亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        姜黃素對前列腺癌PC-3細胞體外生長的影響

        2022-06-20 05:34:10程繼高丹付國董青川
        西部醫(yī)學(xué) 2022年6期
        關(guān)鍵詞:素處理依賴性姜黃

        程繼 高丹 付國 董青川

        (陜西省人民醫(yī)院泌尿外科, 陜西 西安 710068)

        前列腺癌(Prostate cancer)是常見的惡性腫瘤,手術(shù)切除、放療和化療是目前常用的臨床治療手段[1-2]。但常規(guī)化療藥物和放射治療引起的副作用,嚴重影響了患者術(shù)后的康復(fù)和生活質(zhì)量[3-5]。研究前列腺癌的病理學(xué)進程,不斷探尋其發(fā)病的分子機制,尋找新的治療靶點和治療手段,是目前臨床急需解決的問題。姜黃素(Curcumin)是一種多酚類物質(zhì),提取于姜黃、郁金等姜科植物中[6]。國內(nèi)外的研究均已證實[7-8],姜黃素具有抗氧化、抗炎等作用,同時還有抑制腫瘤生長的效應(yīng)。但姜黃素對前列腺癌生物學(xué)行為的影響,以及參與上述調(diào)控進程的相關(guān)信號通路分子,目前依然不完善,需要進一步的體內(nèi)外研究來證實。Notch1分子與前列腺癌的增殖密切相關(guān),可以通過其下游的PI3K-AKT-mTOR和MEK-ERK途徑,分別影響腫瘤血管生成和體外生長的過程[9]。但是否姜黃素通過影響Notch1分子,調(diào)控前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程,目前相關(guān)報道鮮少,仍有待進一步的研究。 本實驗以人前列腺癌PC-3細胞為研究對象,通過給予不同濃度的姜黃素處理,觀察前列腺癌細胞增殖和凋亡的變化,同時分析姜黃素對Notch1分子表達水平的影響,觀察是否姜黃素影響前列腺癌PC-3細胞體外生長,進一步闡明姜黃素抑制前列腺癌生長的分子機制,為臨床前列腺癌的化療提供新的策略和實驗依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料和細胞培養(yǎng) 人前列腺癌PC-3細胞株購于美國ATCC公司。姜黃素(Curcumin)購于 Sigma公司。DMEM培養(yǎng)液和胎牛血清均購于Invitrogen公司。人前列腺癌PC-3細胞,參考文獻常規(guī)培養(yǎng),37℃孵箱,95%O2和5%CO2,DMEM培養(yǎng)液包括10%滅活血清。

        1.2 對細胞增殖的影響 常規(guī)培養(yǎng)人前列腺癌PC-3細胞,接種于96孔培養(yǎng)板,密度為5×103/孔,給予不同濃度的姜黃素處理(溶于DMSO),分別為500 nmol/L組、10 μmol/L組、100 μmol/L組和空白對照組(給予DMSO處理)。收集細胞,通過MTT法觀察姜黃素對PC-3細胞增殖的影響。PCNA mRNA可反應(yīng)腫瘤細胞增殖水平,收集上述細胞,提取RNA,通過定量PCR法檢測PCNA mRNA水平的變化,觀察不同濃度姜黃素對PC-3細胞中PCNA mRNA的影響,分析各組間差異。

        1.3 細胞凋亡的變化 收集不同處理組的細胞,與Annexin V/PI溶液室溫孵育30 min,通過流式細胞儀檢測不同處理組PC-3細胞凋亡率的變化,觀察不同濃度姜黃素處理3 d后,對PC-3細胞凋亡率的影響。Bcl-2分子mRNA水平可反應(yīng)腫瘤細胞凋亡狀態(tài),收集上述細胞,提取RNA,通過定量PCR法,檢測Bcl-2 mRNA水平的變化,觀察不同濃度姜黃素對PC-3細胞中Bcl-2 mRNA水平的影響,分析各組間差異。

        1.4 Caspase活性檢測 收集不同處理組的細胞,按Caspase活性檢測試劑盒操作規(guī)范要求,處理細胞,離心20 min,2000轉(zhuǎn)/min,上清孵育60 min,測定各組樣品吸光度的變化,分析PC-3細胞中Caspase-3和Caspase-9活性的變化,觀察不同濃度姜黃素處理3 d后,對PC-3細胞中Caspase活性的影響。

        1.5 分析Notch1和PI3K的變化 PC-3細胞經(jīng)不同濃度姜黃素處理3 d后,收集上述經(jīng)過姜黃素處理的細胞,提取RNA,通過定量PCR法,檢測PC-3細胞中Notch1和PI3K mRNA水平變化,分析各組間差異;同時,PC-3細胞經(jīng)不同濃度姜黃素處理3 d后,收集上述各組細胞,提取總蛋白,BCA法測定蛋白濃度,通過蛋白質(zhì)電泳檢測PC-3細胞中Notch1和PI3K蛋白表達的變化。

        2 結(jié)果

        2.1 姜黃素對PC-3細胞增殖的影響 500 nmol/L組、10 μmol/L組和100 μmol/L組其存活率均顯著低于空白對照組(P<0.05);而與500 nmol/L組比較,10 μmol/L組和100 μmol/L組對PC-3細胞增殖的影響差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),提示姜黃素影響PC-3細胞增殖的效應(yīng)具有一定的劑量依賴性。實驗結(jié)果還發(fā)現(xiàn),姜黃素抑制PC-3細胞增殖的效應(yīng)具有一定時間依賴性,PC-3細胞經(jīng)低劑量姜黃素處理3 d后,細胞增殖水平受到顯著抑制。500 nmol/L組其PCNA mRNA水平降低,與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。10 μmol/L組和100 μmol/L組中PCNA mRNA水平顯著低于500 nmol/L組(P<0.05),提示姜黃素降低PCNA mRNA水平,抑制PC-3細胞增殖,并體現(xiàn)一定的劑量依賴性。見表1、圖1。

        表1 姜黃素對前列腺癌PC-3細胞存活率的影響Table 1 Effect of Curcumin on PC-3 cell proliferation

        2.2 姜黃素對PC-3細胞凋亡率的影響 500 nmol/L組凋亡率高于空白對照組(P<0.05);與500 nmol/L組比較,10 μmol/L組、100 μmol/L組對PC-3細胞凋亡率的影響差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),提示姜黃素影響PC-3細胞凋亡率的效應(yīng)具有一定的劑量依賴性。PC-3細胞中Bcl-2 mRNA水平較高,500 nmol/L組Bcl-2 mRNA水平降低,與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。10 μmol/L組和100 μmol/L組細胞中Bcl-2 mRNA水平顯著低于500 nmol/L組(P<0.05),提示姜黃素降低Bcl-2 mRNA水平,誘導(dǎo)PC-3細胞凋亡,并體現(xiàn)一定的劑量依賴性。見表2、圖2。

        表2 姜黃素對PC-3細胞凋亡率的影響Table 2 Effect of Curcumin on PC-3 cell apoptosis

        2.3 姜黃素對PC-3細胞中Caspase活性的影響 500 nmol/L組Caspase-3和Caspase-9活性高于空白對照組(P<0.05)。同時,姜黃素對Caspase-3和Caspase-9活性的影響,也體現(xiàn)一定的劑量依賴性,10 μmol/L組和100 μmol/L組PC-3細胞中Caspase-3和Caspase-9活性顯著高于500 nmol/L組(P<0.05)。見圖3、圖4。

        2.4 姜黃素對PC-3細胞中Notch1水平的影響 PI3K-AkT-mTOR是Nototh1分子下游信號途徑,Notch1通過上述途徑調(diào)控腫瘤細胞的體外生長狀態(tài)。500 nmol/L組Notch1和PI3K 蛋白表達降低,與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。10 μmol/L組和100 μmol/L組PC-3細胞中Notch1和PI3K蛋白表達顯著低于500 nmol/L組(P<0.05),提示姜黃素可抑制Notch1和PI3K蛋白表達,并體現(xiàn)一定的劑量依賴性。PC-3細胞中Notch1和PI3K mRNA水平較高,500 nmol/L組Notch1和PI3K mRNA水平降低,與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。10 μmol/L組和100 μmol/L組PC-3細胞中Notch1和PI3K mRNA水平顯著低于500 nmol/L組(P<0.05),提示姜黃素可抑制Notch1 和PI3K mRNA的水平,并體現(xiàn)一定的劑量依賴性;此外,姜黃素通過Notch1途徑調(diào)控PI3K mRNA水平,影響PC-3細胞體外生長。見圖5、圖6、圖7。

        3 討論

        姜黃素作為一種傳統(tǒng)的植物藥物,已在中國和印度有超過2000年的應(yīng)用歷史。在多種慢性疾病的治療中,姜黃素已被證實具有重要的藥理效應(yīng),包括炎癥,風(fēng)濕,代謝紊亂,肝臟疾病,肥胖,神經(jīng)退行性疾病和一些惡性腫瘤[10-12]。截止2018年,在國內(nèi)外已發(fā)表的姜黃素有關(guān)的研究論文中(來源于pubmed檢索),37% 的文章都是與腫瘤相關(guān)的研究[13]。腫瘤是目前發(fā)達國家位居第一位的死亡因素,盡管近年來早期診斷和多種治療措施的應(yīng)用,有效降低了腫瘤引起的死亡率,但腫瘤耐藥性等因素依然是目前面臨的巨大難題,嚴重影響了臨床的治療效果。研究已發(fā)現(xiàn),姜黃素自身具有一定的抗腫瘤效應(yīng),同時聯(lián)合應(yīng)用姜黃素,還可以顯著提高其他抗腫瘤手段的臨床治療效果,通過影響不同的信號通路,增加放療敏感性或化療敏感性[14-16]。體內(nèi)外實驗表明[17],姜黃素可以顯著抑制肝癌細胞的增殖,影響細胞周期和細胞凋亡。此外,研究[18]還發(fā)現(xiàn),姜黃素能夠影響血管的生成,從而可以調(diào)控腫瘤血管生成的過程。據(jù)報道,姜黃素可調(diào)控p53、NF-kB、MAPK、Nrf2等信號通路,影響結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、口腔癌等惡性腫瘤的病理進程。姜黃素可以顯著降低IkB 激酶的磷酸化水平,阻止NF-kB亞單位p65的核轉(zhuǎn)錄作用,減少IL-6和IL-11等細胞因子的分泌,抑制NF-kB活性,影響腫瘤細胞的凋亡,增殖等過程。前列腺癌是常見的惡性腫瘤,研究前列腺癌的分子機制,尋找新的治療靶點和治療手段,提高臨床療效,減輕常規(guī)化療藥物和放射治療引起的副作用,對于改善患者生存質(zhì)量,具有重要的臨床意義。

        研究[19-20]證實,在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中,Notch信號通路參與調(diào)控腫瘤細胞的增殖、凋亡等過程,相關(guān)的分子在上述通路中扮演著重要的作用。Notch受體是以異源二聚體形式存在的膜蛋白分子[21]。研究[22]還發(fā)現(xiàn),Notch1分子在腫瘤細胞中表達增高,針對腫瘤細胞的增殖、分化、凋亡等,Notch分子均參與調(diào)控上述過程。在淋巴瘤的發(fā)展進程中,Myc可以與Notch1相互協(xié)同,促進腫瘤細胞的體外增殖,這一過程與MAML突變有關(guān)。此外,PI3K-AKT-mTOR 和MEK-ERK途徑與Notch1分子的表達水平密切相關(guān),影響腫瘤的生長。PI3K-AKT-mTOR是Notch1分子下游信號途徑,Notch1通過上述途徑調(diào)控腫瘤細胞的體外生長狀態(tài)。因此,尋找與Notch1分子作用相關(guān)的多酚類物質(zhì),有望影響腫瘤細胞的體外增殖等過程,具有一定的臨床意義。但是否姜黃素可以影響前列腺癌細胞中Notch1分子的水平,調(diào)控前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程,目前尚未見相關(guān)報道,其分子機制有待進一步闡明。

        本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同劑量的姜黃素可以抑制PC-3細胞的增殖,并具有一定的劑量依賴性。此外,姜黃素可以誘導(dǎo)PC-3細胞凋亡的發(fā)生,顯著增加PC-3細胞凋亡率,這一效應(yīng)可能與Caspase活性有關(guān)。經(jīng)過姜黃素處理的PC-3細胞,其Caspase-3和Caspase-9活性顯著增加。我們的結(jié)果還證實,PC-3細胞中Notch1 和PI3K mRNA高表達。PC-3細胞中Notch1和PI3K mRNA水平較高,經(jīng)過姜黃素處理的PC-3細胞,可顯著降低Notch1 和PI3K mRNA水平和蛋白表達,體現(xiàn)一定的劑量依賴性。提示,姜黃素可能通過對Notch1分子的抑制效應(yīng),調(diào)控PI3K水平,影響前列腺癌細胞的體外生物學(xué)特點,但具體的分子機制仍需要進一步的研究來證實。

        4 結(jié)論

        本研究結(jié)果表明,姜黃素可以影響前列腺癌細胞增殖、凋亡等過程,可能為臨床前列腺癌的化療提供新的策略和實驗依據(jù)。

        猜你喜歡
        素處理依賴性姜黃
        黃芩素對乳腺癌MDA-MB-231細胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其相關(guān)機制
        槲皮素對N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)誘導(dǎo)損傷的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用及其機制
        Curcumin in The Treatment of in Animals Myocardial ischemia reperfusion: A Systematic review and Meta-analysis
        非等熵 Chaplygin氣體極限黎曼解關(guān)于擾動的依賴性
        氮磷鉀素對朝陽大棗生長及產(chǎn)量的影響
        姜黃提取物二氧化硅固體分散體的制備與表征
        中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:19:43
        姜黃素對人胃癌AGS細胞自噬流的作用
        中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:37
        關(guān)于N—敏感依賴性的迭代特性
        商情(2017年38期)2017-11-28 14:08:59
        N-月桂?;劝彼猁}性能的pH依賴性
        舒適護理在面部激素依賴性皮炎中的應(yīng)用
        99久久免费只有精品国产| 亚洲色图视频在线观看网站| 亚洲AV无码中文AV日韩A| 国产超碰在线91观看| 一本色综合网久久| 精品人妻中文无码av在线| 国产精品厕所| 国产裸体AV久无码无遮挡| 亚洲a级视频在线播放| 久久精品99国产精品日本| 男男啪啪激烈高潮cc漫画免费| 国产久视频国内精品999| 国产精品一区二区三密桃| 性感美女脱内裤无遮挡| 永久亚洲成a人片777777| 久久发布国产伦子伦精品| 久久免费精品国产72精品剧情 | 国产亚洲激情av一区二区| 国产精品网站91九色| 亚洲娇小与黑人巨大交| 欧美日韩电影一区| 99久久无色码中文字幕鲁信| 国产三级黄色大片在线免费看| 影音先锋色小姐| 日本精品一区二区三区在线视频| 亚洲青涩在线不卡av| 9久久婷婷国产综合精品性色 | 人人澡人人澡人人看添av| 久久中国国产Av秘 入口| 中文字幕精品一区二区三区av| 91在线观看国产自拍| 森中文字幕一区二区三区免费| 99在线精品免费视频九九视| 日韩精品网| 亚洲白嫩少妇在线喷水| 亚洲av久久久噜噜噜噜| 236宅宅理论片免费| 久久久99久久久国产自输拍| 日本一区二区在线免费看| 欧美性猛交xxxx富婆| 日韩精品网|