郭 民，孟 偉，普 艷，何 躍，李曉倩

（1.紅河州滇南中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科；2.紅河州滇南中心醫(yī)院兒科，云南紅河州 661000）

呼吸道感染是兒童最常見的感染性疾病，其中70%~80%為病毒感染引起[1]。這些病毒種類多、感染力強(qiáng)、潛伏期較短、傳播速度快，患兒感染后發(fā)病急，且由于免疫力較弱[2-3]，其所表現(xiàn)出的臨床癥狀與流行性感冒等大多相似，鑒別診斷較為困難。在呼吸道感染的診治中，迫切需要一種能夠準(zhǔn)確、快速地檢測(cè)出所感染病毒種類的方法。目前，既往使用的病毒檢測(cè)方法中，細(xì)胞培養(yǎng)特異性強(qiáng)，但成本高、耗時(shí)費(fèi)力，且病毒量少時(shí)易出現(xiàn)假陰性，不能及時(shí)指導(dǎo)臨床診療[4]；核酸檢測(cè)靈敏度高，但實(shí)驗(yàn)條件要求嚴(yán)格，樣本容易污染[5]；特異性抗體檢測(cè)雖在臨床常用，但不能用于早期診療[6]。而本研究采用免疫熒光法可盡早、盡快、精準(zhǔn)地檢測(cè)出常見兒童呼吸道病毒，并分析這些病毒的年齡年度分布情況，為兒童呼吸道病毒感染的預(yù)防及診治提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年2 月至2021 年1 月在紅河州滇南中心醫(yī)院就診的5 088 例呼吸道感染患兒，進(jìn)行回顧性研究。按照不同年齡段分為嬰幼兒組、學(xué)齡前組、學(xué)齡期組。嬰幼兒組患兒（28 d~3 歲）3 190 例，其中男性1 968 例，女性1 222 例；學(xué)齡前組患兒（＞3 歲且≤7 歲）1 203 例，其中男性664例，女性539 例；學(xué)齡期組患兒（＞7 歲且≤14 歲）695 例，其中男性419 例，女性276 例。按照不同年度分為2018 年度組、2019 年度組、2020 年度組。2018 年度組（2018 年2 月至2019 年1 月）1 348 例，其中男性839 例，女性509 例；2019 年度組（2019年2 月至2020 年1 月）2 213 例，其中男性1 319 例，女性894 例；2020 年度組（2020 年2 月至2021 年1 月）1 527 例，其中男性893 例，女性634 例。以上不同分類的組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），具有可比性。本研究經(jīng)紅河州滇南中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查并批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患兒均符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)（第8 版）》[7]中呼吸道病毒感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴免疫系統(tǒng)疾病者；②心、肝及腎等臟器功能嚴(yán)重障礙者。

1.2 檢測(cè)方法 儀器與試劑：漩渦振蕩器（江蘇新康醫(yī)療器械有限公司，型號(hào)：XK96-A）、離心機(jī)（常州金壇恒豐儀器制造有限公司，型號(hào)：TD5AWS）、恒溫水浴箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠，型號(hào)：HH.W21.Cu600）及熒光顯微鏡，以免疫熒光法檢測(cè)7 種呼吸道病毒抗原的DIAGNOSTIC HYBRIDS試劑盒。取樣及樣本處理：將拭子插入患兒鼻咽部，旋轉(zhuǎn)3 次后取出，放入含3 mL 生理鹽水的10 mL離心管中。將所采樣本與生理鹽水振蕩混勻，舍棄拭子，2 500 r/min 離心10 min，丟棄部分上清液，將留下的約150 μL 上清液及沉淀混勻。取15 μL 混勻液體于載玻片上點(diǎn)樣，冷風(fēng)干燥，置于冷丙酮內(nèi)固定10 min 后取出晾干，每個(gè)點(diǎn)樣處均加異硫氰酸熒光素試劑25 μL，濕盒中37 ℃培養(yǎng)30 min，沖洗，滴封閉液，加蓋片。熒光顯微鏡下7 種呼吸道病毒陽(yáng)性細(xì)胞均顯示蘋果綠熒光，當(dāng)放大200 倍時(shí)，視野中找到≥2 個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞，判為樣本陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo) ①呼吸道病毒檢出情況。②不同年齡患兒常見呼吸道病毒檢出情況。③不同年度患兒常見呼吸道病毒檢出情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以[例（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢出呼吸道病毒情況 5 088 例患兒中呼吸道病毒陽(yáng)性713 例，陽(yáng)性率為14.01%；其中甲型流感病毒（FLUA）、乙型流感病毒（FLUB）、1 型副流感病毒（PIV1）、2 型副流感病毒（PIV2）、3 型副流感病毒（PIV3）、呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）及混合病毒的陽(yáng)性率分別為1.40%（71/5 088）、1.38%（70/5 088）、0.65%（33/5 088）、0.18%（9/5 088）、2.28%（116/5 088）、6.98%（355/5 088）、1.02%（52/5 088）、0.14%（7/5 088）。

2.2 不同年齡患兒常見呼吸道病毒陽(yáng)性率 嬰幼兒組、學(xué)齡前組和學(xué)齡期組患兒呼吸道病毒總陽(yáng)性率分別為17.59%、9.14%和6.04%，組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；3 個(gè)年齡組FLUB、PIV3 及RSV的陽(yáng)性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），而FLUA、PIV1、PIV2、ADV 及混合病毒的陽(yáng)性率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。

表1 不同年齡患兒常見呼吸道病毒陽(yáng)性率[例（%）]

2.3 不同年度患兒常見呼吸道病毒陽(yáng)性率 2018、2019 和2020 年度組患兒呼吸道病毒總陽(yáng)性率分別為15.95%、17.26% 和7.60%，2020 年 明 顯 低 于2018 年、2019 年，組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；3 個(gè)年度組患兒FLUA、FLUB、PIV1、PIV2、PIV3、RSV、ADV 的陽(yáng)性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），而混合病毒的陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同年度患兒常見呼吸道病毒陽(yáng)性率[例（%）]

3 討論

屬于正黏液病毒科的RNA 病毒FLUA、FLUB，屬于副黏液病毒科的RNA 病毒RSV、PIV1、PIV2、PIV3，屬于腺病毒科的DNA 病毒ADV，均可引起呼吸道感染，且病毒種類多、易發(fā)生變異[8]。既往臨床，對(duì)于這些病毒的檢測(cè)，使用培養(yǎng)法時(shí)，價(jià)格較為昂貴；使用核酸檢測(cè)，樣品儲(chǔ)存過程中易污染樣品；而抗體檢測(cè)，又不能用于感染的早期診斷[6]。本研究采用作為病毒實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的免疫熒光法，可盡早、快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出上述病毒，進(jìn)而為兒童呼吸道病毒感染診治提供重要依據(jù)。

本研究對(duì)5 088 例呼吸道感染患兒進(jìn)行呼吸道病毒抗原檢測(cè)，結(jié)果呼吸道病毒陽(yáng)性率為14.01%，其中以RSV 陽(yáng)性率最高達(dá)6.98%，但均低于武漢[8]和金華[9]地區(qū)水平，這可能與不同地區(qū)的地理環(huán)境、氣候特征、研究對(duì)象、標(biāo)本種類、病毒種類、檢測(cè)時(shí)間、檢測(cè)方法、檢測(cè)試劑，還有生活習(xí)慣及經(jīng)濟(jì)狀況等因素有關(guān)。

本次研究結(jié)果顯示，嬰幼兒組、學(xué)齡前組、學(xué)齡期組患兒FLUA、PIV1、PIV2、ADV 及混合病毒的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。FLUB 陽(yáng)性率學(xué)齡期組與學(xué)齡前組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但高于嬰幼兒組，學(xué)齡前組也高于嬰幼兒組；PIV3 陽(yáng)性率嬰幼兒組高于學(xué)齡前組及學(xué)齡期組，學(xué)齡前組與學(xué)齡期組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；RSV 陽(yáng)性率嬰幼兒組高于學(xué)齡前組及學(xué)齡期組，學(xué)齡前組高于學(xué)齡期組,這可能與以下因素有關(guān)：新生兒血清中母?jìng)鱅gG 不能提高新生兒對(duì)RSV的免疫力，反而可與其形成復(fù)合物沉于肺內(nèi)致局部過敏、壞死反應(yīng)，引起呼吸道感染，而隨年齡增長(zhǎng)，患兒感染RSV 后產(chǎn)生特異性抗體，細(xì)胞免疫功能加強(qiáng)，能有效預(yù)防RSV 再感染[10]。另外，嬰幼兒組的病毒合計(jì)陽(yáng)性率高于學(xué)齡前組及學(xué)齡期組，學(xué)齡前組與學(xué)齡期組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以上結(jié)果提示，雖然具體到不同病毒陽(yáng)性率會(huì)有不同，但就病毒合計(jì)陽(yáng)性率而言，與蘇玉萍等[11]實(shí)驗(yàn)結(jié)果總體趨勢(shì)類似，即兒童呼吸道病毒感染與年齡相關(guān)，年齡越小，病毒感染的陽(yáng)性率越高。原因可能為，嬰幼兒免疫系統(tǒng)尚未完善，免疫功能低下，但隨著年齡增加，兒童免疫功能逐漸成熟，抵抗力增強(qiáng)，病毒感染陽(yáng)性率下降。

本研究結(jié)果還顯示，2018 年、2019 年、2020 年患兒混合病毒的陽(yáng)性率差異不明顯（P＞0.05）；FLUA、FLUB、PIV1、PIV2、PIV3、RSV、ADV 的陽(yáng)性率有明顯差異（P＜0.05）。同時(shí)，病毒合計(jì)陽(yáng)性率，2018 年與2019 年差異不明顯，但2020 年明顯低于2018 年和2019 年，這與諶芳等[12]及覃超強(qiáng)等[13]的試驗(yàn)結(jié)果有所不同。上述三個(gè)結(jié)果的差異可能與地區(qū)位置、氣候條件、就醫(yī)人群、檢測(cè)范圍、研究人群、時(shí)間跨度、標(biāo)本采集、檢測(cè)技術(shù)水平等因素有關(guān)。

綜上所述，不同年齡患兒病毒感染的陽(yáng)性率差異明顯，嬰幼患兒最高，學(xué)齡前和學(xué)齡期患兒稍低，為此，日常應(yīng)更重視加強(qiáng)嬰幼兒的防護(hù)。2020 年合計(jì)病毒感染的陽(yáng)性率明顯低于2018 年、2019 年，可見通過加強(qiáng)和鞏固健康宣教，同樣能有效阻斷各種呼吸道病毒的傳播。通過持續(xù)加強(qiáng)病毒學(xué)監(jiān)測(cè)，及時(shí)分析總結(jié)各種呼吸道病毒感染分布情況，還可有力支持臨床合理用藥，為防止抗菌藥物濫用提供可靠依據(jù)。