王宇 張玉玲 鄒丹

摘要：目的： 評(píng)定 HPLC 法測(cè)定小兒肺咳顆粒中橙皮苷含量的不確定度。方法： 建立 HPLC 法測(cè)定含量的數(shù)學(xué)模型，分析測(cè)量不確定度的來(lái)源并對(duì)各分量進(jìn)行量化分析和評(píng)估，合成標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量不確定度，給出擴(kuò)展測(cè)量不確定度報(bào)告。結(jié)果： 小兒肺咳顆粒中橙皮苷含量的不確定度為0.02mg，測(cè)量結(jié)果表示為（ 1.26 ±0.02） mg，（k = 2）。結(jié)論： 分析產(chǎn)生不確定度的主要來(lái)源，可為有效地控制該含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確性提供可靠的理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;小兒肺咳顆粒;橙皮苷;不確定度

【中圖分類號(hào)】 R722.13+5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）12--02

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試藥

Agilent 1100 型 HPLC 儀; MSA6.6S-CE型電子天平（賽多利斯 d=0.001mg）;ME204/02型電子天平（梅特勒 d=0.1mg）;

小兒肺咳顆粒（吉林省某藥廠，批號(hào)：20210121）

橙皮苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110721-202019，含量95.3% ）;甲醇（色譜純，美國(guó)Fisher公司），其余試劑為分析純，水為超純水。

1.2? 實(shí)驗(yàn)方法

（ 1） 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。色譜柱：島津 Wondaisil C18（ 250 mm × 4.6 mm，5μm）;流動(dòng)相： 甲醇-5%醋酸溶液（33：67）;流速： 0.8 ml/min; 檢測(cè)波長(zhǎng)： 283nm; 柱溫： 35℃;進(jìn)樣量： 5μl。理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

（ 2） 測(cè)定法。取小兒肺咳顆粒10袋，研細(xì)，取約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率80W，頻率250kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。另取取橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加75%甲醇制成每1ml含30μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算小兒肺咳顆粒中橙皮苷的含量。

2 測(cè)量不確定度的分析

2.1 測(cè)量不確定度的構(gòu)成及相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度的數(shù)學(xué)表達(dá)式

根據(jù) HPLC 外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量的基本原理，小兒肺咳顆粒中橙皮苷含量的數(shù)學(xué)表達(dá)式為：

式中：P為供試品中橙皮苷的含量（mg/g）;Wx為供試品的質(zhì)量（g）; P純?yōu)閷?duì)照品的純度（%）;Ws為對(duì)照品的質(zhì)量（mg）;Ax為供試品中橙皮苷峰面積;

As為對(duì)照品中橙皮苷峰面積;Vx稀為供試品的稀釋倍數(shù);Vs稀為對(duì)照品的稀釋倍數(shù);Vx進(jìn)為供試品溶液的進(jìn)樣體積（μl）;Vs進(jìn)為對(duì)照品溶液的進(jìn)樣體積（μl）。

2.2 識(shí)別測(cè)量不確定度來(lái)源

2.3 測(cè)量不確定分量的量化分析

2.3.1? HPLC進(jìn)樣重復(fù)性的相對(duì)不確定度urel（Frep）

屬于A類不確定度。為獲得可靠性較高的標(biāo)準(zhǔn)偏差，本次測(cè)定了10份樣品中橙皮苷的含量，結(jié)果見表1。

單次測(cè)量的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差按照貝塞爾公式計(jì)算：s（x）=1.77%，本次HPLC進(jìn)樣重復(fù)性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

2.3.2? 對(duì)照品溶液濃度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C對(duì)）

2.3.2.1? 對(duì)照品純度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定urel（P對(duì)）

屬于B類不確定。按橙皮苷對(duì)照品的說(shuō)明書標(biāo)示，純度為95.3%，對(duì)照品說(shuō)明書未給出不確定度，假定其分布區(qū)間為±0.05%，按矩形分布換算，對(duì)照品純度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：urel（p純）=α/k/95.3%=0.05%//95.3%=3.03×10-4。

2.3.2.2? 對(duì)照品稱量的相對(duì)不確定urel（Ws）

（1）天平示數(shù)引入的不確定度u1（W對(duì)）

天平檢定證書給出天平（ d = 0.001 mg）的最大允許誤差為±0.002mg，按矩形分布計(jì)算，u1（W對(duì)）=α/k=0.002/=1.15×10-3mg。

（2）天平重復(fù)性引入的不確定度u2（W對(duì)）

天平檢定證書給出天平（ d = 0.001 mg）重復(fù)性誤差為0.002mg，按矩形分布計(jì)算，u2（W對(duì)）=α/k=0.002/=1.15×10-3mg。因試驗(yàn)時(shí)采用減重法，

稱取對(duì)照品的質(zhì)量分別為W對(duì)1=6.658mg，W對(duì)2=6.684mg，對(duì)照品稱樣量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分別為：u（W對(duì)1）=u（W對(duì)）/W=2.30×10-3/6.658=3.45×10-4，

u（W對(duì)2）=u（W對(duì)）/W=2.30×10-3/6.684=3.44×10-4，故對(duì)照品稱量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.3.2.3 對(duì)照品稀釋引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（V對(duì)）

校準(zhǔn)引入的不確定度u1（V對(duì)200）

200mlA級(jí)容量瓶的最大允許誤差為±0.15ml，按矩形分布計(jì)算，則：u1（V對(duì)200）=α/k=0.15/=8.66×10-2ml。

溫度引入的不確定度u2（V對(duì)200）

定容在21℃下進(jìn)行，量瓶校正溫度T0=20℃，水的體積膨脹系數(shù)為2.1×10-4/℃。按矩形分布計(jì)算，u2（V200）=α/K=200×2.1×10-4×（21-20）ml/=2.42×10-2ml。由以上2項(xiàng)合成得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確度

urel（VS）= /200=4.50×10-4 ml

2.3.3 供試品溶液濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C樣）

2.3.3.1? 供試品稱量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（W樣）

（1）天平示數(shù)引入的不確定度u1（W樣）

天平檢定證書給出天平（ d = 0.1 mg）的最大允許誤差為±0.5mg，按矩形分布計(jì)算，u1（W樣）=α/k=0.5/=0.289mg。

（2）天平稱量重復(fù)性不確定度

天平檢定證書給出天平（ d = 0.1 mg） 的重復(fù)性誤差為1mg，按矩形分布計(jì)算，u1（W樣）=α/k=1/=0.577mg。因稱量過(guò)程中使用減量法，故其不確定度為。稱取10份樣品的平均值為3.0584g，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為urel（W樣）=u（W樣）/W樣=0.913/3.0584×10-3=2.99×10-4。2.3.3.2 供試品溶液稀釋引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（V樣）

（1）校準(zhǔn)引入的不確定度u1（V樣50）

50mlA級(jí)移液管的最大允許誤差為±0.05ml，按矩形分布計(jì)算，則：u1（V樣50）=α/k=0.05/=2.89×10-2ml。

（2）溫度引入的不確定度u2（V樣50）

定容在21℃下進(jìn)行，移液管校正溫度T0=20℃，水的體積膨脹系數(shù)為2.1×10-4/℃。按矩形分布計(jì)算u2（V50）=α/K=50×2.1×10-4×（21-20）ml/=6.06×10-3ml。由以上2項(xiàng)合成得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確度

urel（V樣）=/50=5.90×10-4 。

2.4 計(jì)算合成相對(duì)不確定

可知合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度是：

2.5 擴(kuò)展不確定度? 測(cè)量結(jié)果符合正態(tài)分布，取置信概率為 95%，包含因子

2.6 測(cè)量不確定度報(bào)告

3 討論

本文通過(guò)對(duì) HPLC 法測(cè)定小兒肺咳顆粒中橙皮苷含量的測(cè)量不確定度評(píng)定，分析了各測(cè)量不確定度分量。由分析結(jié)果可知，最大的測(cè)量不確定度來(lái)源于對(duì)照品的稱取量，提示今后進(jìn)行小兒肺咳顆粒含量測(cè)定試驗(yàn)時(shí)，可增加對(duì)照品的取樣量，降低對(duì)照品稱量時(shí)引入的不確定度，增加測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。本文所建立的評(píng)估方法可為同類型的藥物含量的不確定度分析提供參考。

參考文獻(xiàn)：

1 國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.測(cè)量不確定度的評(píng)定與表示[S]：JJF1059.1-2012

2 中國(guó)藥典[S].2020 年版.一部.563

3 左毅，費(fèi)路華.HPLC 法測(cè)定甲硝唑片含量的測(cè)量不確定度評(píng)定[J].中國(guó)藥師，2015，18（ 09）： 1612-1614

通訊作者：劉匯? 副主任藥師? ?延邊州食品藥品檢驗(yàn)所