馬超， 李琪， 陶梁春， 呂惠子

(延邊大學(xué) 藥學(xué)院， 吉林 延吉 133002)

合苞橐吾(Ligulariaschmidtii(Maxim.) Makino)為菊科橐吾屬多年生草本植物[1].研究顯示，橐吾屬植物的根、莖、葉、花具有散寒、潤(rùn)肺、解毒清熱、活血化瘀、降血糖等功效[2-6]，常用于治療支氣管炎、咳喘、肺結(jié)核、咯血等癥[7-9].查閱文獻(xiàn)顯示，目前針對(duì)合苞橐吾的研究大多是針對(duì)其化學(xué)成分及活性成分進(jìn)行研究的[10-16]，而對(duì)其生藥學(xué)方面的研究尚不完善.為此本文對(duì)合苞橐吾的性狀、組織結(jié)構(gòu)等進(jìn)行了研究，以為合苞橐吾質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù).

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

BDS400倒置生物顯微鏡，重慶奧特光學(xué)儀器有限公司； KQ5200型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司； JYD-325B生物組織石蠟切片機(jī)，金華市宇典醫(yī)療器械廠； FA2004電子天平，上海良平儀器儀表有限公司； RRH-100萬(wàn)能高速粉碎機(jī)，上海緣沃工貿(mào)有限公司.

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

硅膠GF254薄層板，煙臺(tái)江友硅膠開發(fā)有限公司；水合氯醛、無(wú)水乙醇、95%乙醇、二甲苯、石油醚(沸程為60～90 ℃)、乙酸乙酯、濃硫酸(均為分析純)，遼寧泉瑞試劑有限公司；石蠟(批號(hào)為20130415)，上海華靈康復(fù)器械廠；番紅染料(CAS號(hào)為477-73-6，干燥失重≤5.0%)、固綠染料(CAS號(hào)為2353-45-9，干燥失重≤8.0%)，上海化學(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站；中性樹膠，上海標(biāo)本模型廠；中藥篩(380 μm)，杭州同祺儀器有限公司.

實(shí)驗(yàn)用藥材均采自延邊朝鮮族自治州的不同地區(qū)，并由延邊大學(xué)藥學(xué)院樸光春教授鑒定，標(biāo)本號(hào)為ybyx2019053001-10Ly.合苞橐吾的采集信息見表1.

表1 采集的合苞橐吾的信息

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

由于中國(guó)食品藥品檢定研究院目前尚無(wú)合苞橐吾對(duì)照藥材，故選取經(jīng)專家鑒定的樣品作為對(duì)照藥材進(jìn)行薄層色譜研究.對(duì)照藥材由通化師范學(xué)院于俊林教授提供.

2.1 藥材性狀

對(duì)采集的10批合苞橐吾的性狀(見圖1)進(jìn)行觀察顯示：葉呈黃綠色，葉片大多卷縮，質(zhì)脆易破碎；葉表面粗糙，葉脈羽狀；葉長(zhǎng)15～30 cm，寬3～15 cm，基部邊緣光滑略呈波浪狀；葉柄呈類三角形，斷面白色或淡黃棕色.合苞橐吾的上述性狀與文獻(xiàn)[3]的表述一致.

2.2 合苞橐吾的顯微鑒別

2.2.1葉片上、下表皮的顯微特征

顯微鏡下的葉片上、下表皮片(表面制片法[17]制作)如圖2所示.由圖可以看出：上、下表皮細(xì)胞形狀均為不規(guī)則形，多波狀彎曲；上下表皮均有氣孔分布(下表皮相對(duì)較多)，氣孔類型為不定式；副衛(wèi)細(xì)胞為3～5個(gè)；下表皮側(cè)脈細(xì)胞呈類長(zhǎng)方形,排列緊密.

圖1 合苞橐吾的性狀

圖2 葉片上、下表皮顯微特征(放大倍數(shù)為×10)

2.2.2葉片和葉柄橫切面的顯微特征

取新鮮幼嫩葉片和葉柄，用石蠟制片法[17]切片，用番紅-固綠染色法染色，然后在顯微鏡下觀察葉片和葉柄橫切面的顯微特征.

1)葉片橫切面的顯微特征.圖3為合苞橐吾葉片橫切面的顯微特征圖.由圖可以看出：葉片的上、下各有1層表皮細(xì)胞，且排列整齊；韌皮部細(xì)胞排列整齊；木質(zhì)部導(dǎo)管呈圓形；葉肉組織分化為柵欄組織和海綿組織，其中柵欄組織為1～2列，海綿組織為3～5列，且均排列疏松.

圖3 葉片橫切面特征(放大倍數(shù)為×40)

2)葉柄橫切面的顯微特征.圖4為合苞橐吾葉柄橫切面的顯微特征圖.由圖可以看出：表皮細(xì)胞為1～2層；皮層細(xì)胞為3～6層；有多個(gè)維管束，大小不一，呈類三角形排列；髓部較發(fā)達(dá)；韌皮部細(xì)胞排列緊密；木質(zhì)部呈半圓形.

圖4 葉柄橫切面特征(放大倍數(shù)為×40)

2.2.3合苞橐吾葉粉末的鑒別

取干燥葉片研磨成粉末，過中藥篩(380 μm)，水合氯醛裝片，然后在顯微鏡下觀察粉末的特征[17].

圖5為合苞橐吾葉粉末的特征圖.由圖可以看出：木栓細(xì)胞(1)較多，且細(xì)胞壁增厚；纖維束(2)眾多；氣孔(5)類型為不定式；導(dǎo)管主要為螺紋和網(wǎng)紋導(dǎo)管(8)；有少量腺鱗(7)、非腺毛(3)、淀粉粒(6)及黃色油狀物(4).

圖5 葉片粉末的特征圖(放大倍數(shù)為×40)

2.3 合苞橐吾的薄層色譜

依據(jù)2020版《中華人民共和國(guó)藥典：四部》中的通則0502項(xiàng)[18]對(duì)合苞橐吾的薄層色譜進(jìn)行研究.

2.3.1供試品溶液的制備

取10批合苞橐吾藥材粉末各0.2 g，然后分別加入石油醚20 mL；超聲提取20 min，過濾；濾液濃縮后備用.

2.3.2對(duì)照藥材溶液的制備

取合苞橐吾對(duì)照藥材粉末0.2 g， 按2.3.1方法制備對(duì)照藥材溶液，備用.

2.3.3點(diǎn)樣、展開及顯色

用毛細(xì)管分別吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上.以體積比為10∶3的石油醚-乙酸乙酯作為展開劑展開，再用體積分?jǐn)?shù)為10%的硫酸-乙醇溶液作為顯色劑進(jìn)行顯色.

圖6為合苞橐吾薄層色譜圖.由圖可以看出： 在供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯示的是相同顏色的斑點(diǎn)，且重復(fù)性良好，未出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象.圖中4個(gè)點(diǎn)的Rf值分別為： 0.34(①)、 0.56(②)、 0.62(③)、 0.96(④).

圖6 合苞橐吾的薄層色譜圖

3 結(jié)論

合苞橐吾的生藥學(xué)特性研究顯示，其主要鑒別特征有：葉呈黃綠色，易破碎；葉柄呈類三角形，斷面白色或淡黃棕色；氣孔為不定式，纖維較多；在10批供試品的薄層色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯示的是相同顏色的斑點(diǎn).本文研究結(jié)果可為合苞橐吾的鑒定和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù).