段愛莉，郭鳳春，張娜杰

（武威市食品檢驗(yàn)檢測中心，甘肅武威 733000）

黃冠梨是梨中的早熟品種，具有抗病性強(qiáng)、早果早產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。其營養(yǎng)價(jià)值豐富，主要含有多糖、蛋白質(zhì)、維生素B1和維生素B2等人體必需的營養(yǎng)元素，深受消費(fèi)者喜愛[1-2]。目前，黃冠梨主要分布在我國甘肅省、陜西省、河北省等地區(qū)。由于其營養(yǎng)豐富、含糖量高，受病蟲害影響較大。種植戶為提高農(nóng)業(yè)產(chǎn)量、增加收入，常采用化學(xué)藥物進(jìn)行病蟲害防治，不僅對(duì)生態(tài)環(huán)境造成污染，也出現(xiàn)農(nóng)藥殘留超標(biāo)現(xiàn)象[3-6]。因此，本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)武威市常用農(nóng)藥品種調(diào)查，確定采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法結(jié)合QuEChERS凈化技術(shù)，建立高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，HPLCMS/MS）法同時(shí)測定黃冠梨中31種農(nóng)藥殘留，為保障黃冠梨食用安全性提供科學(xué)的技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品來自武威市黃冠梨種植基地。

氯唑磷、三唑磷、甲拌磷、毒死蜱、對(duì)硫磷、氧樂果、殺撲磷、甲胺磷、噠螨靈、敵敵畏、水胺硫磷、丙溴磷、腈苯唑、甲霜靈、煙堿、滅多威、克百威、敵百蟲、硫線磷、啶蟲脒、吡蟲啉、多菌靈、滅蠅胺、烯酰嗎啉、噻蟲嗪、速滅威、乙酰甲胺磷、甲基毒死蜱、苯醚甲環(huán)唑、苯磺隆和涕滅威標(biāo)準(zhǔn)品，濃度為100 μg/mL，均來自中國農(nóng)業(yè)部；乙腈、甲醇、甲酸均為色譜純，賽默飛世爾公司；甲酸銨為色譜純，默克生命科學(xué)技術(shù)公司；丙酮為色譜純，天津大茂化學(xué)試劑廠；乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（Primarysecondary Amine，PSA）40～60 μm、十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）40～60 μm，均為Agilent公司。

1.2 儀器與設(shè)備

1290-6470 HPLC-MS/MS三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀，美國Agilent公司；3K15臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，德國Eppendorf公司；A11BC025分析研磨機(jī)，德國IKA公司；JEA502電子天平，上海浦春計(jì)量儀器有限公司； SQP 10 mg電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；AutoEVA-08IR全自動(dòng)定量濃縮儀，睿科儀器有限公司；YMT-2500PULS多管渦旋混勻儀，上海熙揚(yáng)儀器儀器有限公司；Milli-Q超純水機(jī)，美國Millipore公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確吸取一定量的濃度為100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液配 制 成0.001 μg/mL、0.005 μg/mL、0.010 μg/mL、0.020 μg/mL、0.050 μg/mL、0.100 μg/mL和0.200 μg/mL系列的31種混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.2 樣品制備

準(zhǔn)確稱取粉碎均勻的樣品10 g（精確至0.001 g），置于50 mL具塞離心管中，加入10 mL 0.1%甲酸-乙腈提取液，渦旋混勻5 min，振蕩25 min，在4 ℃下5 000 r/min離心10 min。準(zhǔn)確移取5.0 mL上清液加入含有C18150 mg、PSA 200 mg、MgSO41 000 mg的15 mL離心管中，渦旋混勻1 min，4 000 r/min離心10 min，吸取上清液過0.22 μm有機(jī)濾膜后待測。

1.3.3 儀器條件

（1）液相色譜條件。Agilent technologeies C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量2 μL；流速0.3 mL/min；后運(yùn)行時(shí)間5 min。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫條件

（2）質(zhì)譜條件。電噴霧離子源ESI+，霧化氣壓力0.35 MPa，離子源溫度350 ℃，干燥氣流速10 L/min，毛細(xì)管電壓4 000 V。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理

采用Quantitative Analysis(Quant-My-Way)軟件處 理數(shù)據(jù)，以MicrosoftExcel 2007和MassHunter Quanlitative Analysis軟件分析并繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取方法的確定

同時(shí)檢測31種農(nóng)藥殘留時(shí)，為避免基質(zhì)中干擾組分被提取，本實(shí)驗(yàn)選用0.1%甲酸水-乙腈作為提取劑，采用QuEChERS方法提取，濃縮后用0.1%甲酸水-乙腈定容，目標(biāo)分析體系中去除色素效果明顯，體系溶液透明清澈。

2.2 儀器測定參數(shù)優(yōu)化

2.2.1 流動(dòng)相梯度洗脫條件的確定

比較方案A（0～3.0 min，90%a；3.1～6.0 min， 90%a→55%a；6.1～18.0 min，30%a；18.1～22.0 min， 10%a；22.1～25.0 min，90%a）和方案B（見表1）兩種梯度條件下用0.1%甲酸水（a）和乙腈（b）為流動(dòng)相采集的31種農(nóng)藥的色譜圖，見圖1。根據(jù)各個(gè)目標(biāo)化合物的分離效果，確定方案B為本實(shí)驗(yàn)梯度洗脫條件。

圖1 兩種梯度洗脫方案對(duì)31種農(nóng)藥出峰的影響

2.2.2 流動(dòng)相體系的確定

比較3種流動(dòng)相乙腈-水、0.1%甲酸水乙腈-0.1%甲酸銨水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液體系下的色譜圖，同等測定條件下，考慮色譜峰的分離效果和響應(yīng)情況，確定乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相體系，見圖2。

圖2 不同流動(dòng)相對(duì)出峰的影響

2.2.3 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

將31種農(nóng)藥的單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.050 μg/mL）采用儀器自動(dòng)優(yōu)化的方式確定出動(dòng)態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測模式（Multiple Reaction Monitoring，MRM）條件，使其具有較高的靈敏度和選擇性。因此，本文以MRM方式建立了31種農(nóng)藥的質(zhì)譜條件，見表2。

表2 31種農(nóng)藥的質(zhì)譜條件

2.3 線性關(guān)系、檢出限及定量限

將系列標(biāo)準(zhǔn)工作液按優(yōu)化后條件進(jìn)樣測定，以濃度為橫坐標(biāo)x，峰面積y為縱坐標(biāo)，建立線性回歸方程，以儀器的3倍和10倍信噪比（S/N）為方法的檢出限和定量限。31種農(nóng)藥在0.001～0.200 μg/mL線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2為0.991 5～0.999 9，檢出限為0.000 25～0.025 00 mg/kg，定量限為0.001～0.075 mg/kg，基本滿足農(nóng)藥殘留檢測要求，結(jié)果見表3。

表3 31種農(nóng)藥的線性回歸方程與定量限

2.4 回收率和精密度試驗(yàn)

在黃冠梨空白樣品中添加3個(gè)水平（0.05 mg/kg、0.10 mg/kg、0.20 mg/kg），每個(gè)水平做6個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，其平均回收率為75.0%～111.5%，測定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.85%～6.70%，表明該方法準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，能夠滿足日常檢測需求。

2.5 樣品的測定

隨機(jī)采集武威市黃冠梨基地樣品共30批，檢出農(nóng)藥8種，見表4。其中克百威檢出率較高，為67.0%；毒死蜱次之，檢出率為33.0%。測定結(jié)果顯示，7種農(nóng)藥的殘留水平值較低，均低于GB 2763—2021規(guī)定的最大殘留限量值，農(nóng)藥三唑磷有檢出，但殘留量明顯低于定量限。

表4 30批次樣品的測定結(jié)果

3 結(jié)論

本文建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法結(jié)合QuEChERS技術(shù)測定黃冠梨中31種農(nóng)藥殘留的分析檢測方法。結(jié)果顯示，31種農(nóng)藥在0.001～0.200 μg/mL 線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.991 5～0.999 9，檢出限為0.000 25～0.025 00 mg/kg，回收率為75.0%～ 111.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.85%～6.70%。該方法前處理操作簡單，凈化效果好，準(zhǔn)確度和精密度高，適合黃冠梨中多種農(nóng)藥殘留的定性和定量測定，可為今后黃冠梨中農(nóng)藥殘留的監(jiān)測和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供一定的技術(shù)支撐。