路曉月,王子夜,韓建瑋,許 露,張曉飛,韓 杰,王志剛,劉 越,索相敏,閻愛(ài)華
(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 林學(xué)院,河北 保定 071000;2.河北省林木種質(zhì)資源和森林保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河北 保定 071000;3.河北省農(nóng)林科學(xué)院 石家莊果樹(shù)研究所,河北 石家莊 050061;4.河北省城市森林健康技術(shù)創(chuàng)新中心,河北 保定 071000)
蘋果再植病是一種全球性病害[1],果樹(shù)患病后成活率降低,枝條生長(zhǎng)量變小,頂端生長(zhǎng)受阻,根系分生能力變差且易腐爛,結(jié)果能力下降甚至不結(jié)果,嚴(yán)重制約蘋果品種更新,威脅著產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)型升級(jí)[2-3]。
導(dǎo)致蘋果再植病發(fā)生的因素非常復(fù)雜,土壤結(jié)構(gòu)惡化、養(yǎng)分失調(diào)等非生物因素均會(huì)引發(fā)再植病[4],但越來(lái)越多的研究表明,連作后土壤微生物群落多樣性失調(diào),由高肥“細(xì)菌型”土壤轉(zhuǎn)化為低肥“真菌型”土壤是其發(fā)生的主要因素[5-6],而且真菌、細(xì)菌、放線菌和植物病原線蟲(chóng)等病原物存在著復(fù)合侵染。梁魁景[7]對(duì)河北省200多個(gè)蘋果園再植病病因進(jìn)行了調(diào)查,發(fā)現(xiàn)鐮刀菌屬(Fusarium)和絲核菌屬(Rhizoctonia)、鏈格孢屬(Alternaria)和腐霉屬(Pythium)4種真菌均是引發(fā)河北省蘋果再植病的病原菌。再植病的發(fā)生不是單一病菌導(dǎo)致的,而是一種復(fù)雜的聯(lián)合侵染,同時(shí)受到多種真菌的影響。
木醋液是由農(nóng)林植物材料副產(chǎn)物高溫干餾冷卻液化得到的酸性液體,經(jīng)木醋液噴施處理可顯著提升植株的株高和地徑[8];將其施入土壤可以改善土壤結(jié)構(gòu),提高土壤肥力,增加有機(jī)氮含量,增強(qiáng)植株抗性,提高產(chǎn)量[9],同時(shí)對(duì)大腸桿菌(Escherichiacoli)和青霉菌(Pseudomonasaeruginosa)等有較強(qiáng)的抑制作用[10]。前期研究中發(fā)現(xiàn),木醋液施用到土壤中可以緩解蘋果再植病的發(fā)病程度,并且有明顯的劑量效應(yīng)[11],但是其作用機(jī)理尚不明確。
本研究以蘋果砧木八棱海棠(Malusmicromalus)為研究對(duì)象,研究木醋液對(duì)土壤主要養(yǎng)分含量、生物學(xué)活性和土壤根際微生物群落的影響,旨為防治蘋果再植病提供理論基礎(chǔ),為防控再植病提供新資源和方法。
1.1 試驗(yàn)地概況
試驗(yàn)地位于河北省農(nóng)林科學(xué)院石家莊果樹(shù)研究所蘋果示范園,處于河北省中南部(東經(jīng)113°30′~115°20′,北緯37°27′~38°47′),屬暖溫帶大陸性季風(fēng)氣候,四季分明,雨量集中于夏秋季節(jié),年總降水量401.1~752.0 mm。寒暑溫度差異較大,年均氣溫14 ℃左右。無(wú)霜期為197 d左右,年總?cè)照諘r(shí)數(shù)1 916.4~2 571.2 h,春夏日照充足,秋冬日照較少,具備良好的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)條件。
1.2 試驗(yàn)材料
木醋液由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)林木病蟲(chóng)害無(wú)公害調(diào)控實(shí)驗(yàn)室利用核桃殼高溫干餾制備,主要包括有機(jī)酸類化合物(26.64%)、酚類物質(zhì)(25.80%)、醛類化合物(20.35%)、酮類化合物(11.31%)、含氮有機(jī)化合物(5.44%)和醇類物質(zhì)(5.02%)等。供試植株為長(zhǎng)勢(shì)一致的健康一年生八棱海棠實(shí)生苗,產(chǎn)于石家莊果樹(shù)研究所蘋果苗圃。
1.3 試驗(yàn)方法
1.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)地內(nèi)布設(shè)10個(gè)1.5 m×0.8 m×0.5 m(長(zhǎng)×寬×深)的小區(qū),間隔1.5 m,木醋液處理和對(duì)照各5個(gè)小區(qū),隨機(jī)排列。每小區(qū)栽植10株苗木,生長(zhǎng)勢(shì)和株高整齊一致。株行距為0.3 m×0.3 m。2019年4月定植幼苗,木醋液處理用稀釋100倍的核桃殼木醋液500 mL灌根,對(duì)照灌入等量無(wú)菌蒸餾水,統(tǒng)一進(jìn)行田間管理。
1.3.2 植株生長(zhǎng)量測(cè)定 用卷尺測(cè)定植株高度,用游標(biāo)卡尺測(cè)量植株地徑。每株苗木選取枝條中上部成熟葉片3~5片,測(cè)定葉片面積[12]。
1.3.3 土壤樣品采集與保存 于2019年7月在每個(gè)小區(qū)中隨機(jī)選取5株植株,每株分東、南、西、北4個(gè)方向采集樹(shù)冠下20~30 cm深的根際土壤,混合后放入自封袋中,作為1個(gè)重復(fù),木醋液處理和對(duì)照各5個(gè)重復(fù),標(biāo)為CK1和MC1,置于冰盒,帶回實(shí)驗(yàn)室于-80 ℃冰箱保存。10月重復(fù)上述操作,樣品標(biāo)記為CK2和MC2。
1.3.4 土壤生物學(xué)相關(guān)指標(biāo)測(cè)定
1.3.4.1 土壤主要養(yǎng)分含量的測(cè)定 參照喬勝英[13]的方法進(jìn)行土壤養(yǎng)分含量測(cè)定,運(yùn)用重鉻酸鉀容量法測(cè)定土壤有機(jī)質(zhì);半微量凱氏定氮法測(cè)定全氮;堿解-擴(kuò)散吸收法測(cè)定堿解氮;碳酸氫鈉浸提-鉬銻抗比色法測(cè)定有效磷;乙酸銨提取-火焰光度法測(cè)定速效鉀;運(yùn)用電位計(jì)法測(cè)定pH值。
1.3.4.2 土壤酶活性的測(cè)定 運(yùn)用3,5-二硝基水楊酸比色法測(cè)定蔗糖酶活性;苯酚鈉-次氯酸鈉比色法測(cè)定土壤脲酶活性;磷酸苯二鈉比色法測(cè)定堿性磷酸酶活性;KMnO4滴定法測(cè)定過(guò)氧化氫酶活性[14]。
1.3.4.3 根際土壤微生物種類多樣性測(cè)定 利用試劑盒提取樣品總DNA(MN NucleoSpin 96 Soi),根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)得到引物,在引物末端加上測(cè)序接頭,進(jìn)行PCR擴(kuò)增并對(duì)其產(chǎn)物進(jìn)行純化、定量和均一化形成測(cè)序文庫(kù),建好的文庫(kù)先進(jìn)行文庫(kù)質(zhì)檢,質(zhì)檢合格的文庫(kù)用Illumina HiSeq 2500技術(shù),針對(duì)真菌的ITS1-ITS2和細(xì)菌的16S V3+V4、16S V4+V5區(qū)域由北京百邁克公司進(jìn)行高通量測(cè)序。采用Mothurversionv 1.30和R語(yǔ)言進(jìn)行多樣性和相對(duì)豐度分析,基于Python繪制物種相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)圖[15]。
1.4 數(shù)據(jù)處理
采用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理統(tǒng)計(jì),用SPSS 26.0進(jìn)行主成分分析,用Duncan檢驗(yàn)法進(jìn)行差異顯著性分析,利用SigmaPlot作圖。
2.1 木醋液對(duì)苗木生長(zhǎng)量的影響
與對(duì)照相比,木醋液顯著促進(jìn)了植株苗木生長(zhǎng)(表1),木醋液處理的苗木株高和地徑年增長(zhǎng)量分別是對(duì)照的1.60,2.18倍。對(duì)照的葉面積年增長(zhǎng)量為14.71 cm2,木醋液處理葉面積年增長(zhǎng)量為20.29 cm2,是對(duì)照的1.38倍。
表1 木醋液對(duì)苗木年生長(zhǎng)量的影響Tab.1 Effect of pyroligneous acids on the annual growth of seedlings
2.2 木醋液對(duì)土壤主要養(yǎng)分含量的影響
施用木醋液后,7,10月土壤養(yǎng)分含量變化如表2所示,經(jīng)木醋液處理后土壤主要養(yǎng)分含量均高于對(duì)照。7月木醋液處理有機(jī)質(zhì)、全氮、堿解氮、有效磷和速效鉀含量分別為CK1的1.31,1.38,1.20,1.60,1.65倍,且差異達(dá)顯著水平(P<0.05)。10月木醋液處理有機(jī)質(zhì)、全氮、堿解氮、有效磷和速效鉀含量分別為CK2的1.12,1.03,1.58,1.40,1.25倍,差異亦達(dá)顯著水平(P<0.05)。
表2 土壤主要養(yǎng)分含量變化Tab.2 Changes in the content of major soil nutrients
2.3 木醋液處理對(duì)土壤酶活性的影響
7,10月土壤酶活性如表3所示,相較于對(duì)照,木醋液處理土壤蔗糖酶、脲酶活性均顯著提高(P<0.05),7月蔗糖酶、脲酶活性分別是對(duì)照的1.60,1.53倍,10月分別是對(duì)照的2.10,1.18倍。與對(duì)照相比,木醋液處理過(guò)氧化氫酶活性雖有所提高,但無(wú)顯著差異。7月,堿性磷酸酶活性是對(duì)照的1.59倍,而10月低于對(duì)照。
表3 不同季節(jié)土壤酶活性的變化Tab.3 Changes in soil enzyme activity in different seasons
2.4 不同季節(jié)根際微生物多樣性分析
2.4.1 根際細(xì)菌和真菌Alpha多樣性分析 木醋液處理與對(duì)照Coverage指數(shù)均在0.99以上,7,10月根際細(xì)菌和真菌Alpha多樣性變化如表4所示,MC1和MC2木醋液處理土壤樣品中細(xì)菌和真菌的ACE指數(shù)、Chao1指數(shù)、Shannon指數(shù)均高于對(duì)照。其中10月木醋液處理后細(xì)菌和真菌ACE、Chao1、Shannon指數(shù)為最高。
表4 不同季節(jié)根際細(xì)菌和真菌Alpha多樣性分析Tab.4 Alpha diversity of bacteria and fungi in different seasons
2.4.2 根際細(xì)菌和真菌Beta多樣性分析 細(xì)菌組間主成分分析(PCA)結(jié)果如圖1所示,主成分1(PC1)和主成分2(PC2)貢獻(xiàn)率分別為83.62%,9.70%。7,10月木醋液處理與對(duì)照之間的相似性較低,菌群間的多樣性差異較大。
圖1 不同季節(jié)細(xì)菌PCA分析Fig.1 PCA analysis of bacteria in different seasons
真菌組間PCA分析結(jié)果見(jiàn)圖2,木醋液處理與對(duì)照相比真菌群落有明顯差別,主成分2(PC2)和主成分3(PC3)貢獻(xiàn)率分別為33.33%,3.66%,7,10月木醋液處理與對(duì)照之間的相似性較低且不在同一向限,菌群多樣性差異較大。
圖2 不同季節(jié)真菌PCA分析Fig.2 PCA analysis of fungi in different seasons
2.4.3 不同季節(jié)根際微生物優(yōu)勢(shì)群落分析
2.4.3.1 不同季節(jié)根際細(xì)菌優(yōu)勢(shì)群落分析 在門水平上對(duì)細(xì)菌各處理的相對(duì)豐度進(jìn)行分析,結(jié)果如圖3所示,根際土壤細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)變化相對(duì)較小,CK1、MC1、CK2、MC2相對(duì)豐度前5的細(xì)菌優(yōu)勢(shì)門為變形菌門(Proteobacteria)(33.85%,34.96%,34.88%,31.49%)、酸桿菌門(Acidsobacteria)(22.05%,21.89%,22.59%,22.96%)、芽單胞菌門(Gemmatimonadetes)(10.59%,9.97%,9.56%,9.85%)、綠彎菌門(Chloroflexi)(9.52%,9.47%,9.05%,8.75%)和棒狀桿菌門(Rokubacteria)(5.98%,6.28%,5.14%,5.11%)。7月,與CK1相比,木醋液處理顯著增加了變形菌門和棒狀桿菌門的相對(duì)豐度,分別增加了1.11,0.30百分點(diǎn);降低了酸桿菌門、芽單胞菌門和綠彎菌門的相對(duì)豐度,分別降低了0.16,0.62,0.05百分點(diǎn)。10月,與CK2相比,木醋液處理增加了酸桿菌門和芽單胞菌門的相對(duì)豐度,分別增加了0.37,0.29百分點(diǎn);降低了變形菌門、綠彎菌門和棒狀桿菌門的相對(duì)豐度,分別降低了3.39,0.30,0.03百分點(diǎn)。
圖3 不同季節(jié)細(xì)菌門水平物種相對(duì)豐度Fig.3 Relative abundance of species at the bacteria phylum level in different seasons
在屬水平根際細(xì)菌相對(duì)豐度如圖4所示,CK1、MC1、CK2、MC2相對(duì)豐度前5的細(xì)菌優(yōu)勢(shì)屬為uncultured_bacterium_c_Subgroup_6(7.33%,7.73%,7.52%,7.79%)、uncultured_bacterium_f_Gemmatimonadaceae(7.73%,7.37%,6.74%,6.63%)、uncultured_bacterium_o_Rokubacteriales(6.16%,5.98%,4.98%,5.14%)、RB41(4.19%,5.50%,5.43%,4.74%)和MND1(3.74%,4.46%,3.47%,3.10%)。7月,與CK1相比,木醋液處理增加了土壤中uncultured_bacterium_c_Subgroup_6、RB41和MND1的相對(duì)豐度,分別增加0.40,1.31,0.72百分點(diǎn)。降低了uncultured_bacterium_f_Gemmatimonadaceae和uncultured_bacterium_o_Rokubacteriales的相對(duì)豐度,分別降低了0.36,0.18百分點(diǎn)。10月,與CK2相比,木醋液處理增加了uncultured_bacterium_c_Subgroup_6和uncultured_bacterium_o_Rokubacteriales的相對(duì)豐度,分別增加了0.27,0.16百分點(diǎn);降低了uncultured_bacterium_f_Gemmatimonadaceae、RB41和MND1的相對(duì)豐度,分別降低了0.11,0.69,0.37百分點(diǎn)。其中注釋到的細(xì)菌還有硝化螺旋菌屬(Nitrospira)和鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)。7月相對(duì)豐度分別增加了22.83,11.25百分點(diǎn);10月硝化螺旋菌屬增加了17.17百分點(diǎn),鞘氨醇單胞菌屬降低了3.56百分點(diǎn)。
圖4 不同季節(jié)細(xì)菌屬水平物種相對(duì)豐度Fig.4 Relative abundance of species at the bacteria genus level in different seasons
2.4.3.2 不同季節(jié)根際真菌優(yōu)勢(shì)群落分析 在門水平上對(duì)真菌各處理的相對(duì)豐度進(jìn)行分析,結(jié)果如圖5所示,土壤真菌群落鑒定為9門,CK1、MC1、CK2、MC2相對(duì)豐度前5的真菌優(yōu)勢(shì)門為子囊菌門(Ascomycota)(42.85%,37.25%,61.16%,66.14%)、擔(dān)子菌門(Basidiomycota)(13.32%,7.00%,11.99%,11.40%)、被孢霉門(Mortierellomycota)(6.67%,3.83%,6.03%,7.04%)、壺菌門(Chytridiomycota)(0.23%,0.21%,2.37%,1.05%)和球囊菌門(Glomeromycota)(0.23%,0.09%,0.28%,0.23%)。未得到分類學(xué)注釋的真菌(Unclassified)(29.06%,47.17%,14.67%,11.03%)占有很大比例。7月,與CK1相比,木醋液處理降低了子囊菌門、擔(dān)子菌門、被孢霉門、壺菌門和球囊菌門的相對(duì)豐度,分別降低了5.60,6.32,2.84,0.02,0.14百分點(diǎn)。10月,與CK2相比,木醋液處理增加了子囊菌門和被孢霉門的相對(duì)豐度,分別增加了4.98,1.01百分點(diǎn);降低了擔(dān)子菌門、壺菌門和球囊菌門的相對(duì)豐度,分別降低了0.59,1.32,0.05百分點(diǎn)。
圖5 不同季節(jié)真菌門水平物種相對(duì)豐度Fig.5 Relative abundance of species at the fungi phylum level in different seasons
在屬水平根際真菌相對(duì)豐度分析如圖6所示,在屬水平上共檢測(cè)出9個(gè)真菌屬,CK1、MC1、CK2、MC2相對(duì)豐度前5的真菌優(yōu)勢(shì)屬為:枝孢屬(Cladosporium)(0.46%,0.56%,11.79%,14.41%)、被孢霉屬(Mortierella)(5.91%,3.08%,5.96%,6.51%)、土赤殼屬(Ilyonectria)(12.23%,1.50%,1.96%,1.11%)、久浩酵母屬(Guehomyces)(3.55%,2.41%,4.69%,3.17%)和鐮刀菌屬(Fusarium)(2.04%,1.81%,2.49%,2.24%)。7月,與CK1相比,木醋液處理降低了被孢霉屬、土赤殼屬、久浩酵母屬和鐮刀菌屬的相對(duì)豐度,分別降低了2.83,10.73,1.14,0.23百分點(diǎn);增加了枝孢屬的相對(duì)豐度,增加了0.10百分點(diǎn)。10月,與CK2相比,木醋液處理降低了土赤殼屬、久浩酵母屬和鐮刀菌屬的相對(duì)豐度,分別降低了0.85,1.52,0.25百分點(diǎn);提高了枝孢霉和被孢霉屬的相對(duì)豐度,分別增加了2.62,0.55百分點(diǎn)。
圖6 不同季節(jié)真菌屬水平物種相對(duì)豐度Fig.6 Relative abundance of species at the fungi genus level in different seasons
2.4.4 不同季節(jié)根際微生物相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)分析 正相關(guān)表示菌株之間存在共同的環(huán)境偏好或潛在的相互作用,負(fù)相關(guān)表示二者之間存在對(duì)抗作用。7,10月細(xì)菌相關(guān)性分析如圖7所示,種群豐富度最高的細(xì)菌分別為RB41、未確定到屬的芽單胞菌科(Gemmatimonadaceae)和未確定到屬的羅庫(kù)菌目(Rokubacteriales)。RB41與uncultured_bacterium_f_TRA3-20呈負(fù)相關(guān)。未確定到屬的芽單胞菌科與uncultured_bacterium_c_P2-11E呈負(fù)相關(guān)。未確定到屬的羅庫(kù)菌目與假苯基桿菌(Phenylobacterium)存在協(xié)同關(guān)系。7,10月真菌相關(guān)性如圖8所示,屬水平相關(guān)性最高的前50個(gè)真菌種類之中,種群豐富度最高的三類真菌分別為被孢霉屬、土赤殼屬和久浩酵母屬。被孢霉屬與絲殼屬(Kernia)呈正相關(guān),與Knufia和莫氏黑粉菌屬(Moesziomyces)呈負(fù)相關(guān)。土赤殼屬與絲孢菌屬(Scedosporium)呈負(fù)相關(guān)。鐮刀菌屬與Lectera之間存在拮抗作用。
1.AKYG587;2.溶菌;3.Reyranella;4.SM1A02;5.uncultured_bacterium_o_NB1-j;6.紅游動(dòng)菌屬;7.uncultured_bacterium_c_KD4-96;8.Gaiella;9.假苯基桿菌;10.uncultured_bacterium_o_SBR1031;11.uncultured_bacterium_f_Rhodanobacteraceae;12.未分類到屬的脫硫盒菌科;13.Candidatus_Solibacter;14.未分類到屬的蓋勒氏菌目;15.uncultured_bacterium_c_P2-11E;16.Hirschia;17.uncultured_bacterium_c_Subgroup_25;18.uncultured_bacterium_f_Microscillaceae;19.未分類到屬的變形菌綱;20.uncultured_bacterium_c_JG30-KF-CM66;21.鞘氨醇單胞菌屬;22.Arenimonas;23.uncultured_bacterium_f_KF-JG30-B3;24.馬賽菌;25.未分類到屬的噬幾丁質(zhì)菌科;26.Gemmatirosa;27.未分類到屬的芽單胞菌屬;28.uncultured_bacterium_o_S085;29.硝化螺旋菌屬;30.節(jié)桿菌屬;31.uncultured_bacterium_c_AKAU4049;32.RB41;33.uncultured_bacterium_o_Subgroup_2;34.uncultured_bacterium_f_TRA3-20;35.uncultured_bacterium_f_A4b;36.Pseudolabrys;37.uncultured_bacterium_f_SC-I-84;38.酸桿菌屬;39.未分類到屬的裝甲菌門;40.未分類到屬的厭氧繩菌科;41.IS-44;42.Bryobacter;43.uncultured_bacterium_c_S0134_terrestrial_group;44.uncultured_bacterium_c_OM190;45.uncultured_bacterium_o_Dadabacteriales;46.未分類到屬的羅庫(kù)菌目;47.Steroidobacter;48.未分類到屬的酸桿菌目;49.uncultured_bacterium_f_Solimonadaceae;50.PAUC26f;51.uncultured_bacterium_c_Subgroup_15.
1.土赤殼屬; 2.漢納酵母屬; 3.鐮刀菌屬; 4.Calcarisporiella;5.Hydnophlebia;6.Mrakia;7.Lectera;8.莫氏黑粉菌屬;9.Vishniacozyma;10.Sphaerosporella;11.絲殼屬;12.Paurocotylis;13.阿德利長(zhǎng)西氏酵母;14.線黑粉酵母屬;15.桑帕約氏酵母;16.久浩酵母屬;17.Typhula;18.毛殼菌屬;19.赭霉屬;20.紅酵母屬;21.異莖點(diǎn)霉屬;22.平臍蠕孢屬;23.伽穆孢屬;24.周刺座霉屬;25.乳突赤殼屬;26.帚枝霉;27.黃曲霉;28.Papiliotrema;29.Rhizophagus;30.Knufia;31.鬼傘屬;32.蟲(chóng)草菌屬;33.絲孢菌屬;34.柄孢殼屬;35.鏈格孢屬;36.炭疽菌屬;37.油壺菌屬;38.粉紅粘帚霉;39.Powellomyces;40.Lophiostoma;41.小球腔菌屬;42.Plectosphaerella;43.裂褶菌;44.Latorua;45.梭孢殼屬;46.被孢霉;47.馬拉色霉菌屬;48.短柄霉屬;49.Ramicandelaber;50.Stagonosporopsis;51.盤菌屬。
2.4.5 根際細(xì)菌和真菌群落組成與土壤生物活性的相關(guān)性分析 土壤細(xì)菌門水平群落分布與土壤養(yǎng)分含量和土壤酶活性的冗余分析如圖9所示,第一、二排序軸的累計(jì)貢獻(xiàn)率為46.03%。變形菌門和擬桿菌門(Bacteroidetes)位于第一軸正端,與脲酶、全氮、有機(jī)質(zhì)、過(guò)氧化氫酶、堿性磷酸酶、pH值呈正相關(guān),酸桿菌門與全氮、有機(jī)質(zhì)、過(guò)氧化氫酶、堿性磷酸酶、pH值呈正相關(guān);而硝化螺旋菌門(Nitrospirae)、棒狀桿菌門、芽單胞菌門、綠彎菌門、黏膠球形菌門(Latescibacteria)和浮霉菌門(Planctomycetes)位于第一軸負(fù)軸,與土壤主要養(yǎng)分和酶活性的相關(guān)關(guān)系與酸桿菌門相反。從圖10可看出,土壤細(xì)菌屬水平群落分布與土壤養(yǎng)分含量和土壤酶活性的RDA分析表明,第一、二排序軸的累計(jì)貢獻(xiàn)率為38.41%。RB41、Ellin6055和鞘氨醇單胞菌屬位于第一軸正端,與土壤微生物全氮、速效鉀、有效磷、堿性磷酸酶、有機(jī)質(zhì)、脲酶、pH值呈正相關(guān),Bryobacter和Subgroup_10與全氮、有機(jī)質(zhì)、pH值、過(guò)氧化氫酶呈正相關(guān);Gaiella、mle1-7、赭黃嗜鹽囊菌(Haliangium)、硝化螺旋菌和MND1位于第一軸負(fù)端,與土壤養(yǎng)分和酶活性的相關(guān)關(guān)系與鞘氨醇單胞菌屬相反。
圖9 細(xì)菌門水平RDA分析Fig.9 Bacteria phylum level RDA analysis
圖10 細(xì)菌屬水平RDA分析Fig.10 Bacteria genus level RDA analysis
土壤真菌門水平群落分布與土壤養(yǎng)分含量和土壤酶活性的冗余分析表明(圖11),第一、二排序軸的累計(jì)貢獻(xiàn)率為53.12%。表明土壤養(yǎng)分含量和酶活性對(duì)真菌群落結(jié)構(gòu)有較大的影響。梳霉門(Kickxellomycota)與堿解氮、蔗糖酶、有效磷、速效鉀呈正相關(guān);Aphelidiomycota和Calcarisporiellomycota與堿解氮、pH值呈正相關(guān)。而子囊菌門、擔(dān)子菌門、壺菌門和油壺菌門(Olpidiomycota)則位于第一軸負(fù)端,與土壤養(yǎng)分和酶活性的相關(guān)關(guān)系與梳霉門相反。土壤真菌屬水平群落分布與土壤養(yǎng)分含量和土壤酶活性的冗余分析表明(圖12),第一、二排序軸共可以解釋土壤真菌群落組成空間變化的35.40%。鏈格孢屬、枝孢屬、Lectera和露濕擬漆斑菌(Paramyrothecium)位于第一軸正端,與土壤微生物全氮、有機(jī)質(zhì)、脲酶、過(guò)氧化氫酶、pH值呈正相關(guān);鐮刀菌屬和久浩酵母屬與土壤微生物全氮、有機(jī)質(zhì)、脲酶、過(guò)氧化氫酶、有效磷、速效鉀、堿性磷酸酶、pH值呈正相關(guān)。Solicoccozyma、乳突赤殼屬(Thelonectria)、土赤殼屬和被孢霉屬位于第一軸負(fù)端,Solicoccozyma與堿解氮、蔗糖酶呈正相關(guān);乳突赤殼屬和土赤殼屬與堿解氮、蔗糖酶、堿性磷酸酶、有效磷、速效鉀呈正相關(guān);被孢霉屬與過(guò)氧化氫酶和pH值呈正相關(guān)。
圖11 真菌門水平RDA分析Fig.11 Fungi phylum level RDA analysis
圖12 真菌屬水平RDA分析Fig.12 Fungi genus level RDA analysis
木醋液中含有大量的有機(jī)成分,能提高土壤有機(jī)質(zhì)、全氮、堿解氮和有效磷等主要養(yǎng)分含量。同時(shí),還含有有機(jī)化合物和活性分子,可改善因連年種植破壞的土壤結(jié)構(gòu),促進(jìn)土壤團(tuán)粒間的離子遷移,釋放原本被固定的土壤養(yǎng)分[16-17]。周紅娟等[18]將木醋液灌施到鹽堿土中,提高了土壤有機(jī)質(zhì)、全氮和速效磷等養(yǎng)分含量。而本研究中稀釋100倍的木醋液灌根處理后,蘋果再植病土壤主要養(yǎng)分含量均顯著增加。
此外,已有研究發(fā)現(xiàn),木醋液富含有機(jī)小分子物質(zhì),施用到土壤之中可以顯著提升土壤有效碳源的含量,為微生物繁殖營(yíng)造良好的營(yíng)養(yǎng)條件,不僅可以促進(jìn)微生物的繁殖還能提升微生物的活性,使其分泌出更多的酶,從而表現(xiàn)為土壤酶活性增大[19]。除此之外,木醋液所含有的部分有機(jī)物可直接作為底物,使微生物合成的酶含量增加,也表現(xiàn)為土壤酶活性的提升。程虎等[20]在小麥試驗(yàn)田中施入木醋液顯著提升了土壤酶活性,并且效果可持續(xù)60 d以上。本研究發(fā)現(xiàn),添加木醋液后,土壤蔗糖酶、脲酶和過(guò)氧化氫酶活性均有不同程度的增加,直到秋季,木醋液處理的根際微生物多樣性仍然顯著高于對(duì)照,表明木醋液有較好的持效性。
木醋液通過(guò)影響土壤微生物種群的多樣性和有益菌的豐度,調(diào)節(jié)土壤中細(xì)菌和真菌的微生態(tài)環(huán)境,最終改良再植病土壤。曾婕等[21]研究木醋液對(duì)植煙土壤微生物多樣性的影響時(shí)發(fā)現(xiàn),灌施木醋液顯著提升了土壤中細(xì)菌和真菌的多樣性。本研究表明,100倍木醋液灌根處理后提高了根際微生物群落Alpha多樣性和Beta多樣性。木醋液由多種有機(jī)物混合而成,其中部分有機(jī)物是土壤微生物生長(zhǎng)發(fā)育所必需的,可直接被其吸收利用,促進(jìn)微生物的發(fā)育繁殖。一些有機(jī)物經(jīng)過(guò)分解以后能夠被微生物利用,從而增加微生物的數(shù)量,提高微生物活性。與此同時(shí),還有一些有機(jī)物,例如鄰苯二酚、4-甲基茶兒酚等已證明具有明顯的抑菌作用,可減少微生物的數(shù)量或者抑制微生物的活性[3]。由此可知,施用木醋液可優(yōu)化土壤微生物群落結(jié)構(gòu),促進(jìn)土壤有益細(xì)菌的繁殖,抑制再植病的致病真菌,與王曉等[22]研究生物醋液對(duì)植煙土壤微生物改良結(jié)果一致。本研究中隨著季節(jié)的變化,土壤微生物的群落組成、含量和活性均會(huì)發(fā)生變化。100倍木醋液灌根處理后,7,10月根際土壤中硝化螺旋菌屬、鞘氨醇單胞菌屬、RB41和MND1等有益細(xì)菌屬相對(duì)豐度顯著增加;鐮刀菌屬、土赤殼屬和鏈格孢菌屬等致病真菌相對(duì)豐度顯著下降。對(duì)于根際細(xì)菌來(lái)說(shuō),硝化螺旋菌具有參與土壤硝化作用,與氮元素的轉(zhuǎn)化和生物有效性緊密相關(guān)[23]。鞘氨醇單胞菌屬具有較強(qiáng)的解磷、解鉀和固氮的能力,顯著地提升了土壤中的過(guò)氧化氫酶、脲酶和磷酸酶活性[24],而RB41和MND1屬作為土壤的優(yōu)勢(shì)菌屬均有報(bào)道,李倩等[25]對(duì)黃花蒿連作土壤的研究中檢測(cè)出RB41、MND1為其連作土壤的優(yōu)勢(shì)菌屬。李強(qiáng)[26]研究表明,RB41是決定巖溶斷陷盆地土壤細(xì)菌-真核生物系統(tǒng)的關(guān)鍵類群。鄒慶甲等[27]研究證明,鐮刀菌屬和鏈格孢菌是河北省蘋果再植病害的主要疑似病原菌。伍曉麗等[28]發(fā)現(xiàn),土赤殼屬是黃連根腐病的致病真菌。本研究中對(duì)于已報(bào)道的根際致病真菌鐮刀菌屬、土赤殼屬和鏈格孢菌屬在夏季和秋季均呈現(xiàn)下降趨勢(shì),其中鐮刀菌屬與其他種群相關(guān)性較弱,且呈負(fù)相關(guān)。
RDA分析可以看出,真菌和細(xì)菌群落無(wú)論在門水平還是屬水平均與土壤全氮、有機(jī)質(zhì)、脲酶和蔗糖酶密切相關(guān)。在細(xì)菌屬水平上,有益細(xì)菌RB41、MND1、硝化螺旋菌屬和鞘氨醇單胞菌屬與土壤微生物全氮、速效鉀、有效磷、堿性磷酸酶、有機(jī)質(zhì)、脲酶和pH值呈正相關(guān)。真菌屬水平上,主要致病菌鐮刀菌屬和鏈格孢屬等與全氮、有機(jī)質(zhì)、脲酶、過(guò)氧化氫酶以及pH值呈現(xiàn)正相關(guān)。本研究中根際細(xì)菌和真菌都與pH值呈正相關(guān),與李青梅等[29]研究獼猴桃園土壤結(jié)構(gòu)結(jié)果一致。另外,本研究中變化菌屬與全氮、有機(jī)質(zhì)、脲酶等密切相關(guān),這可能是由于脲酶是土壤碳氮循環(huán)轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵酶,可通過(guò)調(diào)控碳、氮元素在土壤生態(tài)系統(tǒng)的流動(dòng)與循環(huán),來(lái)影響土壤根際微生物群落結(jié)構(gòu)[30]。而有機(jī)質(zhì)和全氮是衡量土壤肥力的重要指標(biāo),施用木醋液提高土壤微生物生物量和氮的含量,并減少氮的損失。
木醋液灌根可提高蘋果再植土壤養(yǎng)分和酶活,增加土壤微生物多樣性,改善土壤微生物群落結(jié)構(gòu),有利于促進(jìn)植株生長(zhǎng),增強(qiáng)植株抗性,減輕再植病的危害。