楊 濤，虎 銀，張國俊，張 虎

（1.廈門市動物疫病預(yù)防控制中心，福建廈門 361009；2.寧夏回族自治區(qū)彭陽縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，寧夏彭陽 756500）

布魯氏菌?。╞rucellosis，以下簡稱布?。┦怯刹剪斒暇鸬囊环N急性或慢性人獸共患傳染病，其傳染源是患病及帶菌動物，最危險的是受感染的妊娠母畜。傳播因子包括：病畜流產(chǎn)及正常分娩物、生殖道分泌物、排泄物，病畜乳、內(nèi)臟、皮毛，以及布魯氏菌污染的水、土壤、塵埃等；傳播途徑包括：經(jīng)皮膚黏膜、消化道、呼吸道感染，通過子宮胎盤垂直傳播。布魯氏菌對外界環(huán)境抵抗力較強，可在塵土、糞便、水、泥漿、流產(chǎn)胎、土壤、肉及奶制品中長期存活，如在污染土壤、水中可存活1～4 個月，冬季在糞便中可存活約2 個月，但在pH 低于4 的環(huán)境下快速死亡，當(dāng)pH 低于3.5 時則極快死亡[1]。

近年來，各級獸醫(yī)機構(gòu)對種公牛和奶牛布病防控極為關(guān)注，而對肉牛布病重視程度一般，養(yǎng)殖場戶對肉牛布病防控也缺乏認(rèn)識。隨著肉牛養(yǎng)殖的快速發(fā)展，全國肉牛布病發(fā)生呈現(xiàn)持續(xù)上升趨勢，已成為阻礙肉牛產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展和威脅公共衛(wèi)生安全的主要人獸共患病[1-2]。

2021 年3—5 月，寧夏回族自治區(qū)彭陽縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所對當(dāng)?shù)厝馀ｉ_展了布病等幾種常見傳染病的流行狀況調(diào)查，對采集的肉牛血清進(jìn)行了布魯氏菌感染抗體檢測，根據(jù)檢測結(jié)果估計，當(dāng)?shù)厝馀２疾€體陽性率為5.0%，場戶流行率為11.8%（95%CI=9.6%～14.3%）。本研究于2021 年6 月，通過問卷形式進(jìn)行調(diào)查，開展病例對照研究，旨在探索彭陽縣肉牛布病的主要風(fēng)險因素，為當(dāng)?shù)厝馀２疾》揽夭呗灾贫ㄌ峁┮罁?jù)。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)域

彭陽縣位于寧夏回族自治區(qū)南部邊緣，六盤山東麓，西連固原市原州區(qū)，東、南、北環(huán)臨甘肅省慶陽市和平?jīng)鍪校r(nóng)業(yè)人口約占90%，以肉牛和肉羊養(yǎng)殖為主。彭陽縣轄區(qū)內(nèi)共有4 鎮(zhèn)8 鄉(xiāng)，分別是白陽鎮(zhèn)（縣政府所在地）、古城鎮(zhèn)、紅河鎮(zhèn)、王洼鎮(zhèn)、新集鄉(xiāng)、城陽鄉(xiāng)、孟塬鄉(xiāng)、馮莊鄉(xiāng)、交岔鄉(xiāng)、羅洼鄉(xiāng)和小岔鄉(xiāng)，行政村合計156 個。彭陽縣對肉牛不實施布病免疫。截至2020 年底，彭陽縣共存欄肉牛約10 萬頭，肉牛養(yǎng)殖場戶約1.2 萬個，戶均存欄牛8～9 頭，其中存欄4～8 頭的場戶數(shù)最多，存欄≥20 頭的場戶數(shù)僅占全縣肉牛養(yǎng)殖總場戶數(shù)的4%左右。

1.2 研究設(shè)計

采用匹配設(shè)計的病例對照研究方法。病例組為肉牛布魯氏菌感染抗體陽性養(yǎng)殖場戶（其養(yǎng)殖的肉牛中至少有1 頭被檢測為感染抗體陽性），對照組為肉牛布魯氏菌感染抗體陰性的養(yǎng)殖場戶，以近兩年肉牛養(yǎng)殖場戶是否同時養(yǎng)羊為主要觀察的暴露因素。匹配原則為，病例組和對照組肉牛養(yǎng)殖場戶同在一個行政村，和/或具有相似養(yǎng)殖規(guī)模，養(yǎng)牛時間差異在±3 年內(nèi)，按此順序進(jìn)行篩選，匹配比例為1:2。經(jīng)咨詢鄉(xiāng)村獸醫(yī)，對照組肉牛養(yǎng)殖場戶中同時養(yǎng)羊的比例約為40%，預(yù)期羊和肉?；祓B(yǎng)養(yǎng)殖場戶的肉牛感染布魯氏菌概率是不養(yǎng)羊肉牛養(yǎng)殖場戶的2.5 倍，設(shè)檢驗水準(zhǔn)α=0.05（雙側(cè)），把握度1-β=0.80，病例與對照之間危險因素的相關(guān)程度Phi 系數(shù)設(shè)為0.2，利用PASS 11 軟件計算得到病例組和對照組的樣本量分別為69和138例。為提高檢驗效能，在此基礎(chǔ)上把病例組和對照組的樣本量各增加10%。

1.3 問卷設(shè)計

調(diào)查問卷主要涉及兩個方面內(nèi)容：一是購牛渠道和是否從縣外買牛等信息；二是自家、鄰居家和親朋好友家的養(yǎng)羊情況，以及近兩年母牛和母羊流產(chǎn)情況。但問卷中隱去敏感詞匯，以“某病”替代“布病”，防止被調(diào)查人員因了解布病而不愿回答或故意隱瞞實際情況。調(diào)查采用盲法，即參與現(xiàn)場問卷調(diào)查的工作人員（縣疫病控制中心業(yè)務(wù)骨干和鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)）不知道被調(diào)查養(yǎng)殖場戶肉牛是否感染布魯氏菌。

1.4 數(shù)據(jù)分析

把調(diào)查問卷原始信息錄入Excel 軟件并整理成數(shù)字格式，對研究群基本情況進(jìn)行描述性統(tǒng)計。連續(xù)型變量統(tǒng)計結(jié)果用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（MX±S）或中位數(shù)及四分位間距（M，IQR）描述，分類型變量統(tǒng)計結(jié)果用百分比描述，連續(xù)型變量為或近似正態(tài)分布時，其與布病狀況的關(guān)聯(lián)分析采用t檢驗，偏態(tài)分布則用U檢驗，分類型變量與布病狀況的關(guān)聯(lián)分析采用OR 值和χ2檢驗，使用Epi info 軟件開展單因素和多因素條件Logistic 回歸分析。單因素條件Logistic 回歸分析結(jié)果中，P＜0.25 的變量被保留進(jìn)入多因素條件Logistic 回歸分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 研究群基本特征描述

彭陽縣前期開展的肉牛布病橫斷面調(diào)查中，共發(fā)現(xiàn)了89 個布魯氏菌感染抗體陽性場戶，研究群納入過程見圖1。病例組和對照組基本信息的統(tǒng)計描述見表1。差異性比較結(jié)果顯示：兩組在肉牛存欄量、養(yǎng)牛場所與主要交通公路距離、養(yǎng)牛持續(xù)時間、牛舍面積、周圍養(yǎng)牛場戶數(shù)、養(yǎng)殖類型和養(yǎng)牛方式方面均無顯著差異（P＞0.05），但兩組在是否通過經(jīng)紀(jì)人買牛（P=0.002）和是否會讓經(jīng)紀(jì)人進(jìn)牛圈（P=0.003）這兩個方面存在有統(tǒng)計學(xué)意義的差異。

表1 病例組和對照組基本情況描述及差異性比較結(jié)果

2.2 單因素風(fēng)險因素分析

篩選出調(diào)查問卷中的9 條信息作為暴露因素，采用單因素條件Logistic 回歸，分析與肉牛布病的關(guān)聯(lián)性，并估計OR 值和95%CI。表2 為彭陽縣肉牛布病與暴露因素關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果，其中4 個因素與肉牛布病存在統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)（P＜0.05），分別是通過經(jīng)紀(jì)人買牛（OR=5.19，95%CI=1.57～17.18）、讓經(jīng)紀(jì)人進(jìn)牛圈（OR=3.02，95%CI=1.48～6.15）、家/場里養(yǎng)的母羊近兩年有流產(chǎn)史（OR=1.92，95%CI=1.01～3.63）和親朋好友家養(yǎng)羊（OR=2.23，95%CI=1.12～4.46）。

表2 彭陽縣肉牛布病與暴露因素關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果

2.3 多因素風(fēng)險因素分析

把單因素分析結(jié)果中P＜0.25 的變量納入多因素條件Logistic 回歸進(jìn)行分析，由于“d.通過牛經(jīng)紀(jì)人買?！焙汀癳.會讓牛經(jīng)紀(jì)人進(jìn)牛圈”這兩個暴露因素存在關(guān)聯(lián)性，兩者的Phi 系數(shù)為0.53（P＜0.005），因此保留“d.通過牛經(jīng)紀(jì)人買?！钡淖兞窟M(jìn)入回歸模型。單因素分析發(fā)現(xiàn)，近兩年肉牛養(yǎng)殖場戶同時養(yǎng)羊與不養(yǎng)羊?qū)κ欠駮鹑馀２疾]有統(tǒng)計學(xué)差異，而近兩年家/場里母羊有流產(chǎn)史可能是風(fēng)險因素，因此對“g.家/場里養(yǎng)的母羊近兩年有流產(chǎn)史”這個暴露因素中的否和不養(yǎng)羊再進(jìn)行細(xì)分，設(shè)置成啞變量（多分類變量）后進(jìn)入回歸模型，表3 為最終模型。該模型顯示，“d.通過牛經(jīng)紀(jì)人買?！钡膱鰬簦淙馀８腥静剪斒暇娘L(fēng)險增大（OR=5.05，95%CI=1.50～17.01），與不養(yǎng)羊的場戶相比，家/場里養(yǎng)羊且近兩年母羊有流產(chǎn)史可能增大肉牛感染布魯氏菌風(fēng)險（OR=1.86，95%CI=0.92～3.75）。該模型的-2 對數(shù)似然值（-2Log likelihood）為152.78，模型ROC 曲線下面積為0.630，可中度區(qū)分高低風(fēng)險場。

表3 彭陽縣肉牛布病多因素回歸模型

3 討論

寧夏六盤山地區(qū)近年來大力發(fā)展肉牛養(yǎng)殖，將肉牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展成為帶動六盤山連片貧困地區(qū)鞏固脫貧成果和支撐鄉(xiāng)村振興的主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)。彭陽縣是寧夏六盤山肉牛基地的中心，以肉牛養(yǎng)殖為主的草畜產(chǎn)業(yè)被列為全縣支柱性產(chǎn)業(yè)。而伴隨著肉牛養(yǎng)殖規(guī)模的快速擴大，近年來肉牛疾病也越來越多，其中就包括布病。2021 年初彭陽縣開展了當(dāng)?shù)厝馀３Ｒ姴≌{(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)厝馀２疾∫呀?jīng)出現(xiàn)了一定的空間分布特征，但對抽取的913 個養(yǎng)牛場戶相關(guān)人員進(jìn)行訪談后發(fā)現(xiàn)，只有47.4%的養(yǎng)殖場戶人員知道布病，大部分養(yǎng)殖場戶缺少對肉牛布病的防控意識。在我國西北地區(qū)的肉牛流通環(huán)節(jié)，專門從事肉牛交易及販運的人員（牛經(jīng)紀(jì)人）起著關(guān)鍵性作用。目前，彭陽縣所在的地級市固原市專門從事肉牛交易及販運者超過5 000 人，初步形成了以六盤山活畜交易市場、單家集活畜交易市場和古城肉牛交易市場為中心，62 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)活畜交易市場為輻射的肉牛交易網(wǎng)絡(luò)。彭陽縣90%以上養(yǎng)牛場戶的育肥牛和淘汰母?？颗＝?jīng)紀(jì)人上門收購，大部分養(yǎng)牛場戶也是通過牛經(jīng)紀(jì)人購入肉牛；運輸肉牛的車輛以販運車為主，絕大部分的拉牛車輛沒有按規(guī)定消毒；經(jīng)過調(diào)查得知，牛經(jīng)紀(jì)人都有進(jìn)牛圈查看肉牛的行為。這些都給疫病傳播帶來很大隱患，所以通過牛經(jīng)紀(jì)人買牛的方式與當(dāng)?shù)厝馀２疾〈嬖诿芮嘘P(guān)聯(lián)?？紤]到牛經(jīng)紀(jì)人在當(dāng)?shù)厝馀．a(chǎn)業(yè)發(fā)展中發(fā)揮了重要作用，應(yīng)該通過宣傳教育提高牛經(jīng)紀(jì)人的布病防控意識，比如改變牛經(jīng)紀(jì)人進(jìn)牛圈的行為，牛經(jīng)紀(jì)人販賣給當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶的肉牛應(yīng)附有布病抗體檢測證明，每次販運肉牛后應(yīng)對車輛進(jìn)行清洗消毒等。

牛通常感染牛種布魯氏菌，但也能感染羊種布魯氏菌。羊種布魯氏菌不僅感染羊和牛，也容易感染人。Médiha 等[3]曾報道養(yǎng)母羊（OR=43.12；95%CI=8.34～222.74）和處理流產(chǎn)母羊（OR=18.51；95%CI=5.18～66.09）是人感染布魯氏菌的風(fēng)險因素；趙媛等[4]研究發(fā)現(xiàn)，2012—2018 年寧夏人間布病發(fā)病率與羊存欄數(shù)有一定的相關(guān)性。我國北方地區(qū)人間布病病例以感染羊種3 型菌為主。劉志國等[5]研究發(fā)現(xiàn)，羊種布魯氏菌在牛、羊和野生動物中循環(huán)傳播，最終感染人群，是內(nèi)蒙古地區(qū)羊種布魯氏菌的潛在傳播模式之一；Anka 等[6]研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)羊是馬來西亞牛感染布魯氏菌的風(fēng)險因素（OR=8.9；95%CI=1.10～71.83）。彭陽縣近幾年來羊群布病時有發(fā)生，當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶牛羊混養(yǎng)的情況也不少。本次調(diào)查結(jié)果顯示，肉牛養(yǎng)殖場戶同時養(yǎng)羊不會增加肉牛感染布魯氏菌的風(fēng)險，但如果近兩年家/場里養(yǎng)的母羊有流產(chǎn)史，則可能會增加家/場里肉牛的感染風(fēng)險。但把該因素納入到多因素Logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)，其與肉牛布病的關(guān)聯(lián)還沒有達(dá)到P＜0.05 的統(tǒng)計學(xué)意義。這可能是由于本次調(diào)查到的家/場里母羊近兩年有流產(chǎn)史的場戶數(shù)量較少，因此需要增加樣本量進(jìn)一步開展調(diào)查，還可以把采集到的肉牛流產(chǎn)物送有資質(zhì)的實驗室進(jìn)行布魯氏菌分離培養(yǎng)和菌株分型。

病例對照研究是流行病學(xué)研究中探索可能病因的重要方法。它將研究對象分為病例組/對照組（更廣泛來說是陽性組/陰性組），比較發(fā)病/陽性事件發(fā)生前接觸暴露因素的狀況，通過比較暴露水平的差異性，初步分析暴露因素與陽性事件之間的因果關(guān)系。但病例對照研究屬于觀察性研究，由于存在著回憶偏倚，暴露因素與結(jié)局的關(guān)系可能會受到干擾因素影響，因此所研究的暴露因素與陽性事件的關(guān)系只是探索性的，其因果關(guān)系需要進(jìn)一步通過前瞻性研究（如隊列研究）予以確認(rèn)。

4 結(jié)論

本研究基于彭陽縣2021 年3—5 月開展的肉牛布病橫斷面調(diào)查結(jié)果，采用病例對照研究方法探索肉牛感染布魯氏菌的風(fēng)險因素，發(fā)現(xiàn)通過牛經(jīng)紀(jì)人買牛與當(dāng)?shù)厝馀２疾〈嬖诿芮嘘P(guān)聯(lián)。建議提高牛經(jīng)紀(jì)人的布病防控意識，進(jìn)一步調(diào)查當(dāng)?shù)匮蛉旱牟疾×餍袪顩r，并進(jìn)行布魯氏菌分型鑒定。本研究探明了彭陽縣肉牛布病的主要風(fēng)險因素，為當(dāng)?shù)厝馀２疾》揽夭呗灾贫ㄌ峁┝艘罁?jù)。