趙春蕊，張素卿，吉利偉，董玲玲

(山東魯抗舍里樂藥業(yè)有限公司，山東 濟寧 272000)

0 引言

鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預混劑(商品名:利高)是碩騰公司開發(fā)的豬用復方預混劑，用于防治豬赤痢、沙門氏菌病、大腸桿菌性腸炎及支原體肺炎，具有廣譜、高效、安全、低耐藥等優(yōu)點，臨床應用前景廣闊[1-2]。目前，農業(yè)農村部將其列為參比制劑，收入《獸藥比對試驗目錄》(農業(yè)農村部公告第192號)，國內仿制藥申報需要進行比對研究。

腸炎與肺炎是養(yǎng)豬業(yè)中危害嚴重的常見疾病[3-4]，為了防控上述疾病，依據(jù)《獸用化學藥物制劑研究基本技術指導原則》《獸用化學藥物穩(wěn)定性技術指導原則》《獸藥比對試驗產品藥學研究等資料要求》的通知要求，開發(fā)了鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預混劑，文中對研制的仿制藥與利高的各項質量指標(如性狀、粒度、干燥失重、有關物質、含量)及樣品穩(wěn)定性進行了全面的比對研究，以確定仿制藥與利高質量的一致性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津液相色譜儀LC-20A(包括DGU-20A5R脫氣機、LC-20AT四元泵、SLA-20AXR自動進樣器、CTO-20A柱溫箱、SPD-20A檢測器、Labsolution色譜工作站)；ZY-300IV 多功能微生物自動測量分析儀:北京先驅威鋒技術開發(fā)公司；SPX-250 B型生化培養(yǎng)箱:上海佳勝實驗設備有限公司；HPP260型藥品穩(wěn)定性試驗箱，德國美墨爾特有限公司。

1.2 試藥

鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預混劑(規(guī)格:100 g，林可霉素2.2 g與大觀霉素2.2 g，山東魯抗舍里樂藥業(yè)有限公司高新區(qū)分公司，批號1808001、1808002、1808003；利高，碩騰(蘇州)動物保健品公司，批號18070493A；林可霉素對照品:中國獸藥監(jiān)察所，批號K0101503，純度84.6%；大觀霉素對照品:中國獸藥監(jiān)察所，批號K0261705，每1 mg相當于644 IU大觀霉素。甲醇為色譜純；硼砂、磷酸為分析純；水為雙蒸水。

2 試驗方法與結果

2.1 林可霉素含量測定

采用高效液相色譜法測定。色譜條件:色譜柱為YMC-Triart C18(250×4.6 mm，5 μm)；流動相為0.05 mol/L硼砂溶液(用85%磷酸溶液調節(jié)pH值至6.1)-甲醇(1:1)；流速為0.9 mL/min；柱溫為40℃；檢測波長為214 nm；進樣濃度0.8 mg/mL，進樣量為10 μL。

2.1.1 干擾試驗

分別將稀釋液、林可霉素對照品溶液、空白輔料溶液、供試品溶液過濾，取10 μL進樣，記錄色譜圖(見圖1)，結果表明，稀釋液、空白輔料均不干擾林可霉素的含量測定。

圖1 稀釋液(A)、空白輔料溶液(B)、對照品溶液(C)、供試品溶液(D)色譜圖

2.1.2 線性和范圍考察

分別配制濃度為0.603 mg/mL(75%)、0.724 mg/mL(90%)、0.804 mg/mL(100%)、0.885 mg/mL(110%)、1.005 mg/mL(125%)的林可霉素對照品溶液，過濾，取10 μL進樣，每個濃度重復3次，記錄色譜圖。以林可霉素峰面積對濃度線性回歸，得其回歸方程Y=2E+06X+9 187.7(R2=0.999 4)，表明林可霉素濃度在0.603～1.005 mg/mL與峰面積的線性關系良好。

2.1.3 精密度測定

依法配制6份供試品溶液(批號1808001)，同時制備2份對照品溶液，分別進樣，以外標法計算含量，得平均含量為104.11%，RSD為0.40%(n=6)。由不同分析人員在不同日期制備6份供試品溶液及2份對照品溶液進樣測定，平均含量為104.03%，RSD為0.29%(n=6)，重復性與中間精密度12次檢測中，平均含量為104.07%，RSD為0.33%(n=12)，表明此法精密度高，符合定量分析的要求。

2.1.4 準確度測定

分別稱取林可霉素對照品約76 mg(相當于80%)、95 mg(相當于100%)、113 mg(相當于120%)與一定量的空白輔料，配制成混粉，每個重量3份并測定含量計算回收率。平均回收率為100.42%，回收率在99.0%～101.0%，RSD為0.46%，表明該方法回收率穩(wěn)定，變異系數(shù)小，符合試驗要求。

2.2 大觀霉素含量測定

照抗生素微生物測定法測定[5-6]。1 000 IU大觀霉素相當于1mgC14H24N2O7。

2.2.1 線性和范圍考察

制備濃度約為49 IU/mL、70 IU/mL、100 IU/mL、142.86 IU/mL、204.08 IU/mL、291.55 IU/mL的大觀霉素標準品溶液，采用一劑量法測定，以抑菌圈直徑為橫坐標，以濃度的對數(shù)LgC為縱坐標進行線性回歸，得線性回歸方程為:Y=2.077 5+0.133 5(X-18.031 4)(r=0.999 1)，表明大觀霉素含量測定方法在49～291.55 IU/mL濃度范圍內線性關系良好。

2.2.2 精密度測定

依法配制6份供試品溶液(批號1808001)，按抗生素微生物檢定法測定，計算樣品效價，得平均含量為103.76%，RSD為0.20%(n=6)。由不同分析人員在不同日期制備6份供試品溶液進行測定，得平均含量為102.49%，RSD為0.29%(n=6)，重復性與中間精密度12次檢測中，平均含量為103.12%，RSD為0.67%(n=12)，表明此法精密度高，符合定量分析的要求。

2.2.3 準確度測定

取供試品(1808001，大觀霉素測定效價22.9 IU/mg)約1 091 mg，精密稱定，分別加入大觀霉素標準品約23 mg、39 mg、54 mg，每個重量3份，配制成濃度為(80、160)IU/mL、(100、200)IU/mL、(120、240)IU/mL的溶液，按抗生素微生物檢定法測定，計算樣品效價及回收率。平均回收率為98.44%，其RSD為2.00%，表明此法準確度符合方法學驗證的要求。

2.3 樣品質量比對及穩(wěn)定性考察

按照鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預混劑質量標準結合《中國獸藥典》對原研藥與仿制藥樣品含量、性狀、干燥失重等項目進行檢測，對比考察。結果(見表1)表明，原研藥與仿制藥的各項質控指標均無明顯差異。

將仿制藥及原研樣品，按市售包裝，進行加速試驗(40℃±2℃、相對濕度75%±5%)、長期試驗(25℃±2℃、相對濕度60%±10%)，分別于不同時間點取樣，考察樣品的穩(wěn)定性?？疾祉椖堪ㄐ誀?、干燥失重、有關物質、林可霉素含量、大觀霉素含量。結果顯示(見表1):兩者均為淡褐色粉末，自研樣品林可霉素B在3.2%～3.5%，林可霉素含量下降不高于1.59%，大觀霉素含量下降不高于1.08%，變化不顯著；原研樣品林可霉素在2.5%左右，林可霉素含量下降2.02%，大觀霉素含量下降1.02%，變化不顯著。仿制藥與原研藥在各考察時間點上均無明顯變化，說明兩者在不同試驗條件下的樣品穩(wěn)定性一致。

表1 鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預混劑質量穩(wěn)定性考察 單位：%

3 結論

文中對鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預混劑原研藥與仿制藥進行了質量一致性評價，結果二者在各對比條件下，質量無明顯差異，穩(wěn)定性均良好，初步說明仿制藥與原研藥的質量具有一致性。文中結果為鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預混劑及類似劑型藥物質量一致性評價工作的開展提供了依據(jù)。