王青慧,李 波,胡傳翠,聶明朝,鄭小妹

（1.海南省婦女兒童醫(yī)學(xué)中心婦產(chǎn)科，海南 海口 570206；2.海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，海南 ?？?570102）

卵巢癌是最致命的婦科惡性腫瘤，在世界范圍內(nèi)卵巢癌發(fā)病率越來(lái)越高，且大多數(shù)患者處于腫瘤晚期［1］。僅2018年就有15 000例美國(guó)患者和22 000例中國(guó)患者死于卵巢癌。盡管采用了化療藥物的治療，但大多數(shù)OC患者出現(xiàn)化療耐藥導(dǎo)致治療效果不理想［2］。紫杉醇（taxol，TAX）是一種卵巢癌治療過(guò)程中長(zhǎng)期臨床應(yīng)用的一線化療藥物之一，TAX的耐藥性是卵巢癌患者治療失敗的主要原因［3］。腫瘤免疫逃逸是指腫瘤細(xì)胞通過(guò)不同機(jī)制逃避免疫系統(tǒng)的識(shí)別和攻擊而異常增殖的現(xiàn)象，這是腫瘤細(xì)胞生存和發(fā)展的重要策略，也被證明是卵巢癌患者治療的主要障礙之一［4］。淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫應(yīng)答的重要組成部分，參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。因此，了解化療耐藥和免疫逃逸的潛在機(jī)制及識(shí)別其預(yù)后、診斷治療意義的新靶點(diǎn)至關(guān)重要。

微小RNA（microRNA，miRNA）是短鏈非編碼RNA，通過(guò)直接與mRNA靶標(biāo)的3′UTR結(jié)合，導(dǎo)致mRNA降解或翻譯抑制。miRNA在多種類型的癌癥中發(fā)揮重要作用，包括調(diào)節(jié)癌細(xì)胞分化、增殖、轉(zhuǎn)移和耐藥性，參與腫瘤進(jìn)展［5］。近年來(lái)，miR-107在乳腺癌［6］、肝細(xì)胞癌［7］和膀胱癌［8］等多種癌癥中被廣泛研究。TANG等［9］報(bào)道：miR-107在卵巢癌患者和卵巢癌細(xì)胞中呈低表達(dá)；但miR-107對(duì)卵巢癌細(xì)胞免疫逃逸調(diào)控和耐藥性的影響仍有待研究。本研究探討miR-107對(duì)卵巢癌細(xì)胞免疫逃逸及其對(duì)TAX耐藥的影響，為卵巢癌的臨床診斷和治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、主要試劑和儀器人卵巢上皮細(xì)胞HOSEpic購(gòu)自廣東省深圳市豪地華拓生物科技有限公司，人卵巢癌A 2780、OVCAR4、OVCAR5、SKOV 3和Caov-3細(xì)胞、DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基、RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基及胎牛血清均購(gòu)自南京科佰生物科技有限公司。人外周血淋巴細(xì)胞HPBL購(gòu)自武漢普諾賽生命科技有限公司，TAX（純度99%）購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司，MAP3K7、Fas和Actin抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，CCK-8試劑盒和AnnexinⅤ-FITC/PI試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物科技有限公司，蛋白檢測(cè)試劑盒和ECL化學(xué)發(fā)光底物購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher公司，pcDNA質(zhì)粒購(gòu)自上海研酶生物科技有限公司，Qiagen一步式實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）試劑盒購(gòu)自上海賓智生物科技有限公司。RT-qPCR儀CFX96購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司，BD FACSAria?Fusion流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD Biosciences公司，Synergy H 1M全功能酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)BioTek公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)和TAX耐藥細(xì)胞的構(gòu)建HOSEpic和HPBL細(xì)胞培養(yǎng)在含10%FBS和1%雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)基中，卵巢癌A 2780、OVCAR4、OVCAR5和SKOV 3細(xì)胞置于含10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基中，Caov-3細(xì)胞培養(yǎng)于含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中；培養(yǎng)基置于37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中。取生長(zhǎng)良好的SKOV 3細(xì)胞，將細(xì)胞置于0.01μmol·L－1TAX中培養(yǎng)24 h，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，若生長(zhǎng)良好則更換新鮮的培養(yǎng)基，繼續(xù)增加TAX濃度，直至細(xì)胞可以穩(wěn)定存活在終濃度為0.3μmol·L－1TAX中，即成功構(gòu)建SKOV 3的TAX耐藥細(xì)胞SKOV 3/TAX。

1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SKOV 3/TAX細(xì)胞，根據(jù)試劑盒轉(zhuǎn)染說(shuō)明書，將miR-107 mimics、pcDNA-MAP3K 7和 miR-107 mimics+pcDNAMAP3K 7分別轉(zhuǎn)染至SKOV 3/TAX細(xì)胞中，置于37℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，采用RT-qPCR或Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況。如轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中MAP3K 7 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯高于未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，則視為細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功。

1.4 SKOV 3/TAX細(xì)胞與HPBL細(xì)胞共培養(yǎng)和細(xì)胞分組轉(zhuǎn)染成功后，分別將轉(zhuǎn)染miR-107 mimics和miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7且經(jīng)4μmol·L－1處理的SKOV 3/TAX細(xì)胞和HPBL細(xì)胞在37℃、5%CO2條件下共培養(yǎng)24 h。293T、SKOV 3/TAX和HPBL細(xì)胞分組：293T細(xì)胞分為miR-NC組（轉(zhuǎn)染miR-NC）和miR-107 mimics組（轉(zhuǎn)染miR-107 mimics）；SKOV 3/TAX細(xì)胞分為空白對(duì)照組、TAX（給予4.0μmol·L－1TAX）組、TAX+miR-107 mimics（給予4.0μmol·L－1TAX且轉(zhuǎn)染miR-107 mimics） 組和 TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K 7（給予4.0μmol·L－1TAX且轉(zhuǎn)染miR-107 mimics和pcDNA-MAP3K 7）組；HPBL細(xì)胞分為HPBL組、HPBL+SKOV 3/TAX（HPBL與SKOV 3/TAX細(xì)胞共培養(yǎng)）組、HPBL+SKOV 3/TAX+TAX（HPBL與4.0μmol·L－1TAX處理的SKOV 3/TAX細(xì)胞共培養(yǎng)）組、HPBL+SKOV 3/TAX+TAX+miR-107 mimics（HPBL與4.0μmol·L－1TAX處理且轉(zhuǎn)染miR-107 mimics的SKOV 3/TAX細(xì)胞共培養(yǎng)）組和HPBL+SKOV 3/TAX+TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7（HPBL與4.0μmol·L－1TAX處理且轉(zhuǎn)染miR-107 mimics和pcDNA-MAP3K 7的SKOV 3/TAX細(xì)胞共培養(yǎng)）組。

1.5 RT-qPCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中miR-107表達(dá)水平采用TRIzol試劑從各組細(xì)胞中分離出總RNA，采用Qiagen一步式RT-qPCR試劑盒將每個(gè)樣品1μg總RNA合成cDNA。根據(jù)實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒說(shuō)明書，將cDNA、SYBR-Green Mix和引物混合，進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)。以U6作為內(nèi)參，采用2－ΔΔCt法計(jì)算各組細(xì)胞中miR-107表達(dá)水平。引物序列：miR-107上游引物5′-GCCGAATTCAAAGCGAGATTCCATCAGCA-3′，miR-107下 游 引 物5′-GCCGGATCCTGTCAACCCAGAACTCAAAGG-3′；U 6上 游 引 物5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，U 6下 游 引 物：5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。采用2－ΔΔCt法計(jì)算各組細(xì)胞中miR-107表達(dá)水平。

1.6 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-107和MAP3K 7的靶向關(guān)系采用PCR擴(kuò)增MAP3K 7與miR-107結(jié)合序列的3′-UTR，同時(shí)突變MAP3K7序列，獲得突變型MAP3K7。將MAP3K7-WT和MAP3K 7-MUT分別插入含螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因的pGL 4載體中。按照每孔5×105個(gè)細(xì)胞的密度，將HEK293細(xì)胞置于24孔板中。將100 ng pGL 4-MAP3K7-WT 或 pGL 4-MAP3K7-MUT、100 nmol·L－1的miR-107 mimics（miR-107 mimics組）或陰性對(duì)照（miR-NC組）及脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)染入HEK293細(xì)胞。培養(yǎng)細(xì)胞48 h后，采用雙熒光素酶分析系統(tǒng)計(jì)算熒光素酶活性。海腎熒光素酶活性作為內(nèi)參。熒光素酶活性=螢火蟲熒光素酶活性/海腎熒光素酶活性。

1.7 Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞中MAP3K 7和FAS蛋白表達(dá)水平采用RIPA裂解緩沖液在4℃下裂解細(xì)胞中總蛋白，并以12 000 r·min－1離心。采用BCA蛋白檢測(cè)試劑盒檢測(cè)收集的上清液中蛋白濃度。采用10%SDS-PAGE分離總蛋白。SDS-PAGE后分離的蛋白被轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，并封閉于5%無(wú)脂牛奶稀釋的TBST緩沖液中。采用抗MAP3K7（1∶2 000）、β-actin（1∶2 000）的主要抗體在4℃孵育過(guò)夜。第2天，將膜與相應(yīng)二抗（1∶1 000）孵育2 h。ECL底物增強(qiáng)蛋白印跡信號(hào)，以β-actin作為內(nèi)參，采用Image J軟體分析條帶灰度值，計(jì)算目的蛋白表達(dá)水平。目的蛋白表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參β-actin條帶灰度值。

1.8 CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞存活率將SKOV 3/TAX細(xì)胞以每孔2 000個(gè)的密度接種于96孔板中。分別向每孔中添加0、1、2、3、4和5μmol·L－1TAX，在37℃、5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)48 h。每孔加入10μL CCK-8溶液混勻靜置30 min，采用酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm處吸光度（A）值，并計(jì)算半數(shù)抑制濃度（half inhibitory concentration，IC50）。

1.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率將轉(zhuǎn)染后的各組SKOV 3/TAX細(xì)胞及與SKOV 3/TAX細(xì)胞共培養(yǎng)的HPBL細(xì)胞按每板3×105個(gè)細(xì)胞的密度接種于24孔板中。培養(yǎng)24 h后，收集細(xì)胞，采用PBS沖洗，并重新懸浮于0.5 mL結(jié)合緩沖液中。然后將細(xì)胞與AnnexinⅤ-FITC和PI染液按1∶2的體積比避光孵育20 min。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。細(xì)胞凋亡率=（凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用GraphPad Prism 7.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并繪制圖表。各組細(xì)胞中miR-107表達(dá)水平，細(xì)胞中MAP3K7和FAS蛋白表達(dá)水平，細(xì)胞存活率及細(xì)胞凋亡率均符合正態(tài)分布，以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNKq檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組細(xì)胞中miR-107表達(dá)水平與人卵巢上皮細(xì)胞HOSEpic（1.01±0.09）比較，人卵巢癌細(xì) 胞A 2780（0.62±0.10）、OVCAR4（0.80±0.05）、 OVCAR5（0.64±0.14） 和 SKOV 3（0.35±0.07）中miR-107表 達(dá) 水 平 降 低（P＜0.01）；SKOV 3細(xì)胞中miR-107表達(dá)水平低于其他細(xì)胞（P＜0.05），且TAX耐藥細(xì)胞SKOV 3/TAX細(xì)胞中miR-107表達(dá)水平（0.21±0.05）低于SKOV 3細(xì)胞（P＜0.05）。

2.2 miR-107與MAP3K7的靶向關(guān)系StarBase數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)：MAP3K 7的3′-UTR與miR-107存在靶向結(jié)合位點(diǎn)（圖1）。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)表明：與miR-NC組比較，過(guò)表達(dá)miR-107組野生型MAP3K7的熒光素酶活性降低（P＜0.01），見(jiàn)圖2。Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示：過(guò)表達(dá)miR-107組細(xì)胞中MAP3K7蛋白表達(dá)水平（0.34±0.11）明顯低于miR-NC組（1.02±0.11）（P＜0.01）。見(jiàn)圖3。

圖1 Star Base數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)miR-107和MAP3K 7的靶向結(jié)合位點(diǎn)Fig.1 Targeted binding sites of miR-107 and MAP3K7 predicted by Star Base database

圖2 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)2組野生型和突變型MAP3K 7的熒光素酶活性Fig.2 Luciferase activities of wild-type and mutationtype of MAP3K 7 in two groups detected by dual luciferase reporter gene assay

圖3 Western blotting法檢測(cè)2組細(xì)胞中MAP3K 7蛋白表達(dá)電泳圖Fig.3 Electrophoregram of expressions of MAP3K7 protein in cells in two groups detected by Western blotting method

2.3 過(guò)表達(dá)miR-107后各組SKOV 3/TAX細(xì)胞存活率和細(xì)胞中miR-107表達(dá)水平0、1、2、3、4和5μmol·L－1TAX處理SKOV 3/TAX細(xì)胞后，CCK-8法檢測(cè)各組SKOV 3/TAX細(xì)胞存活率結(jié)果顯示：隨著TAX濃度的增加，SKOV 3/TAX細(xì)胞存活 率 降 低（P＜0.05），且IC50為（4.21±0.37）μmol·L－1，故將4.0μmol·L－1TAX作為藥物處理濃度，見(jiàn)表1。RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組比較，TAX組SKOV 3/TAX細(xì)胞中miR-107表 達(dá) 水 平 升 高（P＜0.01），miR-107 mimics+TAX組SKOV 3/TAX細(xì)胞中miR-107表達(dá)水平較TAX組升高（P＜0.05），說(shuō)明miR-107 mimics轉(zhuǎn)染成功。見(jiàn)表2。

表1 各組SKOV 3/TAX細(xì)胞存活率Tab.1 Survival rate of SKOV 3/TAX cells in various groups(n=3，±s，η/%）

表1 各組SKOV 3/TAX細(xì)胞存活率Tab.1 Survival rate of SKOV 3/TAX cells in various groups(n=3，±s，η/%）

表2 各組SKOV 3/TAX細(xì)胞中miR-107表達(dá)水平Tab.2 Expression levels of miR-107 in SKOV 3/TAX cells in various groups

2.4 各組SKOV 3/TAX細(xì)胞中MAP3K 3和FAS蛋白表達(dá)水平與空白對(duì)照組比較，TAX組SKOV 3/TAX細(xì)胞中MAP3K7和FAS蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.01）；與TAX組比較，TAX+miR-107 mimics SKOV 3/TAX細(xì)胞中MAP3K7和FAS蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05或P＜0.01）；與TAX+miR-107 mimics組比較，TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7組SKOV 3/TAX細(xì)胞中MAP3K 7和FAS蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05或P＜0.01）。見(jiàn)圖4和表3。

表3 各組SKOV 3/TAX細(xì)胞中MAP3K 7和FAS蛋白表達(dá)水平Tab.3 Expression levels of MAP3K7 and FAS proteins in SKOV 3/TAX cells in various groups (n=3，±s）

表3 各組SKOV 3/TAX細(xì)胞中MAP3K 7和FAS蛋白表達(dá)水平Tab.3 Expression levels of MAP3K7 and FAS proteins in SKOV 3/TAX cells in various groups (n=3，±s）

**P＜0.01 compared with blank control group；△P＜0.05，△△P＜0.01 compared with TAX group；#P＜0.05 compared with TAX+miR-107 mimics group.

Group Expression level of FAS Expression level of MAP3K7 1.01±0.12 0.56±0.10*0.25±0.07△0.68±0.05#1.00±0.07 0.74±0.08*0.30±0.06△△0.59±0.10#Blank control TAX TAX+miR-107 mimics TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K 7

圖4 Western blotting法檢測(cè)各組SKOV 3/TAX細(xì)胞中MAP3K 7和FAS蛋白表達(dá)電泳圖Fig.4 Electrophoregram of expressions of MAP3K 7 and FAS proteins in SKOV 3/TAX cells in various groups detected by Western blotting method

2.5 各組HPBL細(xì)胞中FAS蛋白表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率采用Western blotting和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：與HPBL+SKOV 3/TAX組比較，HPBL+SKOV 3/TAX+TAX組HPBL細(xì)胞中FAS蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05），細(xì)胞凋亡率降低（P＜0.05）；與HPBL+SKOV 3/TAX+TAX組比較，HPBL+SKOV 3/TAX+TAX+miR-107 mimics組HPBL細(xì)胞中FAS蛋白表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率降低 （P＜0.05）；與 HPBL+SKOV 3/TAX+TAX+miR-107 mimics組比較，HPBL+SKOV 3/TAX+TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7組HPBL細(xì)胞中FAS蛋白表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率降低（P＜0.01）。見(jiàn)圖5、圖6和表4。

表4 各組HPBL細(xì)胞中FAS蛋白表達(dá)水平和HPBL細(xì)胞凋亡率Tab.4 Expression level of FAS protein of HPBL cells and apoptotic rates of HPBL cells in various groups (n=3，±s）

表4 各組HPBL細(xì)胞中FAS蛋白表達(dá)水平和HPBL細(xì)胞凋亡率Tab.4 Expression level of FAS protein of HPBL cells and apoptotic rates of HPBL cells in various groups (n=3，±s）

*P＜0.01 compared with HPBL group；△P＜0.05，△△P＜0.01 compared with HPBL+SKOV 3/T AX group；#P＜0.05 compared with HPBL+SKOV 3/TAX+TAX group；○P＜0.05 compared with HPBL+SKOV 3/TAX+TAX+miR-107 mimics group.

圖5 Western blotting法檢測(cè)各組HPBL細(xì)胞中FAS蛋白表達(dá)電泳圖Fig.5 Electrophoregram of expressions FAS protein in HPBL cells in various groups detected by Western blotting method

圖6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組HPBL細(xì)胞凋亡率Fig.6 Apoptotic rates of HPBL cells in various groups detected by flow cytometry

2.6 各組SKOV 3/TAX細(xì)胞存活率和細(xì)胞凋亡率與空白對(duì)照組比較，TAX組SKOV 3/TAX細(xì)胞存活率降低（P＜0.05）；TAX+miR-107 mimics組SKOV 3/TAX細(xì)胞存活率明顯低于TAX組（P＜0.05）。與TAX+miR-107 mimics組 比 較，TAX+miR-107mimics+pcDNA-MAP3K 7 組SKOV 3/TAX細(xì)胞存活率明顯升高（P＜0.05）。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：TAX組SKOV 3/TAX細(xì)胞凋亡率高于空白對(duì)照組（P＜0.05），TAX+miR-107組SKOV 3/TAX細(xì)胞凋亡率較TAX組明顯 升 高（P＜0.05），TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7組細(xì)胞凋亡率明顯低于TAX+miR-107 mimics組（P＜0.05）。見(jiàn)圖7和表5。

表5 各組SKOV 3/TAX細(xì)胞存活率和細(xì)胞凋亡率Tab.5 Survivals rates and apoptotic rates of SKOV 3/TAX cells in various groups (n=3，±s，η/%）

表5 各組SKOV 3/TAX細(xì)胞存活率和細(xì)胞凋亡率Tab.5 Survivals rates and apoptotic rates of SKOV 3/TAX cells in various groups (n=3，±s，η/%）

*P＜0.05，**P＜0.01 compared with blank control group；△P＜0.05 compared with TAX group；#P＜0.05 compared with TAX+miR-107 mimics group.

Apoptotic rate 11.01±2.17 17.43±1.68**26.42±3.03△20.51±0.95#Group Blank control TAX TAX+miR-107 mimics TAX+miR-107 mimics+pc DNA-MAP3K 7 Survival rate 1.95±0.22 1.56±0.08*1.07±0.17△1.47±0.12#

圖7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組SKOV 3/TAX細(xì)胞凋亡率Fig.7 Apoptotic rates of SKOV 3/TAX cells in various groups detected by flow cytometry

3 討 論

卵巢癌是婦科腫瘤死亡的最常見(jiàn)原因，只有不到40%的女性在確診后存活5年以上，這主要是由于復(fù)發(fā)性化學(xué)耐藥疾病的發(fā)展，一旦復(fù)發(fā)，尚不能有效治療患者［10］。TAX是治療卵巢癌的一線化療藥物之一，化療耐藥是其臨床治療成功的主要限制因素［3］，迫切需要找到與化療抗性和疾病復(fù)發(fā)相關(guān)的治療靶標(biāo)。腫瘤免疫治療是一種有前途的治療方法，其特點(diǎn)是激活免疫系統(tǒng)誘導(dǎo)腫瘤免疫監(jiān)視或逆轉(zhuǎn)腫瘤的免疫逃逸。FAS作為腫瘤壞死因子家族的主要成員，在細(xì)胞凋亡中起重要作用。FASL是FAS的天然配體，F(xiàn)AS/FASL結(jié)合是凋亡信號(hào)的傳導(dǎo)途徑，在淋巴細(xì)胞中可通過(guò)該途徑殺傷表達(dá)FAS的靶細(xì)胞［11］。研究［12］顯示：正常情況下，F(xiàn)AS系統(tǒng)可抑制毒性淋巴細(xì)胞的功能和過(guò)度激活的免疫反應(yīng)，當(dāng)FAS或FASL表達(dá)失調(diào)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)體內(nèi)淋巴細(xì)胞的過(guò)度聚集和自身免疫現(xiàn)象，由此說(shuō)明FAS系統(tǒng)在集體免疫平衡中具有關(guān)鍵作用。PARDOLL等［13］報(bào)道：腫瘤細(xì)胞耐藥性的產(chǎn)生與癌細(xì)胞免疫逃逸密切相關(guān)，因此，抑制癌細(xì)胞免疫逃逸可能對(duì)減少腫瘤耐藥性的產(chǎn)生至關(guān)重要。

miRNA可通過(guò)抑制翻譯和其他手段調(diào)節(jié)基因表達(dá)。有研究［14-15］顯示：miRNA在腫瘤細(xì)胞中的異常表達(dá)與癌細(xì)胞免疫逃逸和腫瘤耐藥性的產(chǎn)生密切相關(guān)。例如FUJITA等［16］報(bào)道：在肺癌細(xì)胞中，miR-197通過(guò)CKS1B/STAT 3促進(jìn)PDL 1的表達(dá)，促進(jìn)肺癌細(xì)胞免疫逃逸和順鉑耐藥性；NEVIANI等［17］證實(shí)：自然殺傷細(xì)胞來(lái)源的外泌體miR-186可抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤的生長(zhǎng)和免疫逃逸機(jī)制。近年來(lái)，miR-107在乳腺癌［18］、胃癌［19］和胰腺癌［20］等多種癌癥的發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮重要作用，可能參與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的調(diào)控。在結(jié)腸癌中，過(guò)表達(dá)miR-107靶向下調(diào)TFR1，抑制癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移［21］；miR-107在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，通過(guò)抑制STK33/ERK信號(hào)通路的激活，抑制非小細(xì)胞肺癌的惡行生物學(xué)行為［22］。本研究結(jié)果顯示：miR-107在SKOV 3/TAX細(xì)胞中表達(dá)降低，這與TANG等［23］的報(bào)道一致。此外，本研究結(jié)果證實(shí)：過(guò)表達(dá)miR-107可抑制HPBL細(xì)胞免疫逃逸，抑制SKOV 3/TAX細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，緩解卵巢癌患者HPBL細(xì)胞對(duì)TAX耐藥性。

MAP3K7是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，其調(diào)節(jié)多種細(xì)胞信號(hào)通路，是許多與癌細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)細(xì)胞通路的重要調(diào)控因子［24］。例如過(guò)表達(dá)miR-143靶向下調(diào)MAP3K7的表達(dá)，抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)［25］；MAP3K 7在胃癌細(xì)胞中高表達(dá)，可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的 異 常 增 殖［26］。ZEHEVI等［27］研 究 顯 示：MAP3K 7在黑色素瘤中表達(dá)升高，miR-377通過(guò)靶向下調(diào)MAP3K7，阻斷NF-κB信號(hào)通路的激活，抑制黑色素瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。JIN等［28］研究顯示：MAP3K7參與調(diào)控腫瘤的免疫作用。本研究結(jié)果證實(shí)：MAP3K7是miR-107的靶基因，過(guò)表達(dá)miR-107可抑制與SKOV 3/TAX細(xì)胞共培養(yǎng)的HPBL細(xì)胞中FAS的表達(dá)和細(xì)胞凋亡，抑制SKOV 3/TAX細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。過(guò)表達(dá)MAP3K7可逆轉(zhuǎn)過(guò)表達(dá)miR-107對(duì)HPBL細(xì)胞中FAS的表達(dá)和細(xì)胞凋亡及對(duì)SKOV 3/TAX細(xì)胞增殖和凋亡的作用。

綜上所述，miR-107低表達(dá)與卵巢癌細(xì)胞TAX耐藥性有關(guān)聯(lián)，過(guò)表達(dá)miR-107通過(guò)靶向下調(diào)MAP3K 7的表達(dá)，抑制SKOV 3/TAX細(xì)胞免疫逃逸，緩解SKOV 3/TAX細(xì)胞對(duì)TAX的耐藥性。