裴曉東，孫占勇，陳世軍

（鄭州市第一人民醫(yī)院普外科，河南 鄭州 450000）

乳腺癌是女性發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一，嚴重威脅女性的生命健康，目前乳腺癌發(fā)病率逐年升高且呈低齡化趨勢［1-2］。據全球流行病統(tǒng)計數據顯示，2012年全球約有170萬乳腺癌新發(fā)病例，并有521 900例患者病死［3］。雖然近年來針對乳腺癌的篩查及放射治療、化學治療等手段有了長足進步，但乳腺癌的具體發(fā)病機制和侵襲轉移機制仍不十分清楚，因腫瘤細胞侵襲、轉移造成的治療失敗也屢見不鮮。因此，抑制腫瘤的侵襲、轉移已成為乳腺癌等腫瘤防治研究的焦點之一。黃芩素是一種從唇形科植物黃芩的根莖中提取的有效成分［4］。研究表明，黃芩素具有抗腫瘤、抗炎和抗細菌感染等生物學活性，對心血管疾病也表現出一定的防治作用［5］。ZHAO等［6］研究發(fā)現，黃芩素可通過調控腫瘤相關的巨噬細胞極化來抑制乳腺癌的侵襲和轉移。YU等［7］研究表明，黃芩素可通過激活長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）PAX8-AS1-N來抑制乳腺癌的生長。lncRNA是一類長度大于200個核苷酸且不能編碼蛋白質的RNA，可參與調控多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。轉移相關肺腺癌轉錄本1（metastasisassociated lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT1）是一種在腫瘤組織中高表達的lncRNA［8］；有研究證實，MALAT1可促進乳腺癌細胞的侵襲、轉移，并導致腫瘤細胞耐藥［8-9］?；诖耍狙芯客ㄟ^檢測黃芩素處理后人乳腺癌MDA-MB-231細胞轉移能力和侵襲能力的變化，進一步探討黃芩素對乳腺癌侵襲、轉移的作用；并通過觀察黃芩素處理后人乳腺癌MDA-MB-231細胞中上皮-間質轉化（epithelialmesenchymal transition，EMT）標志物上皮型鈣黏蛋白（cadherin 1，CDH1）、蝸牛家族轉錄抑制因子1（snail family transcriptional repressor，SNAIL）、波形蛋白（vimentin）表達水平以及MALAT1 mRNA表達變化，探討其分子生物學機制；旨在為臨床應用黃芩素治療乳腺癌提供依據。

1 材料與方法

1.1 細胞、試劑與儀器人乳腺癌細胞株MDAMB-231購自上海中國科學院細胞庫。實驗用黃芩素（CAS 491-67-8，貨號465119-100MG）、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）購自美國Sigma公司，RPMI-1640培養(yǎng)基和胎牛血清購自美國Gibco公司，放射免疫沉淀法（radio immunoprecipitation assay，RIPA）裂解液、結晶紫染色液購自上海碧云天生物技術有限公司，甲醇（分析純）購自北京國藥化學試劑有限公司，CDH1、SNAIL、vimentin一抗購自美國Abcam公司，辣根酶標記山羊抗小鼠免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）G二抗和內參β-肌動蛋白（β-actin）一抗購自北京中杉金橋公司，pcDNA3.1載體為本實驗室保存，聚偏二氟乙烯（polyvinylidene difluoride，PVDF）膜購自美國Millipore公司，轉染試劑Lipofectamine 2000購自美國Life公司，二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白定量試劑盒、增強型電化學發(fā)光液（enhanced chemical luminescence，ECL）、TRIzol試劑、反轉錄試劑盒、SYBR Green Master Mix染料購自美國ThermoFisher公司；熒光倒置顯微鏡購自德國Zeiss公司，細胞培養(yǎng)箱、7500型實時熒光定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）儀購自美國ThermoFisher公司，蛋白質印跡實驗電泳裝置購自北京六一儀器廠，天能化學發(fā)光成像系統(tǒng)購自上海天能科技有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞培養(yǎng)將MDA-MB-231細胞接種于含體積分數10%胎牛血清、1×105U·L－1青霉素和100 mg·L－1鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基中，置于37℃、含體積分數5%CO2培養(yǎng)箱中穩(wěn)定培養(yǎng)，培養(yǎng)48 h后收集對數生長期細胞用于后續(xù)實驗。

1.2.2 劃痕愈合實驗檢測細胞轉移能力取對數生長期MDA-MB-231細胞，按每孔5×105個細胞接種于6孔板中，隨機分為對照組和20、40、80、160μmol·L－1黃芩素處理組，每組設3個復孔，分別加入終濃度0、20、40、80、160μmol·L－1黃芩素溶液，置于37℃、含體積分數5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細胞生長至鋪滿培養(yǎng)皿底部時，使用10μL的無菌吸頭劃過細胞表面，使用預熱的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗2遍，將殘余的細胞碎片洗去，繼續(xù)置于37℃、含體積分數5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。分別于0、24 h時使用倒置顯微鏡拍照，應用Image J軟件測量劃痕寬度，并計算細胞轉移率。細胞轉移率＝（0 h劃痕寬度－24 h劃痕寬度）／0 h劃痕寬度×100%。

1.2.3 Transwell小室實驗檢測細胞侵襲能力取對數生長期MDA-MB-231細胞，隨機分為對照組和20、40、80、160μmol·L－1黃芩素處理組，分別加入終濃度0、20、40、80、160μmol·L－1黃芩素溶液干預12 h，隨后進行Transwell小室實驗。取干預12 h的各組細胞，每孔2.5×105個細胞接種于預鋪基質膠的小室中，將小室置于24孔板中，上室使用含體積分數1%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，下室使用含體積分數15%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中孵育24 h，隨后取出小室并使用PBS清洗3次，甲醇固定30 min，結晶紫染色30 min。染色結束后使用細胞刮刀將上室中的細胞輕輕刮下，PBS潤洗2次，將刮下的上室細胞收集于干凈的1.5 mL離心管中。PBS清洗后的小室置于顯微鏡下拍照，然后使用冰醋酸洗脫黏附在下室的細胞，使用酶標儀檢測波長260 nm處下室洗脫細胞的吸光度值，將洗脫的上室細胞合并至下室細胞中再次測量吸光度值，并計算侵襲率。侵襲率＝下室洗脫細胞的吸光度值／上室細胞合并至下室細胞后的吸光度值×100%。實驗重復3次，取均值。

1.2.4 蛋白質印跡法檢測各組細胞中CDH1、vimentin和SNAIL蛋白表達取對數生長期MDA-MB-231細胞，按每孔8×105個細胞接種于6孔板中，隨機分為對照組和20、40、80、160μmol·L－1黃芩素處理組，分別加入終濃度0、20、40、80、160μmol·L－1黃芩素溶液，置于37℃、含體積分數5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后，使用50μL RIPA裂解液裂解細胞并提取細胞總蛋白，取2μL裂解液上清蛋白樣品使用BCA法測定蛋白濃度。取30 mg樣品蛋白，使用聚丙烯酰胺凝膠電泳、PVDF轉膜后，使用50 g·L－1的脫脂牛奶室溫封閉1 h，分別加入β-actin、CDH1、SNAIL和vimentin一抗（稀釋比例均為1∶1 000），于4℃下孵育過夜，使用1×TBST洗膜3次，每次10 min，洗去一抗后，加入辣根酶標記山羊抗小鼠IgG二抗（稀釋比例1∶5 000），于37℃下孵育30 min，1×TBST洗膜3次，每次10 min，使用ECL發(fā)光液顯影，天能化學發(fā)光成像系統(tǒng)采集圖像，Image J圖像分析軟件測定蛋白質條帶灰度值，以目的蛋白灰度值與內參蛋白（β-actin）灰度值比值表示蛋白相對表達量。實驗重復3次，取均值。

1.2.5 實時熒光定量PCR檢測各組細胞中MALAT1 mRNA表達取對數生長期MDA-MB-231細胞，以每孔5×105個細胞接種于6孔板中，隨機分為對照組和20、40、80、160μmol·L－1黃芩素處理組，每組設3個復孔，分別加入終濃度0、20、40、80、160μmol·L－1黃芩素溶液，培養(yǎng)48 h后棄掉培養(yǎng)基，PBS清洗細胞2遍，隨后各組細胞中加入1 mL TRIzol試劑，根據試劑盒說明提取總RNA。取1μg總RNA根據反轉錄試劑盒說明書進行反轉錄獲得cDNA模板，反轉錄條件為42℃維持30 min，95℃維持2 min，cDNA模板保存于－20℃冰箱。采用qRT-PCR法檢測MALAT1 mRNA表達。MALAT1上游引物序列為5′-GGATCCTAGACCAGCATGCC-3′，下游引物序列為5′-AAAGGTTACCATAAGTAAGTTCCAGAAAA-3′；甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）上游引物序列為5′-GTCTCCTCTGACTTCAACAGCG-3′，下游引物序列為5′-ACCACCCTGTTGCTGTAGCCAA-3′。根據SYBR GREEN染料試劑盒說明書以cDNA模板為底物進行擴增，反應體系總體積為15μL，其中上下游引物共1μL（10μmol·L－1），cDNA模板1μL（200 ng），SYBR GREEN染料5.5μL和水7.5μL。擴增循環(huán)條件為95℃變性5 min，60℃退火30 s，72℃延伸20 s，循環(huán)45次；以GAPDH為內參，根據2－ΔΔCt法計算目的基因的相對表達量。

1.2.6 MALAT1過表達載體的構建在PubMed數據庫中獲得MALAT1基因mRNA序列，以此為模板設計PCR引物，并在引物兩端引入限制性酶切位點Bam H1和HindⅢ。PCR擴增獲得MALAT1 mRNA產物。過表達載體構建使用的MALAT1 mRNA-序列的上游引物序列為5′-CTAGCTAGCGCTTACAATCTTAGAGTGGTAGGCA-3′，下游引物序列為5′-CCGCTCGAGTCTAACATAGTTCAACCCACCAAAG-3′。雙酶切pcDNA3.1載體和MALAT1 PCR產物，根據限制性內切酶說明書配制反應體系，酶切過夜，獲得其線性片斷，使用T4 DNA連接酶將MALAT1 mRNA序列與酶切后的載體相連，并轉化至感受態(tài)大腸桿菌中進行擴增。利用載體的氨芐青霉素抗性篩選出轉化大腸桿菌陽性克隆并測序，測序結果正確的克隆用于提取過表達載體并保存菌種。

1.2.7 細胞轉染及過表達MALAT1細胞中CDH1、vimentin、SNAIL蛋白和SNAIL mRNA表達檢測取對數生長期MDA-MB-231細胞，按每孔5×105的密度接種于6孔板中，隨機分為對照組和20、40、80、160μmol·L－1黃芩素處理組，每組設3個復孔，分別加入終濃度0、20、40、80、160μmol·L－1黃芩素溶液，待細胞匯合度約為65%時，更換為不含血清和抗生素的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)4 h。按Lipofectamine 2000說明書配制轉染試劑和pcDNA3.1-MALAT1過表達質粒（2μg）混合液，其中轉染試劑與質粒體積比為2∶1，室溫靜置20 min后滴加至6孔板中，每孔500μL，將6孔板置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，應用蛋白質印跡法檢測細胞中CDH1、vimentin和SNAIL蛋白表達，方法同“1.2.4”；實時熒光定量PCR法檢測MALAT1 mRNA表達量，方法同“1.2.5”。

1.3 統(tǒng)計學處理應用SPSS 13.0軟件進行數據統(tǒng)計與分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，多組間均數比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用Student-Newman-Keuls（SNK）法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 5組MDA-MB-231細胞轉移率比較對照組和20、40、80、160μmol·L－1黃芩素處理組MDA-MB-231細胞轉移率分別為（91.23±2.12）%、（75.34±1.30）%、（66.42±5.03）%、（42.01±2.37）%、（29.38±6.01）%。20μmol·L－1黃芩素處理組和40μmol·L－1黃芩素處理組與對照組細胞轉移率比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；80μmol·L－1黃芩素處理組和160μmol·L－1黃芩素處理組細胞轉移率低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。80μmol·L－1黃芩素處理組和160μmol·L－1黃芩素處理組細胞轉移率低于20μmol·L－1黃芩素處理組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；160μmol·L－1黃芩素處理組細胞轉移率低于80μmol·L－1黃芩素處理組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。其余各劑量黃芩素處理組之間細胞轉移率比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.2 5組MDA-MB-231細胞侵襲率的比較結果見圖1。對照組和20、40、80、160μmol·L－1黃芩素處組MDA-MB-231細胞侵襲率分別為（102.19±1.35）%、（81.34±2.08）%、（76.41±4.21）%、（52.42±4.02）%、（35.33±2.11）%。20μmol·L－1黃芩素處理組和40μmol·L－1黃芩素處理組細胞侵襲率與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；80μmol·L－1黃芩素處理組和160μmol·L－1黃芩素處理組細胞侵襲率低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；160μmol·L－1黃芩素處理組細胞侵襲率低于20μmol·L－1黃芩素處理組和40μmol·L－1黃芩素處理組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；其余各劑量黃芩素處理組之間細胞侵襲率比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

圖1 5組MDA-MB-231細胞的侵襲能力（結晶紫染色，×200）Fig.1 Migration of MDA-MB-231 cells in the five groups（crystal violet staining，×200）

2.3 5組MDA-MB-231細胞中CDH1、SNAIL和vimentin蛋白相對表達量比較結果見圖2和表1。20μmol·L－1黃芩素處理組細胞中CDH1、vimentin和SNAIL蛋白相對表達量與對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。40μmol·L－1黃芩素處理組細胞中SNAIL蛋白相對表達量低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；CDH1和vimentin蛋白相對表達量與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。80μmol·L－1黃芩素處理組和160μmol·L－1黃芩素處理組細胞中CDH1蛋白相對表達量高于對照組和20μmol·L－1黃芩素處理組，vimentin和SNAIL蛋白相對表達量低于對照組和20μmol·L－1黃芩素處理組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。160μmol·L－1黃芩素處理組細胞中CDH1蛋白相對表達量高于40μmol·L－1黃芩素處理組，vimentin和SNAIL蛋白相對表達量低于40μmol·L－1黃芩素處理組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。其余各劑量黃芩素處理組細胞中CDH1、vimentin和SNAIL蛋白相對表達量比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

圖2 5組MDA-MB-231細胞中CDH1、SNAIL和vimentin蛋白的表達Fig.2 Expression of CDH1，SNAIL and vimentin protein in MDA-MB-231 cells in the five groups

表1 5組MDA-MB-231細胞中CDH1、SNAIL和vimentin蛋白相對表達量的比較Tab.1 Comparison of relative expression of CDH1，SNAIL and vimentin protein in MDA-MB-231 cells among the five groups（±s）

表1 5組MDA-MB-231細胞中CDH1、SNAIL和vimentin蛋白相對表達量的比較Tab.1 Comparison of relative expression of CDH1，SNAIL and vimentin protein in MDA-MB-231 cells among the five groups（±s）

注：與對照組比較a P＜0.05；與20μmol·L－1黃芩素處理組比較b P＜0.05；與40μmol·L－1黃芩素處理組比較c P＜0.05。

組別n CDH1 vimentin SNAIL對照組0.12±0.11 0.87±0.03 0.92±0.06 20μmol·L－1黃芩素處理組3 0.22±0.02 0.72±0.12 0.81±0.05 40μmol·L－1黃芩素處理組3 0.36±0.05 0.64±0.13 0.69±0.10a 80μmol·L－1黃芩素處理組3 0.45±0.02ab 0.42±0.05ab 0.51±0.03ab 160μmol·L－1黃芩素處理組3 0.59±0.03abc 0.28±0.08abc 0.38±0.04 abc

2.4 5組MDA-MB-231細胞中MALAT1 mRNA相對表達量比較對照組和20、40、80、160μmol·L－1黃芩素處理組細胞中MALAT1 mRNA相對表達量分別為1.01±0.02、0.81±0.03、0.72±0.05、0.48±0.05和0.39±0.04。20、40、80、160μmol·L－1黃芩素處理組細胞中MALAT1 mRNA相對表達量低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。80μmol·L－1黃芩素處理組和160μmol·L－1黃芩素處理組細胞中MALAT1 mRNA相對表達量低于20μmol·L－1黃芩素處理組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；160μmol·L－1黃芩素處理組細胞中MALAT1 mRNA相對表達量低于40μmol·L－1黃芩素處理組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；其余各劑量黃芩素處理組細胞中MALAT1 mRNA相對表達量比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.5 5組過表達pcDNA 3.1-MALAT1 MDA-MB-231細胞中MALAT1 mRNA及CDH1、SNAIL、vimentin蛋白相對表達量比較結果見圖3和表2。轉染pcDNA3.1-MALAT1過表達載體MDA-MB-231細胞和轉染空載體MDA-MB-231細胞中MALAT1 mRNA相對表達量分別為13.93±0.02、0.98±0.02，轉染pcDNA3.1-MALAT1過表達載體MDA-MB-231細胞中MALAT mRNA相對表達量高于轉染空載體MDA-MB-231細胞，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明過表達載體構建成功并在MDA-MB-231細胞中表達。轉染pcDNA3.1-MALAT1過表達載體后，20、40、80、160μmol·L－1黃芩素處理組細胞中CDH1、vimentin和SNAIL蛋白相對表達量與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。不同劑量黃芩素處理組細胞中CDH1、vimentin和SNAIL蛋白相對表達量比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

圖3 5組過表達pcDNA3.1-MALAT1 MDA-MB-231細胞中CDH1、SNAIL和vimentin蛋白的表達Fig.3 Expression of CDH1，SNAIL and vimentin protein in overexpressing pcDNA3.1-MALAT1 MDA-MB-231 cells in the five groups

表2 5組過表達載體pcDNA3.1-MALAT1 MDA-MB-231細胞中CDH1、SNAIL和vimentin蛋白相對表達量的比較Tab.2 Comparison of relative expression of CDH1，SNAIL and vimentin protein in overexpressing pcDNA3.1-MALAT1 MDA-MB-231 cells among the five groups（±s）

表2 5組過表達載體pcDNA3.1-MALAT1 MDA-MB-231細胞中CDH1、SNAIL和vimentin蛋白相對表達量的比較Tab.2 Comparison of relative expression of CDH1，SNAIL and vimentin protein in overexpressing pcDNA3.1-MALAT1 MDA-MB-231 cells among the five groups（±s）

組別n CDH1 vimentin SNAIL對照組0.18±0.12 0.82±0.04 0.89±0.04 20μmol·L－1黃芩素處理組3 0.21±0.05 0.78±0.10 0.81±0.03 40μmol·L－1黃芩素處理組3 0.28±0.04 0.84±0.11 0.79±0.12 80μmol·L－1黃芩素處理組3 0.23±0.01 0.72±0.04 0.81±0.05 160μmol·L－1黃芩素處理組3 0.24±0.02 0.76±0.09 0.83±0.03

3 討論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，全球每年約210萬女性確診罹患乳腺癌［1］。雖然目前對于乳腺癌的診斷和治療手段有了明顯進步，但是乳腺癌患者的預后一直不太理想。有研究報道，我國3%～10%的乳腺癌患者在確診時已經發(fā)生了遠處轉移，5 a生存率約為20%［10］。乳腺癌細胞的惡性侵襲、轉移是影響乳腺癌患者預后的一個重要原因［11］。關于腫瘤侵襲、轉移的研究已成為醫(yī)學領域重點關注的課題之一。研究證實，lncRNA等分子能夠通過調控多種信號轉導通路參與調控多種癌癥包括乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展以及侵襲和轉移過程［12-14］，這為乳腺癌的診斷和治療提供了新的思路或靶點。有研究發(fā)現，一些天然產物可抑制乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，例如補骨脂異黃酮、假白欖酮和黨參內酯等均表現出抑制乳腺癌細胞侵襲、轉移的作用［15-17］。但天然產物發(fā)揮抗腫瘤作用的機制，尤其是其與lncRNA調控有關的分子機制仍不明確，需要進一步研究。

黃芩素為一種從植物中提取的活性物質，具有良好的抗腫瘤活性［7，18-19］。研究表明，黃芩素可通過不同的分子生物學機制對乳腺癌細胞的增殖、侵襲及轉移發(fā)揮抑制作用［7-9］。KOH等［20］研究表明，黃芩素可以上調干擾素誘導的三角形四肽重復蛋白2并抑制MDA-MB-231細胞的腫瘤干細胞特征，從而發(fā)揮提高化學治療敏感性的作用。YAN等［21］研究發(fā)現，黃芩素能夠抑制乳腺癌細胞中磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B信號轉導通路，促進乳腺癌細胞的凋亡和自噬。EMT被認為是驅動腫瘤轉移發(fā)生的第1步。EMT直接受轉錄因子例如SNAIL的驅動［22］，而CDH1和vimentin則充當EMT效應器的角色，調控細胞骨架結構的變化。CDH1蛋白水平下降，SNAIL蛋白和vimentin蛋白水平升高被認為是細胞發(fā)生EMT的標志［23］。JADALIHA等［9］研究表明，黃芩素可通過抑制Wnt／β-catenin信號轉導通路抑制乳腺癌細胞的EMT過程。NGUYEN等［24］研究表明，黃芩素可通過下調富含半胱氨酸蛋白61和賴氨酰氧化酶樣蛋白2的表達抑制乳腺癌MDA-MB-231細胞的EMT過程。以上研究說明黃芩素具有潛在的抑癌生物活性，可對乳腺癌的侵襲、轉移起抑制作用。MALAT1是一種促癌非編碼RNA，參與多種腫瘤的生成、代謝及血管生成等［25］。MALAT1能夠通過競爭性內源RNA調控網絡參與調控多種促癌基因的表達，如MALAT1可競爭性地結合miR-26a，使靶向轉化生長因子β2（transforming growth factor beta 2，TGF-β2）的內源miR-26a減少，從而上調TGF-β2的表達水平并促進細胞的EMT過程［26］。因此，以MALAT1為靶標尋找潛在的抑制劑具有較完善的理論支持和廣闊前景。

雖然目前對黃芩素抑制乳腺癌細胞侵襲、轉移及EMT的作用的報道較多，但其具體涉及的分子生物學機制并不明確?；诖?，本研究使用梯度濃度的黃芩素處理乳腺癌MDA-MB-231細胞，結果顯示，黃芩素可抑制MDA-MB-231細胞的侵襲和轉移能力，降低EMT過程中間充質標志物vimentin和SNAIL蛋白水平，上調CDH1蛋白表達；高濃度的黃芩素抑制MDA-MB-231細胞侵襲、轉移的效果強于低濃度黃芩素，對EMT標志物蛋白水平的影響更顯著。此外，本研究結果還顯示，黃芩素可顯著抑制MDA-MB-231細胞中MALAT1 mRNA的表達水平，過表達MALAT1后可逆轉黃芩素對EMT過程的抑制作用。以上結果證實，黃芩素對MDA-MB-231細胞的侵襲轉移具有顯著的抑制作用，且該作用與黃芩素的濃度有關，即高濃度黃芩素對侵襲、轉移的抑制效果更明顯；黃芩素通過影響MDA-MB-231細胞中間充質標志物vimentin和SNAIL蛋白以及上皮標志物CDH1蛋白表達水平，參與調控EMT過程，進而發(fā)揮抑制MDA-MB-231細胞侵襲、轉移的作用，而MALAT1可逆轉黃芩素對MDA-MB-231細胞EMT過程的抑制作用。

綜上所述，黃芩素可通過抑制lncRNA MALAT1發(fā)揮抑制MDA-MB-231細胞侵襲、轉移的作用，這為探索黃芩素生物學功能潛在的分子生物學機制提供了新思路。根據MALAT1及其他lncRNA的作用特點，推測黃芩素抑制MALAT1表達后可通過競爭內源RNA調控網絡促進其相關靶向的微RNA表達，進而抑制潛在的下游促癌靶基因并抑制乳腺癌細胞的侵襲和轉移，但需要后續(xù)研究進行驗證。