王雯婧 武麗君

惡性腫瘤是全球第二大死因[1]。腫瘤細(xì)胞的抗原變化可被患者的免疫系統(tǒng)識(shí)別，刺激惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)因子的免疫反應(yīng)，其表現(xiàn)在多個(gè)方面，其一為自身抗體的出現(xiàn)[2]。自身免疫性疾病往往表達(dá)高滴度的抗核抗體(ANA)和(或)多種自身抗體。低滴度ANA可在無自身免疫性疾病的人群中檢測(cè)到，惡性腫瘤患者比健康人群更易檢測(cè)到低滴度的ANA?？闺p鏈DNA(dsDNA)抗體在50多年前首次被描述，它是一個(gè)多樣化的抗體，雖然其陽(yáng)性被認(rèn)為是一種與系統(tǒng)性紅斑狼瘡有關(guān)的自身免疫現(xiàn)象[3]，但同時(shí)也出現(xiàn)在其他疾病中并與多種癥狀有關(guān)[4]。此外，研究表明惡性腫瘤能夠刺激免疫反應(yīng)誘導(dǎo)自身抗體的產(chǎn)生，其可在無癥狀期檢測(cè)到[5]。因此，了解惡性腫瘤患者自身抗體的特點(diǎn)，檢測(cè)自身抗體可能有助于惡性腫瘤的早期診斷。本研究中我們將對(duì)比分析惡性實(shí)體腫瘤、血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者血清自身抗體的特點(diǎn)，以期為腫瘤性疾病早期診斷提供另一可能的參考指標(biāo)。

對(duì)象與方法

1.對(duì)象：納入2016年7月～2018年2月我院收治的惡性實(shí)體腫瘤患者316例(惡性實(shí)體腫瘤組)，其中男164例，女152例，年齡22～83歲，平均年齡(58.62±11.74)歲；其中婦科腫瘤57例(18.0%)，呼吸系統(tǒng)腫瘤68例(21.5%)，消化系統(tǒng)腫瘤152例(48.1%)，泌尿系統(tǒng)腫瘤21例(6.6%)，內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤9例(2.8%)，其他實(shí)體腫瘤9例(2.8%)。納入同期血液系統(tǒng)腫瘤患者297例(血液系統(tǒng)惡性腫瘤組)，其中男135例，女162例，年齡18～85歲，平均年齡(54.92±15.41)歲；其中白血病140例(47.1%)，淋巴瘤102例(34.3%)，骨髓瘤55例(18.5%)。再納入同期于我院健康體檢者307例(對(duì)照組)，其中男140例，女167例，年齡24～79歲，平均年齡(54.43±10.79)歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并感染性疾病、結(jié)締組織病、嚴(yán)重心腦血管疾病及后遺癥。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有受試者均知情同意。

2.方法：采用間接免疫熒光法(IIF)檢測(cè)ANA，以人喉癌上皮細(xì)胞(Hep-2)為底物，以免疫球蛋白(Ig) G標(biāo)記的抗人(山羊)熒光素(歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司，呂貝克，德國(guó))為二抗。用試劑組中含有的緩沖液將樣品稀釋為1∶100、1∶320、1∶1 000、1∶3 200，滴度≥1∶320為陽(yáng)性，計(jì)算檢測(cè)標(biāo)本的陽(yáng)性率。在熒光顯微鏡EUROStar Ⅲ Plus下判斷熒光模型。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)定量檢測(cè)抗dsDNA抗體的水平，抗dsDNA>20 U/ml為陽(yáng)性，計(jì)算檢測(cè)標(biāo)本的陽(yáng)性率。

結(jié) 果

1.3組患者不同滴度ANA陽(yáng)性率比較：3組患者ANA(1∶320)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中惡性實(shí)體腫瘤組和血液系統(tǒng)惡性腫瘤組患者ANA(1∶320)陽(yáng)性率均高于對(duì)照組(P<0.05)。惡性實(shí)體腫瘤組患者ANA(1∶1 000)陽(yáng)性率為4.11%(13/316)，其中宮頸癌2例，乳腺癌2例，食管癌1例，卵巢癌1例，胃癌3例，小腸惡性腫瘤1例，乙狀結(jié)腸癌1例，咽癌1例，胰腺癌1例。血液系統(tǒng)惡性腫瘤組患者ANA(1∶1 000)陽(yáng)性率為0.67%(2/297)，2例患者均為淋巴瘤。3組患者ANA(1∶1 000)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 3組患者不同滴度ANA陽(yáng)性率比較[例，(%)]

2.3組ANA陽(yáng)性患者熒光模型分布情況比較：惡性實(shí)體腫瘤組患者熒光模型以顆粒型最多(48.72%)，但3組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。血液系統(tǒng)惡性腫瘤組熒光模型以混合型最多(包括均質(zhì)型+顆粒型、顆粒型+胞漿顆粒型，50.00%)，高于惡性實(shí)體腫瘤組(χ2=15.257,P<0.001)，但與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.281,P=0.258)。見表2。

表2 3組ANA陽(yáng)性患者熒光模型分布情況比較[例，(%)]

3.3組患者抗dsDNA抗體陽(yáng)性率及水平比較：惡性實(shí)體腫瘤組患者抗dsDNA抗體陽(yáng)性率為13.0%，血液系統(tǒng)惡性腫瘤組為6.4%，對(duì)照組為14.0%，3組患者陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.236，P=0.004)。血液系統(tǒng)惡性腫瘤組抗dsDNA抗體水平[36.10(17.30,41.7)μmol/L]分別高于惡性實(shí)體腫瘤組[19.46(13.18,29.00)μmol/L]和對(duì)照組[20.40(13.20,26.80)μmol/L]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。惡性實(shí)體腫瘤組抗dsDNA抗體水平與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

討 論

根據(jù)我國(guó)國(guó)家癌癥中心2016年報(bào)道的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)，我國(guó)每年惡性腫瘤的新增病例約為430萬，死亡病例約為280萬[6]。如此高的死亡率可部分歸因于缺乏早期檢測(cè)方法。因此，探討惡性腫瘤患者血清自身抗體的特點(diǎn)具有重要意義。

自身抗體主要是由免疫反應(yīng)后的B細(xì)胞產(chǎn)生，它直接針對(duì)人體自身的一個(gè)或多個(gè)抗原[7]。自身抗體被認(rèn)為是免疫反應(yīng)和自身免疫性疾病的重要特征。腫瘤自身抗體產(chǎn)生的機(jī)制已被提出，包括宿主對(duì)腫瘤相關(guān)抗原(TAA)的免疫反應(yīng)、腫瘤細(xì)胞破壞引起的抗原刺激或腫瘤形成過程引起的免疫紊亂[2-8]。自身抗體作為腫瘤免疫反應(yīng)產(chǎn)物，可用于腫瘤早期篩查[9-10]。自身抗體檢測(cè)在腫瘤患者中具有許多優(yōu)勢(shì)。首先，它可用于腫瘤發(fā)生的早期篩查；其次，對(duì)于大規(guī)模和長(zhǎng)期的樣本檢測(cè)，自身抗體在血清中比肽更穩(wěn)定。因此，自身抗體檢測(cè)對(duì)于腫瘤的診斷具有重要意義。

Solans-laqueé等[11]的一項(xiàng)研究表明，與健康人群相比，惡性腫瘤患者的血清中更易檢測(cè)到ANA。此外，惡性腫瘤患者自身抗體的熒光光譜比健康人群更為豐富。惡性腫瘤患者血清中可檢測(cè)到多種自身抗體熒光模型，如均質(zhì)型、核仁型和胞漿型[12]。本研究結(jié)果顯示，惡性實(shí)體腫瘤組及血液系統(tǒng)惡性腫瘤組ANA(1∶320)陽(yáng)性率均高于對(duì)照組。與對(duì)照組相比，惡性實(shí)體腫瘤組更易檢出低滴度ANA(1∶320)。此外，3組患者的熒光模型分布情況也不同。惡性實(shí)體腫瘤組以顆粒型最多，血液系統(tǒng)惡性腫瘤組以混合型最多，其包括均質(zhì)型+顆粒型和顆粒型+胞漿顆粒型。在臨床上，惡性腫瘤患者可與風(fēng)濕免疫性疾病患者表現(xiàn)出相同的ANA滴度及熒光模型，但治療效果及預(yù)后截然不同。因此，為避免漏診而進(jìn)行的癌癥篩查很有必要。

免疫系統(tǒng)是人體抵御病原體的第一道防線。因此，血清生物標(biāo)記物在早期癌變中的表達(dá)具有較高的研究?jī)r(jià)值。在腫瘤發(fā)生的初始階段，腫瘤細(xì)胞釋放的蛋白質(zhì)或腫瘤細(xì)胞表面的多肽可激發(fā)針對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)，被稱為腫瘤相關(guān)抗原(TAA)[13]，TAA的產(chǎn)生可能與蛋白突變、過度表達(dá)、翻譯后修飾、錯(cuò)誤折疊、異常斷裂和定位有關(guān)[14]。腫瘤相關(guān)抗原的半衰期為7～30天，取決于免疫球蛋白的亞型[15]。識(shí)別TAA的自身抗體具有易分離的特點(diǎn)，且滴度隨TAA生物信號(hào)的擴(kuò)增而增加。由于自身抗體的檢測(cè)比TAA更容易，意味著自身抗體的檢測(cè)在疾病的診斷中比傳統(tǒng)的生物標(biāo)志物檢測(cè)具有更大的潛力。

ELISA法對(duì)低親和力類型的抗dsDNA抗體檢測(cè)靈敏度高，對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷的特異度低，因此在非系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中可檢測(cè)到抗dsDNA抗體單獨(dú)陽(yáng)性[16]。本研究中，抗dsDNA抗體水平在惡性實(shí)體腫瘤組與對(duì)照組中比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在血液系統(tǒng)惡性腫瘤組與對(duì)照組中比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)研究結(jié)果顯示，腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)抗dsDNA抗體產(chǎn)生，后者在免疫保護(hù)中發(fā)揮主要作用，與抗腫瘤效應(yīng)具有關(guān)聯(lián)性[17]。血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者抗dsDNA抗體可能通過信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活和細(xì)胞凋亡介導(dǎo)細(xì)胞死亡，或進(jìn)入細(xì)胞阻斷蛋白質(zhì)的合成，或切割DNA，從而顯示出對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性[18]?？筪sDNA抗體的產(chǎn)生可以是暫時(shí)的，也可以是持續(xù)的，這種差異可能歸因于對(duì)天然DNA的免疫反應(yīng)不同[19]。

自身抗體檢測(cè)具有很高的敏感度，且并非結(jié)締組織病所特有。與對(duì)照組相比，惡性實(shí)體腫瘤組的患者更易檢出低滴度ANA，血液系統(tǒng)腫瘤患者血清中抗dsDNA抗體水平與對(duì)照組相比更高。惡性實(shí)體腫瘤患者自身免疫反應(yīng)導(dǎo)致自身抗體檢測(cè)陽(yáng)性，但其臨床表現(xiàn)和常規(guī)治療與風(fēng)濕免疫性疾病不同，有必要進(jìn)行腫瘤篩查以避免漏診。惡性實(shí)體腫瘤患者以ELISA法檢測(cè)血清抗dsDNA抗體的陽(yáng)性率與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示該抗體陽(yáng)性但無相應(yīng)臨床表現(xiàn)的惡性實(shí)體腫瘤患者在臨床中應(yīng)進(jìn)行隨訪觀察。本研究樣本量較小，尚需擴(kuò)大樣本量并納入更多類型腫瘤性疾病的患者，自身抗體對(duì)腫瘤診斷的特異性仍需臨床信息明確的大樣本研究進(jìn)行探討。