高雅， 高俊峰

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽醫(yī)院懷柔分院心內(nèi)科， 北京市101400)

心房顫動為慢性持續(xù)性心律失常常見表現(xiàn)之一，非瓣膜性心房顫動(non-valvular atrial fibrillation，NVAF)在心房顫動中占相當(dāng)大比例，可造成心房血液瘀滯形成血栓，并發(fā)急性心肌梗死，嚴(yán)重威脅患者生命安全[1]。miRNA是一類長度為18～25個核苷酸的內(nèi)源性非編碼小RNA，具有高度保守性與特異性，可通過結(jié)合靶基因的相關(guān)區(qū)域miRNA調(diào)節(jié)元件，降解或抑制其靶mRNA翻譯，從而調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄后表達(dá)[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-29b、miR-150、miR-223在NVAF發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[3-4]。基于此，本研究探索NVAF患者血miR-29b、miR-150、miR-223表達(dá)水平，及其與心功能的相關(guān)性，旨在為臨床診療提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料和方法

1.1 病例選擇

選取本院2017年5月—2020年4月NVAF患者102例為觀察組，同期竇性心律患者60例為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)實驗室、臨床表現(xiàn)、冠狀動脈造影及心電圖檢查確診為NVAF或竇性心律；②配合本研究；③自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①可逆性因素所致NVAF；②瓣膜性心房顫動；③合并未控制的嚴(yán)重高血壓；④依從性差無法配合研究；⑤出現(xiàn)嚴(yán)重不良事件無法繼續(xù)試驗。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 臨床資料收集

收集可能與NVAF發(fā)病相關(guān)的一般資料，以及心功能指標(biāo)左心房內(nèi)徑(left atrial diameter，LAD)、左心室舒張期末內(nèi)徑(left ventricular end diastolic diameter，LVEDD)、左心室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction，LVEF)等。

1.3 聚合酶鏈反應(yīng)檢測miR-29b、miR-150、miR-223

抽取空腹外周靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min，離心半徑為15 cm，分離獲取RNA。采用miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒將RNA中miRNA反轉(zhuǎn)錄為對應(yīng)cDNA，按照熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測試劑盒說明書設(shè)定反應(yīng)程序?qū)iR-29b、miR-150、miR-223和U6進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，自動生成擴(kuò)增曲線后，以U6為內(nèi)參基因，選取miR-29b、miR-150、miR-223引物序列實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)，分析數(shù)據(jù)Ct值(n=3)，以2-ΔΔCt計算miR-29b、miR-150、miR-223相對表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床資料的比較

觀察組LAD、LVEDD高于對照組，LVEF低于對照組(P<0.05)，其他指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05；表1)。

表1 兩組臨床資料的比較

2.2 兩組miR-29b、miR-150、miR-223表達(dá)的比較

觀察組血miR-29b、miR-150表達(dá)低于對照組，miR-223表達(dá)高于對照組(P<0.05；表2)。

表2 兩組血miR-29b、miR-150、miR-223表達(dá)的比較

2.3 miR-29b、miR-150、miR-223與心功能指標(biāo)的相關(guān)性

NVAF患者外周血miR-29b、miR-150表達(dá)與LAD、LVEDD呈負(fù)相關(guān)，與LVEF呈正相關(guān)；miR-223表達(dá)與LAD、LVEDD呈正相關(guān)，與LVEF呈負(fù)相關(guān)(P<0.05;表3)。

表3 miR-29b、miR-150、miR-223表達(dá)與心功能指標(biāo)的相關(guān)性

2.4 miR-29b、miR-150、miR-223表達(dá)與NVAF的關(guān)系

以NVAF為因變量，以有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)為自變量進(jìn)行Logistic回歸分析顯示，miR-29b、miR-150、miR-223表達(dá)是NVAF的主要影響因素，miR-29b、miR-150表達(dá)與NVAF呈負(fù)相關(guān)，miR-223表達(dá)與NVAF呈正相關(guān)(P<0.05;表4)。

表4 miR-29b、miR-150、miR-223表達(dá)與NVAF關(guān)系的Logistic回歸分析

2.5 miR-29b、miR-150、miR-223對NVAF的診斷價值

繪制ROC曲線可見，miR-29b、miR-150、miR-223三者聯(lián)合診斷AUC值最大，具有良好的診斷效能(圖1和表5)。

圖1 miR-29b、miR-150、miR-223對NVAF診斷價值的ROC曲線

表5 miR-29b、miR-150、miR-223對NVAF的診斷價值

2.6 終點事件發(fā)生率的比較

隨訪6個月終點事件，聯(lián)合診斷陽性患者(78例)腦卒中3例、短暫性腦缺血發(fā)作5例、死亡1例，聯(lián)合診斷陰性患者(84例)短暫性腦缺血發(fā)作1例。診斷陽性患者終點事件發(fā)生率高于陰性患者(11.54%比1.19%，P<0.05)。

3 討 論

據(jù)調(diào)查顯示，中國每年因NVAF并發(fā)急性心肌梗死患者高達(dá)170萬左右，其30天心肌梗死再發(fā)率約7%，心力衰竭發(fā)生率為15%～30%，病死率高達(dá)7%左右[5]。miRNA可通過多條信號途徑參與心房顫動病理變化過程，抑制或促進(jìn)心肌細(xì)胞基質(zhì)沉積、外肌纖維化，調(diào)控心肌離子通道，參與心房顫動心肌重構(gòu)，是心房顫動發(fā)生與維持的重要機(jī)制[6]。

miR-29b憑借抑制細(xì)胞外基質(zhì)合成及其展現(xiàn)出的抗纖維化作用廣受關(guān)注[7]。國外學(xué)者分析miR-29b目標(biāo)基因，發(fā)現(xiàn)miR-29b具有抑制多種膠原合成潛力，其中包括Ⅰ型膠原α1鏈、Ⅰ型膠原α2鏈、Ⅲ型膠原α1鏈等[8]?；诖耍瑖鴥?nèi)學(xué)者對此進(jìn)行更為深入研究發(fā)現(xiàn)，非瓣膜病心房顫動患者心肌組織及外周血miR-29b表達(dá)均低于健康人群[9]；吳昂恒等[10]發(fā)現(xiàn)，非瓣膜病心房顫動患者外周血miR-29b表達(dá)低于竇性心律患者，與本研究結(jié)果基本一致，且本研究顯示外周血miR-29b表達(dá)與NVAF發(fā)病有關(guān)，其表達(dá)越低，該病發(fā)病風(fēng)險越高，可能是由于非瓣膜病心房顫動發(fā)病，患者心肌重構(gòu)，心臟纖維化顯著，大量消耗miR-29b。本文進(jìn)一步研究顯示，miR-29b表達(dá)與LAD、LVEDD呈負(fù)相關(guān)，與LVEF呈正相關(guān)，說明miR-29b表達(dá)與NVAF患者心功能有關(guān)。miR-29家族通過抑制膠原合成，參與抗纖維化過程，而心肌重構(gòu)重要特征即為心臟纖維化，故推測miR-29家族與心臟心肌重構(gòu)關(guān)系密切。

miR-150可阻斷蛋白激酶B信號通路，進(jìn)而發(fā)揮對心血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及集落形成的抑制作用，在骨關(guān)節(jié)炎、急性心肌炎、膿毒血癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等多種疾病中發(fā)揮重要作用[11]。此外，miR-150可通過各種多功能生長因子信號、蛋白、受體分子等，調(diào)控細(xì)胞內(nèi)周期進(jìn)程，并參與細(xì)胞DNA復(fù)制起始及增殖過程。有研究指出，miR-150除在心肌梗死患者中異常表達(dá)外，還可通過調(diào)控凋亡基因，減少心肌細(xì)胞死亡，并改善心功能[12]，miR-150對心肌梗死后心肌纖維化具有改善作用[13]。本研究中觀察組外周血miR-150表達(dá)明顯低于對照組，提示NVAF患者外周血miR-150表達(dá)下調(diào)；進(jìn)一步研究顯示，miR-150表達(dá)與LAD、LVEDD呈負(fù)相關(guān)，與LVEF呈正相關(guān)，說明隨NVAF患者病情加重，miR-150表達(dá)明顯下調(diào)，提示miR-150表達(dá)下調(diào)，調(diào)控靶基因表達(dá)水平，從而促進(jìn)病情進(jìn)展。

國內(nèi)學(xué)者研究心房顫動患者miRNA異常表達(dá)時發(fā)現(xiàn)，miR-223表達(dá)明顯升高[14]。miR-223可抑制胰島素增長因子(insulin-1 growth factor，IGF-IR)表達(dá)及其介導(dǎo)的下游相關(guān)信號傳導(dǎo)通路[15]。有研究在動物模型實驗中發(fā)現(xiàn)，心臟過表達(dá)IGF-IR可抑制糖尿病心肌病小鼠心肌纖維化及心肌舒張功能障礙，這種心臟保護(hù)作用與激活I(lǐng)GF-IR-PI3K-Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)[16]。miR-223可通過抑制IGF-IR表達(dá)，下調(diào)PI3K-Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進(jìn)心肌纖維化[17]。本研究觀察組miR-223表達(dá)明顯高于對照組，在NVAF患者中，miR-223可通過抑制IGF-IR表達(dá)，介導(dǎo)IGF-IR-PI3K-Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，介導(dǎo)膠原及基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)，參與患者心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)。此外，miR-223表達(dá)與LAD、LVEDD呈正相關(guān)，與LVEF呈負(fù)相關(guān)，提示隨NVAF患者病情加重，心功能損害加重，miR-223表達(dá)明顯上調(diào)。

本研究ROC曲線發(fā)現(xiàn)，miR-29b、miR-150、miR-223聯(lián)合診斷具有良好診斷效能，且有助于NVAF預(yù)后預(yù)測。

綜上所述，NVAF患者miR-29b、miR-150下調(diào)，miR-223表達(dá)上調(diào)，且其表達(dá)與心功能有關(guān)，可作為臨床診斷的潛在標(biāo)志物，在疾病早期診斷、預(yù)后預(yù)測方面值得推廣與應(yīng)用。但本研究樣本量較小，還需臨床多中心、多渠道取樣，做進(jìn)一步證實。