陳 炎, 黃聰靈, 江薰垣, 陳志廷, 王 剛, 萬 凱, 唐雪妹

(廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與監(jiān)測技術(shù)研究所, 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 國家農(nóng)業(yè)檢測基準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室(農(nóng)藥殘留), 廣東 廣州 510000)

在我國銷售的化學(xué)農(nóng)藥中,手性農(nóng)藥在市場中占比達(dá)到40%,占據(jù)重要地位[1,2]。手性農(nóng)藥不同對(duì)映體在環(huán)境行為、生物活性、毒性等方面往往存在差異[3-5],而在評(píng)估手性農(nóng)藥對(duì)非靶標(biāo)生物和生態(tài)環(huán)境造成的實(shí)際危害時(shí),沒有區(qū)分手性異構(gòu)體差別,評(píng)估結(jié)果不夠準(zhǔn)確和全面[6-9]。因此,手性拆分是研究手性農(nóng)藥毒理毒性和環(huán)境選擇性行為的前提和基礎(chǔ)[10-12]。

目前最廣泛使用的手性農(nóng)藥對(duì)映體拆分分析方法是色譜法,其中常見的色譜法包括:氣相色譜法、液相色譜法、超臨界流體色譜法等[13,14]。而液相色譜法隨著QuEChERS前處理方法的普及,具有分析時(shí)間較短、分離效率高等優(yōu)點(diǎn),適用更廣泛[15-18]。Li等[19]利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(HPLC-MS/MS)同時(shí)分離甲霜靈等6種手性殺菌劑,分離度在1.38～3.46之間。齊艷麗等[20]建立了手性超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測小麥及其加工制品中腈菌唑?qū)τ丑w殘留的分析方法。黃玉芬等[21]采用優(yōu)化的QuEChERS樣品前處理技術(shù)和HPLC-MS/MS,建立了同時(shí)測定土壤中3種手性殺菌劑對(duì)映體的分離分析方法。

唑蟲酯(pyraquinil, Pyr)是華南農(nóng)業(yè)大學(xué)徐漢虹課題組研發(fā)的一種具有吡唑并[1,5-a]喹唑啉稠合雜環(huán)骨架的全新手性殺蟲劑,含有兩個(gè)手性中心,4個(gè)手性異構(gòu)體(見圖1)。因其對(duì)抗性品系小菜蛾具有良好的防治效果[22-25],且其在靶標(biāo)上的作用位點(diǎn)有別于現(xiàn)有氨基丁酸(GABA)受體抑制劑殺蟲劑,如狄氏劑、氟蟲腈、阿維菌素等[22],唑蟲酯有望成為防治小菜蛾的主要輪換品種,具有廣闊的市場前景。

圖 1 唑蟲酯及其氧化代謝產(chǎn)物異構(gòu)體的絕對(duì)構(gòu)型Fig. 1 Absolute configurations of pyraquinil (Pyr) and its oxidation products (Pyr+O)

目前關(guān)于唑蟲酯的相關(guān)研究都是基于外消旋體來進(jìn)行的,并未區(qū)分手性對(duì)映體的區(qū)別,因此有必要建立唑蟲酯對(duì)映體分離分析方法。鑒于此,本工作利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜,對(duì)唑蟲酯及唑蟲酯氧化代謝產(chǎn)物(Pyr+O)異構(gòu)體進(jìn)行手性拆分,并確定各異構(gòu)體在色譜柱上的流出順序。同時(shí),建立了唑蟲酯及唑蟲酯氧化代謝產(chǎn)物異構(gòu)體在蔬菜中的殘留分析方法。旨在為開發(fā)和使用高效低毒的唑蟲酯手性單體提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù),為指導(dǎo)新農(nóng)藥的合理使用提供技術(shù)支撐,為對(duì)其環(huán)境行為研究、后續(xù)質(zhì)量控制及藥效評(píng)價(jià)等提供相應(yīng)的分析技術(shù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

LCMS-8060高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(日本島津儀器有限公司); QuEChERS自動(dòng)樣品制備系統(tǒng)(Sio-6512,北京本立科技有限公司);超純水儀(Milli-Q,美國密理博公司);電子天平(EM204,梅特勒-托利多儀器有限公司);超聲波清洗器(KQ-800KDE,昆山超聲儀器有限公司);旋渦混合器(GL-88B,其林貝爾儀器制造有限公司)。

唑蟲酯(純度98%)及其氧化產(chǎn)物原藥,來源于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)天然農(nóng)藥與化學(xué)生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;甲醇、乙腈(色譜純,德國默克集團(tuán));微孔濾膜(0.22 μm,天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);甲酸銨(純度≥99%,上海阿拉丁生化科技有限公司)。石墨化炭黑(GCB)和N-丙基乙二胺固相吸附劑(PSA)(200～400目,博納艾杰爾科技);無水硫酸鎂(分析純,廣州化學(xué)試劑廠)。

供試小白菜和蕹菜品種分別為甜脆小白菜8933和青梗柳葉空心菜,均采自廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院白云基地。

1.2 樣品提取與凈化

稱取10 g(精確至0.01 g)蔬菜樣品置于50 mL離心管中,加入20 mL乙腈,并加入研磨珠,渦旋振蕩30 s;再加入1.0 g氯化鈉、4.0 g無水硫酸鎂渦旋混勻,離心振蕩一體機(jī)以1 000 r/min速度振蕩5 min,以4 000 r/min速度離心5 min。取8.0 mL上清液于裝有1.0 g凈化劑(0.835 g MgSO4+0.150 g PSA+0.015 g GCB)的離心管中,以1 000 r/min速度振蕩2 min,以4 000 r/min速度離心2 min,取上清液,過0.22 μm的有機(jī)濾膜,待測。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別稱取250.0 mg外消旋唑蟲酯和氧化產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)品至250 mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解,配制成1 000 mg/L的母液。將上述母液用乙腈逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度分別為1、5、10、50、100、500和2 000 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液備用。稱取空白樣品,按1.2節(jié)的方法前處理后,獲得空白基質(zhì)液,分別用基質(zhì)配制質(zhì)量濃度為5、10、50、100、500、1 000和5 000 μg/L的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。以標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積平均值(Y)與標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度(X, μg/L)進(jìn)行線性回歸,繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 色譜-質(zhì)譜條件

1.4.1色譜條件

纖維素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)共價(jià)鍵鍵合手性色譜柱(Chiral INC, 250 mm×4.6 mm, 5 μm,購自廣州菲羅門科學(xué)儀器有限公司);流動(dòng)相A相為2 mmol/L甲酸銨水溶液,B相為乙腈。梯度洗脫程序:0～2.5 min, 43%B; 2.5～57 min, 43%B～46%B; 57～58 min, 46%B～43%B; 58～60 min, 43%B。柱溫:28 ℃;進(jìn)樣量:1 μL;流速:0.5 mL/min。

1.4.2質(zhì)譜條件

電噴霧離子源(ESI),負(fù)離子掃描;加熱模塊溫度:400 ℃;脫溶劑溫度:250 ℃;霧化氣流量:3.0 L/min;干燥氣流量:10 L/min;檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);駐留時(shí)間:0.03 s。其他參數(shù)見表1。

表 1 唑蟲酯及其代謝產(chǎn)物的質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Mass spectrometric parameters of Pyr and its metabolites

1.5 數(shù)據(jù)處理

1.5.1分離度計(jì)算

分離度(Rs)的計(jì)算方法見公式(1):

(1)

其中,t為保留時(shí)間,w為峰寬。

1.5.2基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)(matrix effects, ME)是指共流出物影響分析物的離子化效率,使其分析信號(hào)增強(qiáng)或減弱的現(xiàn)象。計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)的公式如下:

(2)

其中,k2代表基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率,k1代表溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。當(dāng)ME為正值時(shí)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng),當(dāng)ME為負(fù)值時(shí)為基質(zhì)減弱效應(yīng)?；|(zhì)效應(yīng)在-20%～20%之間為弱基質(zhì)效應(yīng);在-50%～-20%和20%～50%之間為中等基質(zhì)效應(yīng);超過-50%或50%為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)[26]。

2 結(jié)果與討論

2.1 唑蟲酯異構(gòu)體拆分條件優(yōu)化

2.1.1不同手性固定相對(duì)唑蟲酯異構(gòu)體分離的影響

手性柱中的固定相對(duì)化合物的手性分離往往起決定性作用。目前市場上用于色譜分離的手性固定相大致分為多糖(cellulose)型、環(huán)糊精(cyclodextrin)型、大環(huán)抗生素(macrocyclic antibiotics)型、蛋白質(zhì)(protein)型以及冠醚(crown enters)型等。其中,多糖型是商品化手性固定相中應(yīng)用最廣泛的類型之一,包括纖維素型和淀粉型[27]。多糖是一類具有天然光學(xué)活性的高分子化合物,其葡萄糖單元上的羥基易于被修飾和衍生化,表現(xiàn)出特殊的手性識(shí)別能力[28]。因此本研究選擇6種多糖型的手性柱,在日本島津LC-20A高效液相色譜儀上比較了不同手性柱對(duì)唑蟲酯異構(gòu)體的分離效果。6種手性分離色譜柱:直鏈淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)(Chiral ND(2)-RH)、直鏈淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)(Chiral NY(2)-RH)、直鏈淀粉-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)(Chiral NX(2)-RH)、纖維素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)(Chiral MX(2)-RH)、纖維素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)共價(jià)鍵鍵合(Chiral INC)和纖維素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)共價(jià)鍵鍵合(Chiral INB);以上手性柱均購自廣州菲羅門科學(xué)儀器有限公司,規(guī)格為250 mm×4.6 mm, 5 μm。

結(jié)果如圖2所示,在所測試的手性固定相中,Chiral ND(2)-RH柱無法分離唑蟲酯異構(gòu)體,Chiral NY(2)-RH柱和Chiral NX(2)-RH柱只能分離出2種異構(gòu)體,Chiral MX(2)-RH可分離3種異構(gòu)體,Chiral INB柱未能完全分離4種異構(gòu)體,而Chiral INC手性柱成功實(shí)現(xiàn)了唑蟲酯4個(gè)異構(gòu)體的基線分離,表現(xiàn)出最佳的拆分性能。

圖 2 不同手性柱分離唑蟲酯異構(gòu)體的色譜圖Fig. 2 Chiral separation chromatograms of Pyr enantiomers by different chiral columns

另外,根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,纖維素類手性柱與直鏈淀粉類手性柱的手性識(shí)別能力存在很大差別,且纖維素類手性柱的穩(wěn)定性更高[27],鍵合型纖維素類手性固定相可以通過流動(dòng)相的優(yōu)化來實(shí)現(xiàn)很多在常規(guī)流動(dòng)相中難以分離的對(duì)映體的拆分[28]。綜合考慮,本工作選擇鍵合型纖維素類固定相的Chiral INC手性柱作為唑蟲酯異構(gòu)體的拆分柱。

2.1.2流動(dòng)相比例對(duì)唑蟲酯及其氧化產(chǎn)物異構(gòu)體分離的影響

流動(dòng)相的選擇和優(yōu)化對(duì)于目標(biāo)物質(zhì)的分離起著至關(guān)重要的作用,本工作以2 mmol/L甲酸銨水溶液和乙腈為流動(dòng)相,設(shè)置6個(gè)洗脫程序,分別計(jì)算不同洗脫條件下唑蟲酯及其氧化產(chǎn)物異構(gòu)體兩個(gè)色譜峰之間的分離度(見表2),比較不同流動(dòng)相比例下唑蟲酯及其氧化產(chǎn)物的拆分效果。

從表2可知,唑蟲酯及氧化產(chǎn)物異構(gòu)體分離度隨有機(jī)相初始比例的提高而變大,同時(shí)受提高速度的影響,提高速度越慢,分離度越大。在洗脫程序1～3條件下,唑蟲酯各異構(gòu)體之間分離度為0.53～2.10,氧化產(chǎn)物分離度為2.93～3.97;洗脫程序4～6 條件下,唑蟲酯各異構(gòu)體之間的分離度為1.62～ 2.83。通常,當(dāng)分離度高于1.5時(shí)就認(rèn)為各色譜峰之間實(shí)現(xiàn)了基線分離。

表 2 不同洗脫條件下唑蟲酯及其氧化產(chǎn)物異構(gòu)體的分離度Table 2 Resolutions (Rs) of Pyr and Pyr+O enantiomers under different elution conditions

因此,洗脫程序1～3條件下,目標(biāo)物質(zhì)的各異構(gòu)體之間難以完全分離;洗脫程序4～6條件下,目標(biāo)物質(zhì)的各異構(gòu)體之間實(shí)現(xiàn)基線分離。由于在洗脫程序6條件下完全分離所需分析時(shí)間為60 min,短于洗脫程序4～5條件下完全分離所需分析時(shí)間70 min,綜合考慮唑蟲酯異構(gòu)體分離參數(shù)(分離度高和分析時(shí)間短),本研究確定洗脫程序6(即1.4.1節(jié)梯度程序)為唑蟲酯及其氧化產(chǎn)物異構(gòu)體在HPLC-MS/MS上的最佳分離條件,如圖3所示,唑蟲酯4個(gè)異構(gòu)體和氧化產(chǎn)物2個(gè)異構(gòu)體均得到完全分離。

圖 3 采用表2中洗脫程序6時(shí)唑蟲酯及唑蟲酯氧化產(chǎn)物 的分離色譜圖Fig. 3 Chromatogram of the separation of Pyr and its oxidation products under elution condition 6 in Table 2 The Chiral column: Chiral INC (250 mm×4.6 mm, 5 μm); mobile phase A: 2 mmol/L ammonium formate aqueous solution; mobile phase B: acetonitrile; column temperature: 28 ℃; injection volume: 1 μL; flow rate: 0.5 mL/min; elution program: 0-2.5 min, 43%B; 2.5-57 min, 43%B-46%B; 57-58 min, 46%B-43%B; 58-60 min, 43%B. Peak identifications: 1-4. four chiral isomers of pyraquinil; 5, 6. two chiral isomers of oxidation products.

2.1.3唑蟲酯及其氧化產(chǎn)物手性異構(gòu)體的出峰順序

前期通過對(duì)唑蟲酯4個(gè)手性異構(gòu)單體進(jìn)行單晶培養(yǎng),確認(rèn)了RS、SR手性異構(gòu)體的絕對(duì)構(gòu)型。本研究對(duì)唑蟲酯4個(gè)手性異構(gòu)體進(jìn)行衍生化,可以得知RS-Pyr和SS-Pyr氧化之后將得到相同的產(chǎn)物,即S-(Pyr+O),而RR-Pyr和SR-Pyr氧化之后將得到相同的產(chǎn)物,即R-(Pyr+O)。因此對(duì)單晶結(jié)果確認(rèn)的RS、SR手性異構(gòu)體氧化之后分別純化,獲得了S型和R型唑蟲酯氧化產(chǎn)物的兩個(gè)手性單體的色譜圖(見圖4b, 4e),兩個(gè)手性單體的出峰順序?yàn)镾-(Pyr+O)、R-(Pyr+O),如圖4a所示。再根據(jù)確認(rèn)的S型和R型唑蟲酯氧化產(chǎn)物反向確認(rèn)SS-Pyr和RR-Pyr,如圖4c和4d。

圖 4 唑蟲酯及唑蟲酯氧化產(chǎn)物異構(gòu)體在手性柱Chiral INC上的出峰順序Fig. 4 Peak order of stereoisomers of Pyr and Pyr+O on Chiral INC column a-e represent the chromatogram of the Pyr and Pyr+O, RS-Pyr and S-(Pyr+O), SS-Pyr and S-(Pyr+O), RR-Pyr and R-(Pyr+O), and SR-Pyr and R-(Pyr+O), respectively.

綜上所述,唑蟲酯4個(gè)手性異構(gòu)體依次出峰順序?yàn)镽S-Pyr、SS-Pyr、RR-Pyr和SR-Pyr;唑蟲酯氧化產(chǎn)物異構(gòu)體出峰順序?yàn)镾-(Pyr+O)和R-(Pyr+O)(見圖4a)。

2.2 前處理凈化條件的優(yōu)化

QuEChERS前處理法是目前廣泛應(yīng)用的前處理方法[29]。鑒于此,本研究參考GB 23200.113-2018中蔬菜的QuEChERS前處理方法,綜合比較3種不同組合(0.850 g MgSO4+0.150 g PSA、0.985 g MgSO4+0.015 g GCB和0.835 g MgSO4+0.150 g PSA+0.015 g GCB)的凈化劑對(duì)唑蟲酯及其氧化產(chǎn)物不同異構(gòu)體在蔬菜中回收率的影響(見圖5)。由圖5可以看出,對(duì)于唑蟲酯及其氧化產(chǎn)物6個(gè)異構(gòu)體而言,0.850 g MgSO4+0.150 g PSA和0.835 g MgSO4+0.150 g PSA+0.015 g GCB為凈化劑時(shí),回收率在80%～110%之間;0.985 g MgSO4+0.015 g GCB為凈化劑時(shí),在蕹菜中,R-(Pyr+O)和S-(Pyr+O)的回收率小于80%,在小白菜中唑蟲酯及其氧化產(chǎn)物6個(gè)異構(gòu)體回收率均大于110%。由于GCB主要對(duì)色素具有一定的吸附作用,蕹菜和小白菜屬于顏色較深的蔬菜,因此綜合考慮,選擇0.835 g MgSO4+0.150 g PSA+0.015 g GCB作為最優(yōu)凈化劑組合。

圖 5 唑蟲酯及其氧化產(chǎn)物異構(gòu)體在(a)蕹菜和(b)小白菜中的回收率(n=3)Fig. 5 Recoveries of Pyr and Pyr+O enantiomers in (a) water spinach (Ipomoea aquatica Forsk) and (b) pakchoi (Brassica rapa ssp. chinensis L.) (n=3) Combinations of purifiers: A. 0.85 g MgSO4+0.150 g PSA; B. 0.985 g MgSO4+0.015 g GCB; C. 0.835 g MgSO4+0.150 g PSA+0.015 g GCB.

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1基質(zhì)效應(yīng)

本研究采用公式(2)的方法評(píng)價(jià)唑蟲酯及其氧化代謝產(chǎn)物異構(gòu)體在不同蔬菜中的ME。從表3可看出,唑蟲酯及其氧化代謝產(chǎn)物異構(gòu)體的ME在0.7%～30.6%之間,均為正值。因此在蕹菜和小白菜中均表現(xiàn)出基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。其中SS-Pyr、RR-Pyr、R-(Pyr+O)和S-(Pyr+O)在小白菜和蕹菜中均表現(xiàn)出弱基質(zhì)效應(yīng);RS-Pyr在小白菜中表現(xiàn)出弱基質(zhì)效應(yīng),在蕹菜中表現(xiàn)出中等基質(zhì)效應(yīng);SR-Pyr在蕹菜和小白菜中表現(xiàn)出中等基質(zhì)效應(yīng)。由于不同異構(gòu)體在不同基質(zhì)中的ME大小不一,本工作為確保結(jié)果的準(zhǔn)確性,采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液為基準(zhǔn)進(jìn)行校正。

表 3 唑蟲酯及其氧化產(chǎn)物異構(gòu)體的線性關(guān)系和基質(zhì)效應(yīng)Table 3 Linear relationships and matrix effects of Pyr and Pyr+O enantiomers

2.3.2線性范圍和定量限

當(dāng)唑蟲酯的手性異構(gòu)體質(zhì)量濃度在1.25～1 250 μg/L之間及唑蟲酯氧化代謝產(chǎn)物手性異構(gòu)體質(zhì)量濃度在2.5～2 500 μg/L之間時(shí),基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積與對(duì)應(yīng)質(zhì)量濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)系數(shù)如表3所示。以滿足農(nóng)殘分析回收率要求的最低加標(biāo)水平為方法定量限(LOQ),唑蟲酯異構(gòu)體的LOQ為0.25 μg/kg,唑蟲酯氧化代謝產(chǎn)物手性異構(gòu)體的LOQ為0.5 μg/kg。

2.3.3準(zhǔn)確度和精密度

在蕹菜和小白菜樣品中同時(shí)添加唑蟲酯和唑蟲酯氧化產(chǎn)物消旋體進(jìn)行添加回收試驗(yàn),添加水平為1、20、400 μg/kg,此時(shí)樣品中唑蟲酯異構(gòu)體對(duì)應(yīng)添加水平為0.25、5、100 μg/kg,唑蟲酯氧化代謝產(chǎn)物異構(gòu)體對(duì)應(yīng)添加水平為0.5、10、200 μg/kg,在3天內(nèi)每天添加一次,每個(gè)水平做3個(gè)平行,按本文方法進(jìn)行測定。通過比較同一天內(nèi)目標(biāo)物加標(biāo)回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)來考察日內(nèi)重復(fù)性,通過分析3天內(nèi)目標(biāo)物回收率的RSD來考察日間重復(fù)性。

由表4可知,蕹菜中3個(gè)加標(biāo)水平下該方法的平均回收率為72.6%～109.9%,日內(nèi)重復(fù)性RSD為0.5%～8.7%;日間重復(fù)性RSD為1.0%～8.6%。由表5可知,小白菜中3個(gè)加標(biāo)水平下該方法的平均 回收率為81.2%～110.6%,日內(nèi)RSD為0.6%～8.3%;日間RSD為1.1%～7.6%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該方法的回收率和精密度符合定量分析要求,適用于蕹菜和小白菜中唑蟲酯及其氧化產(chǎn)物異構(gòu)體的分析。

表4 唑蟲酯及氧化產(chǎn)物異構(gòu)體在蕹菜中的加標(biāo)回收率Table 4 Spiked recoveries of Pyr and Pyr+O enantiomers in water spinach

表 4 (續(xù))Table 4 (Continued)

表 5 唑蟲酯及氧化產(chǎn)物異構(gòu)體在小白菜中的加標(biāo)回收率Table 5 Spiked recoveries of Pyr and Pyr+O enantiomers in pakchoi

3 結(jié)論

通過對(duì)影響高效液相色譜分離分析的主要因素反相手性色譜柱和流動(dòng)相等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,在高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀上建立了拆分唑蟲酯及其氧化代謝產(chǎn)物異構(gòu)體的方法,并建立了蕹菜和小白菜中殘留分析的方法,方法的準(zhǔn)確度和精密度滿足農(nóng)殘檢測要求;同時(shí)利用衍生化的方法確定了唑蟲酯以及唑蟲酯氧化代謝產(chǎn)物異構(gòu)體的出峰順序,在Chiral INC反相色譜柱上的出峰順序依次為RS-、SS-、RR-、SR-唑蟲酯、S-和R-唑蟲酯氧化產(chǎn)物。本研究可為新型手性農(nóng)藥唑蟲酯的環(huán)境選擇性行為研究、質(zhì)量控制及藥效評(píng)價(jià)等方面提供相應(yīng)技術(shù)支持,同時(shí)也為新農(nóng)藥開發(fā)及應(yīng)用提供有力的理論支撐。