徐樂樂， 樸燕， 尹雄杰， 張昌浩， 金莉莉

(延邊大學 藥學院， 吉林 延吉 133002)

0 引言

長白魚鱗云杉(Piceajezoensisvar.komarovii)為松科云杉屬喬木，又稱長白魚鱗松，始載于《中華本草》，在《長白山植物藥志》等近代書籍中也有記載.長白魚鱗云杉主要分布在長白山地區(qū)和朝鮮半島等地(海拔1 100～1 800 m的地帶)，其葉、皮具有止咳、化痰、平喘等功效[1-5].研究表明，長白魚鱗云杉含有揮發(fā)油類、黃酮類、脂肪酸類和樹脂酸類等多種化學成分[6]，而關于其揮發(fā)性成分的研究尚未見報道.目前，常用的揮發(fā)性成分的提取方法有水蒸氣蒸餾法、有機溶劑提取法、壓榨法以及超臨界流體提取法等[7]，其中水蒸氣蒸餾法因具有操作簡單、成本低以及對環(huán)境污染小等優(yōu)點，所以在中藥揮發(fā)性成分的提取中被廣泛應用.因此本文使用水蒸氣蒸餾法提取長白魚鱗云杉中的揮發(fā)性成分，并利用氣相色譜-質譜聯(lián)用(GC-MS)技術對其揮發(fā)性成分進行檢測與分析[8-9]，以為長白魚鱗云杉的進一步研究提供參考.

1 材料與儀器

1.1 試劑與藥材

乙醚(色譜純)，Merck公司；無水硫酸鈉(分析純)，天津市科密歐化學試劑有限公司；超純水自制;長白魚鱗云杉采自吉林省長白山區(qū),經延邊大學藥學院呂惠子教授鑒定.

1.2 儀器

氣相色譜-質譜聯(lián)用儀(6890N-5937)，安捷倫科技有限公司；低溫冷卻液循環(huán)泵，上海豫康科教儀器設備有限公司；恒溫電熱套，天津市泰斯特儀器有限公司；微型注射器(100 μL)，Hamilton公司；超純水機(Milli-Q系列)，Millipore公司；分析天平，上海精天電子儀器有限公司；微孔濾膜(0.45 μm)，天津市科億隆實驗設備有限公司.

2 實驗方法

2.1 樣品的提取

將干燥且經過除雜處理的長白魚鱗云杉的莖粉碎后在室溫條件下用超純水浸泡24 h，待用.樣品提取按照2020年版《中華人民共和國藥典：四部》中的通則2204項“甲法”操作[10]并略作修改.

稱取100 g浸泡后的長白魚鱗云杉粉末置于1 000 mL圓底燒瓶中，然后加入400 mL蒸餾水；緩緩加熱至微沸，然后在100 ℃下加熱回流提取約5 h (當肉眼觀察到收集瓶中的揮發(fā)油成分不再增加時停止加熱).在收集到的揮發(fā)油中加入乙醚進行萃取，再經無水硫酸鈉干燥后離心；取上清液，用0.45 μm微孔濾膜過濾即得揮發(fā)油供試品溶液，備用[11-12].揮發(fā)性成分提取率的計算公式為A=(B/C)×100%， 其中A為揮發(fā)性成分提取率，B為總揮發(fā)油質量，C為長白魚鱗云杉全草質量.

2.2 GC-MS的分析條件

氣相色譜條件：HP-5MS石英毛細管柱(0.25 μm×0.25 mm×30 m)，載氣為氦氣，載氣流速為1 mL·min-1，進樣口溫度為280 ℃，分流進樣比為50∶1(體積比)，進樣量為1 μL.程序升溫過程為：保持初始溫度(40 ℃) 2 min，再以10 ℃/min的升溫速率升溫至300 ℃，并保持15 min.

質譜條件： EI離子源，電子能量為70 eV，離子源溫度為230 ℃，四級桿溫度為150 ℃，倍增管電壓為1.6 kV， 掃描質量范圍為m/z 35～550.

3 結果與分析

利用GC-MS聯(lián)用技術在長白魚鱗云杉中共檢測出76種揮發(fā)性成分.對檢測出的各成分進行質譜掃描后將所得的質譜圖(圖1)與NIST質譜庫對照，從中共鑒定出43個化合物(占總揮發(fā)性成分的94.23%).從圖1中可以看出，長白魚鱗云杉中主要的揮發(fā)性成分是多種脂肪族類化合物，包括長鏈烷烴、長鏈烷酸以及長鏈烷酸酯等，且含量較高.此外，從圖1中還可以看出，萜類化合物的保留時間相對較長，這可能是萜類化合物的分子量、相對極性較大以及沸點較高所致.采用峰面積歸一化法計算出的各化合物在揮發(fā)性成分中的相對百分含量見表1.由表1可知，百分含量高于3%的揮發(fā)性成分由高到低分別為： butyl-2-ethylhexyl phthalate (25.32%)、油酸(14.28%)、十六酸(10.44%)、4-十八烷基嗎啉(7.67%)、十八烷基二甲基叔胺(5.87%)、硬脂酸(5.67%)、8-十六烷烯(5.17%)和左旋乙酸冰片酯(3.04%).同屬植物魚鱗云杉的主要揮發(fā)性成分見表2[13].由表2可看出，魚鱗云杉干部中的主要揮發(fā)性成分為烯萜類化合物，與長白魚鱗云杉中的主要揮發(fā)性成分差異較大，其原因可能與兩種植物的生長環(huán)境和采用的提取方法不同有關.

表1 長白魚鱗云杉中的揮發(fā)性成分及其分子量和相對百分含量

圖1 長白魚鱗云杉中揮發(fā)性成分的總離子流色譜圖

表2 魚鱗云杉干部中的揮發(fā)性成分及其分子量和相對百分含量

4 結論

本文采用水蒸氣蒸餾法提取了長白魚鱗云杉中的揮發(fā)性成分，并利用GC-MS技術對其化學成分進行了分離和檢測.檢測結果顯示，脂肪族類化合物是長白魚鱗云杉中的主要揮發(fā)性成分，而同屬植物魚鱗云杉的主要揮發(fā)性成分為烯萜類化合物，該結果可為長白魚鱗云杉資源的開發(fā)和利用提供參考.本文在研究中只對長白魚鱗云杉中揮發(fā)性成分中的化學成分及其含量進行了測定，在今后的研究中我們將對其生物活性等方面做進一步研究.