宋賽賽 夏國宏 尹 峰 湯 妍△

（1復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系 上海 200032；2上海賽傲生物技術(shù)有限公司 上海 200062；3同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院骨科 上海 200120）

骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是一種常見的退行性關(guān)節(jié)紊亂疾病［1-2］，發(fā)病率逐漸升高，病理變化主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)軟骨的磨損退化、骨贅形成、軟骨下骨增厚、滑膜炎癥以及關(guān)節(jié)肥大［3-5］。目前針對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的傳統(tǒng)療法主要有藥物治療和手術(shù)治療。藥物治療主要是使用非甾體類抗炎藥物、蛋白酶抑制劑、疾病修飾類骨關(guān)節(jié)炎藥物等［6］；手術(shù)方法主要是關(guān)節(jié)鏡手術(shù)和人工關(guān)節(jié)置換術(shù)等［7-8］。藥物治療可以減輕炎癥和疼痛，但不能逆轉(zhuǎn)關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展，同時(shí)長(zhǎng)時(shí)間藥物治療伴有一定的副作用［9］；手術(shù)治療具有一定的局限性，關(guān)節(jié)鏡手術(shù)具有感染的風(fēng)險(xiǎn)，人工關(guān)節(jié)置換術(shù)存在費(fèi)用高、恢復(fù)周期長(zhǎng)、不適合運(yùn)動(dòng)量較大的人群等限制［10］?；诖?，臨床急需一種可替代的治療方法。近年來隨著再生醫(yī)學(xué)的發(fā)展，間充質(zhì)干細(xì)胞治療OA 的研究越來越多。

間充質(zhì)干細(xì)胞是一群具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞，其向軟骨細(xì)胞分化的潛能為OA 的治療開辟了新的道路。間充質(zhì)干細(xì)胞可以來源于骨髓、臍帶、滑膜以及脂肪組織［11-12］，其中脂肪干細(xì)胞來源廣泛、增殖能力和軟骨分化潛能強(qiáng)、可以通過旁分泌減輕炎癥來緩解OA，因而被廣泛應(yīng)用于臨床及基礎(chǔ)研究［13-15］。目前研究較多的脂肪干細(xì)胞主要是皮下脂肪干細(xì)胞（subcutaneous adiposederived stem cells，Sc-ASCs）和 內(nèi) 臟 脂 肪 干 細(xì) 胞（visceral adipose-derived stem cells，V-ASCs），人VASCs 增殖能力優(yōu)于Sc-ASCs，但成脂分化、成軟骨分化潛能較差，且人Sc-ASCs 對(duì)大鼠OA 的療效優(yōu)于V-ASCs［16］。除此之外，人工關(guān)節(jié)置換術(shù)切除的廢棄物髕下脂肪墊（infrapatellar fat pad，IPFP）來源的脂肪干細(xì)胞在體外能分化成軟骨和成骨細(xì)胞，具有促進(jìn)軟骨和骨缺損修復(fù)的潛能［17］，成為再生醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn)。

IPFP 是膝關(guān)節(jié)內(nèi)髕骨肌腱、股骨髁和脛骨平臺(tái)之間呈三角形的脂肪組織，主要生理功能是減少關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)時(shí)摩擦，保護(hù)膝關(guān)節(jié)。IPFP 含有大量的干細(xì)胞且其獲取不會(huì)對(duì)患者產(chǎn)生二次傷害。已有研究報(bào)導(dǎo)IPFP-ASCs 有較強(qiáng)的增殖能力和分化潛能，IPFP-ASCs 軟骨分化和成骨分化潛能優(yōu)于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞［18］。同時(shí)，IPFPASCs 通過分泌血小板源性生長(zhǎng)因子（plateletderived growth factor，PDGF）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（fibroblast growth factor，F(xiàn)GF）等細(xì)胞因子，與TGF-β 共同發(fā)揮抗凋亡作用，從而對(duì)膝關(guān)節(jié)產(chǎn)生修復(fù)作用。IPFP-ASCs 的表面標(biāo)記物與膝關(guān)節(jié)周圍的其他細(xì)胞相似，可以與其他合成移植物一起植入膝關(guān)節(jié)減少免疫排斥反應(yīng)［17］，因此IPFP-ASCs 成為自體或異體干細(xì)胞移植的種子細(xì)胞，再生醫(yī)學(xué)和組織工程的研究熱點(diǎn)?；贗PFPASCs 在增殖、分化、抗凋亡等方面的特點(diǎn)，本研究比較人IPFP-ASCs 與Sc-ASCs 的特性及對(duì)大鼠OA 的療效，為選擇不同解剖位置來源的脂肪干細(xì)胞治療OA 提供理論依據(jù)。

材料和方法

儀器設(shè)備CO2培養(yǎng)箱購自美國Thermo Fisher Scientific 公司；離心機(jī)購自德國Eppendorf AG 公司；Western blot 電泳槽及相關(guān)設(shè)備購自美國Bio-Rad 公司；倒置熒光顯微鏡購自日本Olympus公司；超凈工作臺(tái)購自新加坡ESCO 公司。

材料與試劑Ⅷ型膠原酶、生物素、青霉素、鏈霉素、地塞米松、3-異丁基-1 甲基黃嘌呤、胰島素、油紅購自美國Sigma-Alderich 公司；F12/DMEM 培養(yǎng)基、胎牛血清FBS、胰酶購自美國Gibco BRL 公司；蛋白預(yù)染Marker 購自美國Bio-Rad 公司；ECL 顯影液購自上海圣爾生物科技有限公司；阿爾新藍(lán)購自上海生命科學(xué)有限公司；EdU Flow Cytometry Assay Kits 試劑盒購自賽默飛世爾科技公司；三氯甲烷、異丙醇、75%乙醇、無水乙醇購自國藥集團(tuán)化學(xué)有限公司。

臨床樣品的收集人體皮下脂肪組織和髕下脂肪墊來自上海市東方醫(yī)院未患代謝性相關(guān)疾病患者，患者年齡50~80 歲，BMI 23~30 kg/m2。本研究獲得上海市東方醫(yī)院人體細(xì)胞臨床研究倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批件號(hào)【2020】體臨審（004）號(hào)），并遵循患者知情同意原則。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD 雄鼠購自上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，SPF 級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)，維持12 h/12 h 光/暗循環(huán)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均遵循復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)相關(guān)規(guī)定。

動(dòng)物造模40 只8 周大SD 大鼠，每只200 g，大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、內(nèi)側(cè)半月板不穩(wěn)術(shù)組、皮下脂肪干細(xì)胞治療組、髕下脂肪墊干細(xì)胞治療組，每組10 只。手術(shù)暴露關(guān)節(jié)腔，鈍性剝離脂肪墊后，切斷膝橫韌帶，游離半月板，構(gòu)建OA 模型。術(shù)后3 天，每只大鼠每天注射青霉素40 萬U，術(shù)后4 周，骨關(guān)節(jié)腔注射Sc-ASCs 和IFPF-ASCs 4×106個(gè)細(xì)胞，術(shù)后10 周對(duì)大鼠實(shí)施安樂死，采集膝關(guān)節(jié)標(biāo)本，4%多聚甲醛固定過夜，EDTA 脫鈣液脫鈣1 個(gè)月，石蠟包埋，進(jìn)行番紅固綠染色。

脂肪干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)臨床樣品脂肪組織PBS 漂洗，置于5 mL 離心管中，加入0.075%Ⅷ型膠原酶，剪碎至1 mm3小塊，37 ℃水浴40 min 至無明顯組織塊，室溫，200×g離心5 min，棄上清，PBS漂洗1 遍，200×g離心5 min，F(xiàn)12/DMEM 培養(yǎng)基重懸轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿，于37 ℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)，12 h 后換液。

流式細(xì)胞術(shù)體外分離人皮下脂肪組織和髕下脂肪墊血管基質(zhì)組分（stromal vascular fraction，SVF），用含0.5%胎牛血清的PBS 重懸，分別與帶熒光標(biāo)記的單克隆抗體CD34-PE，CD31-PE 避光孵育40 min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD34+，CD31+細(xì)胞。

EdU 摻入實(shí)驗(yàn)將EdU 溶液（0.1 mg/mL）加入細(xì)胞上清中，48 h 后檢測(cè)，消化收集細(xì)胞，含1%牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）的PBS 清洗細(xì)胞，棄上清，加入100 μL 固定液，避光室溫15 min，1% BSA 的PBS 清 洗 細(xì) 胞，棄 上 清，加 入100 μL 透膜液，室溫15 min，加入500 μL 抗體反應(yīng)液，避光室溫30 min，1% BSA 的PBS 清洗細(xì)胞，棄上清，加入500 μL PBS，過300目篩網(wǎng)，流式儀上機(jī)檢測(cè)。數(shù)據(jù)分析采用Total/EdU-細(xì)胞比值比較增殖速率，比值越大，EdU+細(xì)胞越多，增殖速率越高。

Western blot30 μg 蛋白經(jīng)10%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，電轉(zhuǎn)移至PVDF 膜。將膜用5% 脫脂奶粉（TTBS 配制）室溫封閉1 h，一抗用3%BSA 稀釋，4 ℃孵育12 h；TTBS 洗滌3 次，每次10 min，二抗（5% 脫脂奶粉稀釋）室溫孵育1 h，TTBS 洗 滌3 次，每 次15 min。ECL 顯 影 液 孵 育2 min，顯影拍照。

脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)成脂按上述方法分離得到脂肪干細(xì)胞，鋪于3.5 cm 細(xì)胞培養(yǎng)皿，培養(yǎng)基為含10% 胎牛血清、1% 青霉素和鏈霉素雙抗的F12/DMEM，每隔2 天換液。細(xì)胞接觸抑制2 天時(shí)，計(jì)為第0 天，加0.5 mmol/L 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、1 μg/mL 胰島素、1 μmol/L 羅格列酮誘導(dǎo)48 h；更換培養(yǎng)基加1 μg/mL 胰島素、1 μmol/L 羅格列酮繼續(xù)誘導(dǎo)48 h；換液，更換培養(yǎng)基F12/DMEM，至第8 天脂肪細(xì)胞分化成熟。

脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)成骨按上述方法分離得到脂肪干細(xì)胞，鋪于3.5 cm 細(xì)胞培養(yǎng)皿，培養(yǎng)基為含10%胎牛血清、1%青霉素和鏈霉素雙抗的F12/DMEM，2 天后更換成骨誘導(dǎo)液（F12/DMEM、10%胎牛血清、1%青霉素和鏈霉素、1 μmol/L 地塞米松、50 mmol/L抗壞血酸、20 mmol/L β-甘油磷酸鈉），每隔3 天換液，誘導(dǎo)分化21 天，進(jìn)行茜素紅染色。

脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)成軟骨按上述方法分離得到脂肪干細(xì)胞，體外培養(yǎng)消化計(jì)數(shù)，以1×107/mL 的密度進(jìn)行微滴，每滴5 μL，培養(yǎng)基為含10%胎牛血清、1%青霉素和鏈霉素的F12/DMEM，24 h 后，更換成軟骨誘導(dǎo)液（F12/DMEM，10%胎牛血清、1%青霉素和鏈霉素、0.1 μmol/L 地塞米松，1% ITS，0.1% VitC、10 ng/mL TGF-β），每隔3 天換液，誘導(dǎo)分化21 天，進(jìn)行阿爾新藍(lán)染色。

油紅染色取出培養(yǎng)的細(xì)胞，棄培養(yǎng)基，PBS洗3 次。4%多聚甲醛固定20 min，PBS 洗3 次，加入1 mL 油紅工作液（油紅貯存液與去離子水3∶2 體積混合，過濾除雜），室溫孵育2 h，棄去油紅工作液，去離子水洗3 次，置于顯微鏡下觀察。配置油紅貯存液：稱取0.5 g 油紅O，加入100 mL 異丙醇，充分震蕩混勻，避光保存。

茜素紅染色取出培養(yǎng)的細(xì)胞，棄培養(yǎng)基，PBS洗3 次。4% 多 聚 甲 醛 固 定20 min，PBS 洗3 次，0.5%茜素紅溶液染色30 min，棄染液，去離子水洗3次，置于顯微鏡下觀察。

阿爾新藍(lán)染色取出培養(yǎng)的細(xì)胞，棄培養(yǎng)基，PBS 洗3 次，4%多聚甲醛固定30 min，PBS 漂洗3次，0.1 mmol 鹽酸溶液浸泡5 min pH 降至1.0，阿爾新藍(lán)室溫孵育過夜，0.1 mmol 鹽酸溶液漂洗3 次去除背景，加入1mL PBS，顯微鏡觀察拍照。

番紅固綠染色取收集的大鼠膝關(guān)節(jié)樣本，置于4%多聚甲醛固定過夜，經(jīng)3 周EDTA 脫鈣，石蠟包埋，厚度為4 μm，切片以二甲苯脫蠟，經(jīng)梯度（100%乙醇，95%乙醇，80%乙醇，75%乙醇）脫水，蘇木精染核15 min，自來水浸洗，鹽酸酒精分色，自來水藍(lán)化15 min，固綠染色15 min，自來水浸洗，1%冰醋酸洗片，番紅染色8 min，自來水浸洗，常規(guī)脫水，透明，封片。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)用GraphPad Prism5.0 和ImagePro Plus5.0 分析處理。 統(tǒng)計(jì)分析采用Student’st-test，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

IPFP-ASCs 的分離及三系分化人髕下脂肪墊經(jīng)酶消化法分離獲得原代脂肪干細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)2天后，鏡下即可觀察到培養(yǎng)瓶的底部細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)呈長(zhǎng)梭形（圖1A）。人IPFP-ASCs 傳至P2代，體外誘導(dǎo)其成脂、成骨、成軟骨，并進(jìn)行油紅染色、茜紅素染色和阿爾新藍(lán)染色。成脂誘導(dǎo)8 天后，鏡下可觀察到大量脂滴，經(jīng)油紅O 染色可見大量紅色脂滴（圖1B）。成骨誘導(dǎo)21 天后，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，經(jīng)茜素紅染色可見大量深紅色鈣結(jié)節(jié)（圖1C）。成軟骨誘導(dǎo)21 天，經(jīng)阿爾新藍(lán)染色可見大片深藍(lán)色的蛋白多糖聚糖（圖1D）。結(jié)果顯示人IPFP-ASCs 呈長(zhǎng)梭形，具有多向分化潛能，體外可被誘導(dǎo)成脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞。

圖1 人髕下脂肪墊干細(xì)胞分離與分化Fig 1 Isolation and differentiation of human infrapatellar fat pad derived stem cells

人Sc-ASCs 和IPFP-ASCs 的體外特征從人皮下脂肪組織和髕下脂肪墊中分離脂肪干細(xì)胞，體外擴(kuò) 增 至P2 代，加 入EdU 溶 液，48 h 后 流 式 檢 測(cè)EdU+細(xì)胞，比較Sc-ASCs 和IPFP-ASCs 體外增殖能力。結(jié)果顯示IPFP-ASCs 體外增殖能力較Sc-ASCs 強(qiáng)（圖2A、2B）。經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Sc-ASCs和IPFP-ASCs 的干細(xì)胞表面標(biāo)記蛋白CD34 和血管相關(guān)標(biāo)記蛋白CD31 的表達(dá)，結(jié)果顯示Sc-ASCs和IPFP-ASCs 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2C、2D），表明Sc-ASCs 和IPFP-ASCs 具有相似的生物學(xué)特性。

圖2 人皮下和髕下脂肪墊干細(xì)胞體外增殖能力和生物學(xué)特性Fig 2 Proliferation ability and biological characteristics of human Sc-ASCs and IPFP-ASCs

人Sc-ASCs 和IPFP-ASCs 成軟骨潛能人Sc-ASCs 和IPFP-ASCs 采用微滴法誘導(dǎo)成軟骨細(xì)胞，軟骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)21 天后，阿爾新藍(lán)染色及Western blot 比較人Sc-ASCs 和IPFP-ASCs 體外成軟骨潛能。阿爾新藍(lán)染色顯示人IPFP-ASCs 藍(lán)色軟骨細(xì)胞團(tuán)顏色明顯深于對(duì)照組和Sc-ASCs 組（圖3A），表明IPFP-ASCs 體外成軟骨能力較強(qiáng)。Western blot 檢測(cè)軟骨細(xì)胞合成標(biāo)記物SOX9 的表達(dá)，結(jié)果顯示IPFP-ASCs SOX9 表達(dá)明顯高于對(duì)照組和Sc-ASCs 組（圖3B）。阿爾新藍(lán)和Western blot 結(jié)果一致，表明IPFP-ASCs 體外成軟骨潛能更強(qiáng)。

圖3 人皮下和髕下脂肪墊干細(xì)胞體外誘導(dǎo)成軟骨Fig 3 Chondrogenesis of human IPFP-ASCs and Sc-ASCs in vitro

人Sc-ASCs 和IPFP-ASCs 對(duì)大鼠OA 療 效研究表明，OA 患者關(guān)節(jié)腔注射自體Sc-ASCs 和IPFP-ASCs 可以改善炎癥和疼痛。為了比較人Sc-ASCs 和IPFP-ASCs 對(duì) 大 鼠OA 的 療 效 差 異，橫 斷大鼠膝橫韌帶，游離半月板構(gòu)建大鼠OA 模型。術(shù)后4 周關(guān)節(jié)腔注射4×106Sc-ASCs 和IPFP-ASCs，術(shù)后10 周收集大鼠膝關(guān)節(jié)樣本，進(jìn)行形態(tài)學(xué)大體觀察和番紅固綠染色。結(jié)果（圖4A）顯示，和對(duì)照組相比，DMM 造模組股骨遠(yuǎn)端存在骨贅和纖維組織，軟骨表面粗糙磨損，造模成功，Sc-ASCs 治療組骨贅減少，IPFP-ASCs 治療組表面較光滑，無明顯骨贅生成。番紅固綠染色顯示，對(duì)照組軟骨層連續(xù)致密，DMM 造模組軟骨表層不連續(xù)，深層纖維化及垂直裂縫到達(dá)鈣化層，Sc-ASCs 治療組關(guān)節(jié)面纖維化且軟骨淺表層存在垂直裂隙，IPFP-ASCs 治療組軟骨層較為連續(xù)，僅存在輕微纖維化，表明IPFPASCs 治療組療效更好（圖4B）。進(jìn)行OARSI 評(píng)分用于量化大鼠軟骨損傷的嚴(yán)重程度，結(jié)果顯示人IPFP-ASCs 治療組OARSI 評(píng)分顯著降低，且低于Sc-ASCs 治療組，對(duì)DMM 術(shù)后大鼠軟骨損傷有顯著的緩解作用，表明人IPFP-ASCs 治療大鼠OA 療效優(yōu)于Sc-ASCs。

圖4 人皮下和髕下脂肪墊干細(xì)胞對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎療效差異Fig 4 Differences in the efficacy of human IPFP-ASCs and Sc-ASCs on osteoarthritis in rats

討 論

脂肪干細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于隆胸、整容、抗衰老、創(chuàng)面修復(fù)、心血管疾病及骨關(guān)節(jié)炎等研究［19-23］，目前已證明ASCs 可治療骨關(guān)節(jié)炎但療效并不穩(wěn)定。Toghraie 等［24］和Kuroda 等［25］發(fā) 現(xiàn) 脂 肪 干 細(xì) 胞 可 以改善骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的軟骨損傷。Lee 等［26］證明注射脂肪干細(xì)胞的骨關(guān)節(jié)炎患者美國西安大略和麥克馬斯特大學(xué)（Western Ontario And Mcmaster University，WOMAC）骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分和軟骨變性得到改善。脂肪干細(xì)胞注射劑量和細(xì)胞來源影響ASCs 的 療 效。2016 年，Pers 等［27］發(fā) 現(xiàn) 不 同 劑 量ASCs 對(duì)骨關(guān)節(jié)炎疼痛緩解效果不同，部分患者的軟骨磨損得到改善，但其他患者觀察到相反的效果。我們實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)皮下脂肪干細(xì)胞治療骨關(guān)節(jié)炎療效優(yōu)于內(nèi)臟脂肪干細(xì)胞［16］，近年來髕下脂肪干細(xì)胞成為ASCs 的來源，因此本文比較了皮下脂肪干細(xì)胞和髕下脂肪干細(xì)胞對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的療效。

本研究首先通過膠原酶消化法獲得人IPFPASCs，形態(tài)呈長(zhǎng)梭形，體外驗(yàn)證其具有三系分化潛能，可成功誘導(dǎo)成脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞。臨床研究已證明ASCs 可用于治療OA，但是由于其成分復(fù)雜、臨床應(yīng)用不規(guī)范、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，導(dǎo)致其療效不穩(wěn)定。隨著單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)不同來源的ASCs 雖然形態(tài)相似，但具有異質(zhì)性［28-29］，不同細(xì)胞亞群干細(xì)胞特性不同［30］。研究報(bào)導(dǎo)ASCs 中DPP4+細(xì)胞亞群增殖能力較強(qiáng)，但成脂潛能較差，ICAM+和CD142+亞群更容易分化成成熟脂肪細(xì)胞［31-32］。Nepali 等［33］發(fā)現(xiàn)眼眶ATMSCs 的CD73、CD90、CD105 和CD146 的表達(dá)高于腹部AT-MSCs，而CD31、CD45 和HLA-DR 的表達(dá)低 于 腹 部AT-MSCs；IPFP-ASCs 中 的CD34 和CD45 的 表 達(dá) 高 于BM-ASCs［34］。因 此 我 們 比 較 人Sc-ASCs 和IPFP-ASCs 增 殖 能 力，Edu 摻 入 實(shí) 驗(yàn) 證明人IPFP-ASCs 體外增殖能力高于Sc-ASCs；流式檢 測(cè) 人IPFP-ASCs 及Sc-ASCs 中CD34 及CD31 的表 達(dá)，發(fā) 現(xiàn)IPFP-ASCs 及Sc-ASCs 中CD34 及CD31 表達(dá)沒有差異。

ASCs 治療OA 與其成軟骨潛能密切相關(guān)，已有研究發(fā)現(xiàn)注射脂肪干細(xì)胞可觀察到軟骨新生，但不同ASCs 成軟骨潛能具有差異。研究發(fā)現(xiàn)ASCs CD146+亞群表現(xiàn)出更好的軟骨再生潛能，與支架有良好的生物相容性，在大鼠軟骨缺損模型中，CD146+亞群與細(xì)胞外基質(zhì)支架聯(lián)合使用促進(jìn)軟骨的再生效果優(yōu)于ASCs 與細(xì)胞外基質(zhì)支架的聯(lián)合使用［35］。Jiang 等［36］發(fā)現(xiàn)脂肪干細(xì)胞中CD105+細(xì)胞亞群成骨及成軟骨能力較強(qiáng)，CD105-細(xì)胞亞群成脂能力較強(qiáng)，將CD105+細(xì)胞接種于生物支架中，體外軟骨培養(yǎng)基中誘導(dǎo)8 周，可形成均勻的軟骨樣組織。因此我們比較了人IPFP-ASCs 及Sc-ASCs 的體外成軟骨潛能及體內(nèi)大鼠OA 治療效果，阿爾新藍(lán)染色及Western blot 證明人IPFP-ASCs 體外成軟骨潛能優(yōu)于Sc-ASCs。體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)各組大鼠膝關(guān)節(jié)進(jìn)行形態(tài)學(xué)大體觀察，番紅固綠染色及OARSI 評(píng)分證明人IPFP-ASCs 治療大鼠OA 療效優(yōu)于Sc-ASCs。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)與人Sc-ASCs 相比，人IPFP-ASCs 的體外增殖能力、成軟骨潛能較強(qiáng)，體內(nèi)治療大鼠OA 效果更優(yōu)，為ASCs 的擇優(yōu)選擇提供了一定的理論基礎(chǔ)。

作者貢獻(xiàn)聲明宋賽賽 文獻(xiàn)調(diào)研與整理，數(shù)據(jù)采集，論文撰寫和修訂。夏國宏 臨床樣本數(shù)據(jù)分析。尹峰 臨床樣本提供。湯妍 論文構(gòu)思、設(shè)計(jì)和修訂。

利益沖突聲明所有作者均聲明不存在利益沖突。