周 帥 陳鑫偉 鄭東方 韓 彬 閆延梅

（商丘市農(nóng)林科學(xué)院，河南商丘 476000）

羊肚菌Morchella，菌蓋表面凸凹似網(wǎng)狀，像花生外殼又像羊肚狀，故稱羊肚菌，是世界上珍貴的稀有食用菌之一。羊肚菌味道鮮美，營養(yǎng)豐富，含有8種維生素和18種氨基酸[1]，具有益腸胃、助消化、化痰理氣、補(bǔ)腎壯陽、健腦提神、預(yù)防感冒、增強(qiáng)人體免疫力等功效。近十年來我國人工栽培羊肚菌發(fā)展較快，已實現(xiàn)大面積季節(jié)性人工栽培羊肚菌，且產(chǎn)量和質(zhì)量逐步提高。但人工栽培羊肚菌技術(shù)仍有待提高，產(chǎn)量易受氣候、菌種、管理等多種因素影響，穩(wěn)定性差。

羊肚菌屬子囊菌，菌種退化速度快，需要頻繁提純復(fù)壯[2]。菌種質(zhì)量直接影響羊肚菌的質(zhì)量和產(chǎn)量，關(guān)系到菇農(nóng)的切身利益。因此，培育優(yōu)良的羊肚菌菌種，對生產(chǎn)具有重要的意義。為此，筆者開展羊肚菌干子實體與新鮮子實體組織分離培養(yǎng)菌種比較試驗，以期為羊肚菌菌種生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）羊肚菌子實體：六妹羊肚菌菌株。新鮮羊肚菌子實體選自栽培田，菌肉肥厚、大小適中、顏色正常、無病蟲害、六至八分熟（一般含水量在90%左右）；干羊肚菌子實體：新鮮子實體在陽光下晾曬至含水量60%~70%或經(jīng)晾曬后貯藏但未發(fā)潮、霉變，含水量60%~70%。（2）其他試驗材料和工具包括：鑷子、剪刀、裝有PDA培養(yǎng)基的試管、封口膜、75%酒精、酒精燈和無菌工作臺等。

1.2 試驗方法

1.2.1 制備PDA培養(yǎng)基

（1）以制作1 000 mL培養(yǎng)基為例：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，硫酸鎂2 g，瓊脂20 g，蛋白胨0.5 g，牛肉膏0.5 g，加水1 000 mL，pH自然。

（2）培養(yǎng)基制作方法

馬鈴薯去皮、切塊，置1 000 mL水中文火煮30 min左右，用紗布過濾取汁。將瓊脂、葡萄糖、硫酸鎂、蛋白胨、牛肉膏添加到馬鈴薯濾汁中，加熱至瓊脂等全部溶化，用開水補(bǔ)足水。培養(yǎng)基分裝試管，裝至試管的1/3高度（注意培養(yǎng)基不沾到試管口，以免沾濕棉塞，易染雜菌），用棉花封住試管口。裝好培養(yǎng)基的試管，9管一捆用牛皮紙或報紙包裹，用繩子捆綁好，放入高壓鍋內(nèi)滅菌?？刂聘邏哄仠囟葹?20~125℃，滅菌30 min。滅菌結(jié)束待壓力表回0后，取出試管，擺斜面，傾斜度以培養(yǎng)基離試管口1/3試管長為宜。培養(yǎng)基冷卻凝固后，取一些試管放入25~30℃恒溫箱中5 d，確認(rèn)無雜菌，才能用于培養(yǎng)菌種。

1.2.2 組織分離及培養(yǎng)方法

無菌條件分離組織，具體方法：先用酒精棉球?qū)⒆幽夜?、蓋擦拭干凈（注意及時更換酒精棉球），然后同75%酒精、裝有PDA培養(yǎng)基試管、接種用工具等放入超凈工作臺。

用75%的酒精消毒雙手，將鑷子、剪刀等接種用具用酒精消毒，再用酒精棉擦拭，酒精燈外焰上灼燒一下，剪開羊肚菌，剪取菌柄與菌蓋交接處菌柄部組織塊2~5 mm，用鑷子夾住，放入試管，塞好棉塞，于20~24℃恒溫箱避光培養(yǎng)。

每個處理3個重復(fù)，每個重復(fù)10支試管。

1.2.3 考察內(nèi)容

萌發(fā)率[3]/%=接入羊肚菌組織試管總數(shù)/組織萌發(fā)試管數(shù)×100

平均萌發(fā)時間=試管萌發(fā)總天數(shù)/萌發(fā)試管數(shù)量

菌絲長滿試管平均時間=試管長滿總時間/長滿試管數(shù)量

平均產(chǎn)核時間=試管開始產(chǎn)核總時間/產(chǎn)核試管數(shù)量

2 結(jié)果與分析

由表1可知，兩處理萌發(fā)率、菌絲平均萌發(fā)時間、平均長滿試管時間差異不大，但晾曬后子實體組織分離培養(yǎng)的菌絲生長濃密，長勢旺盛、生長速度較快；新鮮羊肚菌子實體分離培養(yǎng)菌絲體生長較密，但生長速度相對較慢。由表2可知，晾曬后羊肚菌子實體組織分離培養(yǎng)母種，菌核數(shù)量多；鮮子實體分離培養(yǎng)母種，菌核數(shù)量較少，出現(xiàn)菌核時間較晚。

表1 兩種分離組織母種菌絲體長勢對比

表2 兩種分離組織培養(yǎng)母種培養(yǎng)基上菌核對比

3 小結(jié)

試驗結(jié)果表明，羊肚菌組織分離培養(yǎng)母種可以選用稍晾曬后的子實體（含水量60%~70%），且較鮮子實體組織萌發(fā)率高，菌絲生長濃密，長勢旺盛，生長速度較快。綜合試驗結(jié)果：晾曬后子實體組織分離培養(yǎng)出的母種均略優(yōu)于鮮子實體組織，今后有待進(jìn)行生產(chǎn)應(yīng)用試驗。