買爾旦·賽力木，金 鐘，柯于必

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院綜合外科,新疆 烏魯木齊 830054)

2018年中國癌癥數(shù)據(jù)表明，胃癌發(fā)病率和病死率高居我國癌癥的第2位，且80%以上的患者為進(jìn)展期胃癌[1]。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌最常見的轉(zhuǎn)移方式，18%的患者在胃癌早期即出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[2]。同時(shí)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也是影響胃癌患者治療方式選擇及預(yù)后的重要因素。目前臨床上多采用CT或者內(nèi)鏡活檢的方式確定患者是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，但CT效果不理想，內(nèi)鏡活檢作為侵入性操作，患者接受度不高。臨床上亟需尋求一種能夠準(zhǔn)確評估和預(yù)測胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的生物學(xué)標(biāo)志物。胸腺素β10(thymosin beta 10,TMSB10)作為胸腺素家族的一員，廣泛分布于人體各組織器官中，其在細(xì)胞骨架組織和某些生物學(xué)行為中發(fā)揮重要作用，如細(xì)胞形態(tài)改變、細(xì)胞增殖和遷移[3]。近年來有研究表明，TMSB10與多種腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)，其在肺癌、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌組織中高表達(dá)會(huì)導(dǎo)致患者病變程度加重、術(shù)后生存期縮短[4-5]。另有研究報(bào)道，TMSB10可作為潛在生物學(xué)標(biāo)志物用于預(yù)測胃癌患者預(yù)后[6]。但類似研究在國內(nèi)尚未見開展，為了探討TMSB10在胃癌組織中的表達(dá)是否與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)，本研究通過分析胃癌患者的TMSB10表達(dá)水平及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，擬為其臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

本研究為前瞻性隨訪研究，納入2019年8月至2020年8月我院收治的行胃癌根治術(shù)的胃癌患者120例，年齡45～70歲，平均(57.22±8.13)歲。根據(jù)術(shù)后病理結(jié)果是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移將患者分為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(LN組)和非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(非LN組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《胃癌診療規(guī)范(2018年版)》[7]中胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②具有手術(shù)指征，符合《中國腹腔鏡胃癌根治手術(shù)質(zhì)量控制專家共識(shí)(2017版)》[8]中的標(biāo)準(zhǔn)；③臨床及隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位惡性腫瘤；②合并心、肝、肺、腎功能障礙，無法耐受手術(shù)；③術(shù)前接受過新輔助化療。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(k201907-04)，患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 所有患者完善術(shù)前準(zhǔn)備后嚴(yán)格按照腹腔鏡胃癌根治術(shù)規(guī)范進(jìn)行操作。術(shù)后采用替吉奧聯(lián)合順鉑方案化療6個(gè)周期。

1.2.2 資料收集 收集所有患者性別、年齡、BMI、腫瘤浸潤深度、腫瘤直徑、組織學(xué)分型、大體分型、腫瘤位置、是否合并潰瘍、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)水平、糖類抗原199(carbohydrate antigen 199，CA199)水平等指標(biāo)。

1.3 TMSB10蛋白表達(dá)水平檢測

采用組織芯片蠟塊制備儀制備蠟塊，8×4孔，間距1 mm，內(nèi)徑2.2 mm；將胃癌組織HE染色標(biāo)本利用打孔針放置于制備好的蠟塊中，加熱，充分融合組織，制備胃癌組織石蠟切片標(biāo)本；切片厚度為4 μm，利用3-氨丙基-3-甲氧基硅烷處理的載玻片撈取切片，全部敷貼完畢后放入70 ℃恒溫箱中過夜。隨后進(jìn)行脫蠟、洗片、清洗、抗體孵育、清洗、抗體結(jié)合、清洗、染色、DAB顯色、蘇木素復(fù)染、脫水、封片。而后采用AperioCytoplasma 2.0軟件掃描并分析組織芯片中TMSB10蛋白表達(dá)情況。

1.4 隨訪

所有患者均隨訪12個(gè)月，隨訪截止時(shí)間2021年8月31日。若患者術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、癌因性死亡等，則定義為疾病進(jìn)展。根據(jù)TMSB10蛋白表達(dá)中位數(shù)將患者分為TMSB10低表達(dá)組(60例)和TMSB10高表達(dá)組(60例)，采用Log-rank生存分析檢驗(yàn)分析2組患者術(shù)后12個(gè)月疾病進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及臨床資料比較

術(shù)后病理檢查結(jié)果示120例患者中共有89例患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，據(jù)此將患者分為LN組(n=89)和非LN組(n=31)。LN組患者年齡、腫瘤浸潤深度、組織學(xué)分型、是否合并潰瘍、腫瘤直徑與非LN組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 患者臨床資料比較

2.2 患者癌組織和癌旁組織TMSB10蛋白表達(dá)水平

2組患者癌旁組織中TMSB10蛋白表達(dá)水平均明顯低于癌組織，且LN組癌組織中TMSB10蛋白表達(dá)水平高于非LN組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖1。

圖1 患者TMSB10蛋白表達(dá)水平

2.3 影響胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素分析

將表1及圖1中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素進(jìn)行賦值后帶入Logistic方程后分析，結(jié)果顯示，腫瘤浸潤至漿膜層(OR=3.607)、組織學(xué)分型為未分化型(OR=1.098)、合并潰瘍(OR=3.824)及TMSB10高表達(dá)(OR=1.143)是導(dǎo)致胃癌患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)；限制性立方條圖顯示，TMSB10蛋白表達(dá)水平與胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)呈顯著線性關(guān)系(χ2=1.641，P>0.05)，見表2、表3、圖2。

圖2 TMSB10蛋白表達(dá)水平與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性

表2 相關(guān)因素賦值表

表3 影響胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Logistic回歸分析

2.4 不同TMSB10蛋白表達(dá)水平患者早期進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)

以120例胃癌患者TMSB10蛋白表達(dá)中位數(shù)29.31為界值，繪制生存分析曲線，結(jié)果顯示，TMSB10高表達(dá)組患者術(shù)后早期進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)明顯高于TMSB10低表達(dá)組(Log-rankχ2=7.102，P=0.008)，見圖3。

圖3 不同TMSB10蛋白表達(dá)水平患者生存曲線

3 討論

β-胸腺素家族最初是從胸腺中鑒定出來的，主要包括胸腺素β4(TMSB4)、TMSB10和TMSB15[9]，其在調(diào)節(jié)F-肌動(dòng)蛋白的形成、抗炎、組織發(fā)育再生以及誘導(dǎo)胰島素分泌方面起關(guān)鍵作用[10]。有研究表明，β-胸腺素家族參與了腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，其中TMSB4在乳腺癌、結(jié)直腸癌和其他類型的癌癥中充當(dāng)致癌基因[11]。但對于TMSB10在癌癥進(jìn)展中起致癌還是抑癌作用尚不清楚。有研究顯示，TMSB10在乳腺癌、甲狀腺乳頭狀癌、肝細(xì)胞癌中過表達(dá)，并參與癌癥的進(jìn)展[12-13]。也有研究顯示，TMSB10過表達(dá)能夠抑制癌細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)膽管癌和卵巢癌細(xì)胞凋亡[14]。目前，TMSB10在胃癌中的作用及其對于預(yù)后的影響尚不明確。

本研究結(jié)果顯示，腫瘤浸潤至漿膜層、組織學(xué)分型為未分化型、合并潰瘍及TMSB10高表達(dá)是導(dǎo)致胃癌患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。腫瘤浸潤至漿膜層說明腫瘤已經(jīng)到進(jìn)展期，浸潤深度較深，極易轉(zhuǎn)移至胃周淋巴結(jié)。未分化型的腫瘤異型性較高，侵襲力較強(qiáng)，早期出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性大，且分化程度越低，患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的時(shí)間越早，預(yù)后越差。研究顯示，胃癌合并胃潰瘍的患者早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于無潰瘍者，但其機(jī)制尚不明確[15]。關(guān)于TMSB10表達(dá)水平與胃癌細(xì)胞早期出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，研究表明，人為沉默TMSB10能夠抑制胃癌細(xì)胞遷移、侵襲和血管生成[16]。TMSB10作為肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，含有40～44個(gè)氨基酸殘基，具有多種生理功能，如抑制炎癥和骨髓干細(xì)胞增殖，增加金屬蛋白酶的活性，促進(jìn)腫瘤血管生成等，其作用機(jī)制可能與TMSB10作用于Ras系統(tǒng)有關(guān)[17]。研究指出，TMSB10通過抑制Ras系統(tǒng)進(jìn)一步干擾肌動(dòng)蛋白的聚合，從而調(diào)控肌動(dòng)蛋白的運(yùn)動(dòng)，TMSB10促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移可能是通過抑制Ras相關(guān)蛋白和肌動(dòng)蛋白聚合，導(dǎo)致細(xì)胞連接喪失，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散[18]。

相關(guān)研究表明，TMSB10的mRNA在許多腫瘤組織中呈高表達(dá)狀態(tài)[19]。有研究報(bào)道，TMSB10在肺癌、肝癌、食管癌和結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤組織中高表達(dá)，且與腫瘤的轉(zhuǎn)移及侵襲密切相關(guān)[20]。同時(shí)，TMSB10在腫瘤轉(zhuǎn)移、血管生成、細(xì)胞凋亡和創(chuàng)傷愈合等多種生理病理過程中發(fā)揮重要作用，能夠影響癌癥患者的預(yù)后[21]。本研究對行胃癌根治術(shù)的患者進(jìn)行了12個(gè)月的隨訪，觀察其是否出現(xiàn)進(jìn)展，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TMSB10高表達(dá)組患者術(shù)后早期進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)明顯高于TMSB10低表達(dá)組，進(jìn)一步證實(shí)了TMSB10高表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移。一項(xiàng)動(dòng)物試驗(yàn)顯示，敲除TMSB10會(huì)抑制大鼠早期胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，而過表達(dá)TMSB10則結(jié)果相反[22]。另有研究表明，抑制TMSB10可通過激活體內(nèi)外AKT/FOXO信號(hào)通路抑制胃癌細(xì)胞的增殖和侵襲[23]。因此，TMSB10高表達(dá)為胃癌早期進(jìn)展創(chuàng)造了有利的環(huán)境。

本研究為單中心研究，樣本量有限，后期仍需要增大樣本量，進(jìn)行多中心進(jìn)行論證；另外，本研究隨訪時(shí)間較短，TMSB10對患者總生存期以及遠(yuǎn)期進(jìn)展的影響仍需進(jìn)一步探討。

綜上所述，TMSB10在胃癌組織中高表達(dá)能夠增加患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，且與胃癌患者術(shù)后早期進(jìn)展高度相關(guān)。