再生功能發(fā)揮保護作用有關[44]。本研究證明EPA 促進BDNF 表達，這可能來自EPA 獨特的強大抗炎作用。一方面，EPA是Δ5去飽和酶的抑制劑，抑制AA（炎癥物質的前體）合成，并作為產生替代性花生四烯酸的底物；另一方面，EPA 還通過一組促分解介質，即E系列溶解素發(fā)揮抗炎作用[29]。

本研究首次在轉基因斑馬魚上直觀地驗證鋁對小膠質細胞的激活作用，并在AD 模型上比較和研究EPA、DPA和DHA對記憶損傷和神經病理學的改善作用，但其具體細胞和分子機制還需進一步探討。

5 結論

EPA 在改善鋁致斑馬魚認知和記憶損傷、降低腦內Aβ、p-tau和AChE蛋白濃度及炎癥反應中有最佳作用；DPA 可改善鋁致斑馬魚認知和記憶損傷、抑制Aβ、p-tau 和星形膠質細胞激活的效果顯著；DHA 可改善鋁致斑馬魚認知和記憶障礙，在降低Aβ、AChE 和星形膠質細胞激活方面有較大優(yōu)勢。這些發(fā)現(xiàn)首次為ω-3 PUFAs 在AD 中的應用提供依據。