田悅　蘇群英　朱曉瑩　黃云美　黃炳臣

【摘要】目的研究血管內皮生長因子（VEGF）、間質表皮轉化因子（c-Met）蛋白在結直腸腺癌中的表達及其與患者臨床病理特征的關系及表達的相關性。方法應用免疫組織化學SP法檢測195例人結直腸腺癌組織中VEGF和c-Met的蛋白表達，分析兩者與臨床病理特征的關系及兩者表達的相關性。結果VEGF和c-Met在結直腸腺癌中的表達率分別為57.4%和64.6%;VEGF和c-Met蛋白表達在淋巴結轉移陽性組較陰性組明顯增強，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），而與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、分化程度、浸潤深度無關（P>0.05）;VEGF和c-Met兩者蛋白表達有顯著相關性（C=0.204，P<0.01）。結論結直腸腺癌中VEGF和c-Met的高表達在淋巴結轉移中可能發(fā)揮了重要的作用。兩者蛋白表達呈正相關，提示兩者之間有協(xié)同作用，VEGF及c-Met可作為判斷結直腸腺癌生物學行為的指標。

【關鍵詞】結直腸腺癌;血管內皮生長因子;肝細胞生長因子受體;間質表皮轉化因子;淋巴結轉移

中圖分類號：R735文獻標志碼：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.05.004

Expression of VEGF and c-Met in colorectal adenocarcinoma and their

correlation with clinicopathological characteristics of patients

TIAN Yue SU Qunying ZHU Xiaoying HUANG Yunmei HUANG Bingchen

（1.Department of Pathology， Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities，

2.Key Laboratory of Molecular Pathology 〔Hepatobiliary Diseases〕 of Guangxi， 3.Graduate School，

Youjiang Medical University for Nationalities， Baise 533000， Guangxi， China）

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of vascular endothelial growth factor （VEGF） and c-Mesenchymal-epithelial transition factor （c-Met） protein in colorectal adenocarcinoma and their relationship with patient clinicopathological features and expression. Methods Immunohistochemical SP method was used to detect the expressions of VEGF and c-Met in 195 cases of colorectal adenocarcinoma， and the relationship between VEGF and c-Met and clinicopathological features and the correlation between their expressions were analyzed. ResultsThe positive expression rates of VEGF and c-Met in colorectal adenocarcinoma were 57.4% and 64.6%， respectively. Protein expressions of VEGF and c-Met in lymph node metastasis positive group were significantly higher than those in lymph node metastasis negative group， and difference was statistically significant（P<0.01）， while they were not correlated with gender， age， tumor location， tumor size， degree of differentiation and depth of invasion （P>0.05）. There was significant correlation between the protein expressions of VEGF and c-Met（C=0.204， P<0.01）. ConclusionHigh expressions of VEGF and c-Met in colorectal adenocarcinoma may play an important role in lymph node metastasis. Positive correlation of VEGF and c-Met protein expressions in colorectal adenocarcinoma suggests a synergistic effect between them， and VEGF and c-Met can be used as indicators to judge the biological behaviors of colorectal adenocarcinoma.124698E7-26CF-40DB-9D52-26B87174CA0F

【Key words】colorectal adenocarcinoma; VEGF; hepatocyte growth factor receptor; c-Met; lymph node metastasis

結直腸腺癌是發(fā)病率正在較快增長的常見癌癥，老年患者逐年增多。多數(shù)患者診斷時就已經(jīng)是中晚期，侵襲轉移是患者治療失敗和死亡的主要因素。目前已知許多因子會促使腫瘤細胞運動、增強轉移能力，包括腫瘤自分泌的肝細胞生長因子等可影響腫瘤細胞表面受體的分布，調節(jié)腫瘤細胞運動過程中細胞與細胞之間、細胞和基質之間的結合，并啟動和維持腫瘤細胞的運動及定向遷移。我們采用免疫組織化學染色方法檢測血管內皮生長因子（VEGF）和間質表皮轉化因子（c-Met）在結直腸腺癌組織中的表達，探討其與患者臨床病理特征的關系及表達的相關性。

1 資料與方法

1.1 標本收集 收集右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院病理科2016年2月～2020年12月195例手術切除結直腸腺癌石蠟包埋癌組織。納入標準：（1）結直腸腺癌的病理切片由兩名副主任醫(yī)師以上的病理醫(yī)師確認;（2）具有患者完整的臨床病理資料;（3）手術前未進行放療、化療或免疫治療;（4）組織病理樣本可用;（5）獲得患者的知情同意，并獲得相關倫理審批與同意。排除標準：（1）未經(jīng)病理確診患者;（2）臨床病理資料欠缺;（3）手術前做過放療、化療或者免疫治療的患者;（4）腫瘤細胞過少的樣本;（5）不愿參加者或者未獲得相關倫理委員會審批同意者。

1.2 臨床資料的收集根據(jù)上述研究對象的納入與排除標準，收集2016年2月～2020年12月右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院符合標準的結直腸癌病例195例。其中男性124例，女性71例;年齡24～85歲，平均年齡50.6歲，其中年齡≥50歲138例、<50歲57例;結腸部位106例、直腸部位89例;腫瘤直徑≥5 cm 96例、<5 cm 99例;中高分化腺癌組156例、低分化腺癌和黏液腺癌為低分化組共39例;浸潤深度T1+T2共80例、T3+T4共115例;有淋巴結轉移89例、無淋巴結轉移106例。

1.3 試劑和方法鼠抗人VEGF單克隆抗體、兔抗人c-Met單克隆抗體、SP即用型免疫組化試劑盒及DAB顯色劑均購自北京中杉金橋公司。染色步驟按說明書進行，4 μm厚組織切片常規(guī)脫蠟、梯度乙醇入水。在EDTA抗原修復液中95℃～99℃抗原修復20 min，室溫冷卻10 min。除去切片組織外的水分，在離組織3 mm處用免疫組化油筆畫圈，PBS緩沖液清洗2×3分鐘，分別滴加VEGF和c-Met抗體并置于4℃冰箱過夜。第二天，應用SP檢測和DAB顯色，蘇木素復染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，樹膠封片。以PBS緩沖液代替一抗作陰性對照，用已知陽性的肺腺癌組織作陽性對照。

1.4 結果判定VEGF染色陽性表達定位于細胞質，c-Met陽性表達定位于細胞膜和細胞質，以黃色、棕黃色、棕褐色為陽性著色，染色結果判定標準為綜合陽性細胞比率及陽性強度進行半定量評分，染色強度：無著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分;按顯色細胞比例進行評分：0～10%為1分，11%～50%為2分，>50%為3分。兩項相乘0～3分為陰性病例，4～9分為陽性病例。

1.5 統(tǒng)計學方法用SPSS 24.0軟件包處理數(shù)據(jù)。VEGF和c-Met在結直腸腺癌中的表達與臨床病理特征的差異用χ²檢驗，VEGF和c-Met在結直腸腺癌中表達的相關性用列聯(lián)系數(shù)相關性分析。檢驗水準：α=0.05，雙側檢驗。

2 結果

2.1 VEGF和c-Met表達與結直腸腺癌臨床病理特征的關系VEGF染色陽性表達定位于細胞質、c-Met陽性表達定位于細胞膜和細胞質，呈黃色、棕黃色、棕褐色。在195例結直腸腺癌中VEGF和c-Met的表達率分別為57.4%（112/195）和64.6%（126/195）。其中VEGF和c-Met表達與淋巴結轉移有關（χ²=8.257，P<0.05;χ²=14.108，P<0.01），而與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、分化程度、浸潤深度無關（P>0.05）。見表1。

2.2 VEGF和c-Met在結直腸腺癌中表達的相關性195例結直腸腺癌組織中VEGF和c-Met均為陽性表達82例、均為陰性39例，VEGF陽性而c-Met陰性30例、c-Met陽性而VEGF陰性44例，VEGF和c-Met的表達有相關性（C=0.204， P=0.004）。見表2。

3 討論

侵襲轉移是惡性腫瘤的重要生物學特征，其生長和轉移有賴于腫瘤血管的形成。多數(shù)腫瘤細胞可合成分泌VEGF，并影響腫瘤生長、侵襲轉移等病理過程。研究證實VEGF在前列腺癌、子宮內膜癌、肺腺癌等惡性腫瘤中高表達，且隨著表達強度增高與腫瘤的進展和預后不良呈正相關[1～3]。臧志意等[4]通過檢測肺腺癌組織中VEGF的表達研究發(fā)現(xiàn)，VEGF的表達強度與更大的腫瘤直徑、淋巴結轉移及更晚的TNM分期呈正相關。不同的研究也發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生淋巴結轉移、骨轉移及轉移灶數(shù)量多的乳腺癌、前列腺癌中VEGF表達強度明顯高于無淋巴結轉移和骨轉移灶少的病例[5～6]。說明VEGF的高表達或過表達促進惡性腫瘤的侵襲轉移，而腫瘤中新生小血管結構的不完整和高通透性以及血管網(wǎng)的增加是促進腫瘤增殖和轉移的重要基礎。我們的研究也發(fā)現(xiàn)VEGF在結直腸腺癌中的表達與患者年齡、性別、腫瘤發(fā)生部位、組織分級分化、浸潤深度及腫瘤直徑等臨床病理參數(shù)無關，而與淋巴結轉移有關，在淋巴結轉移組中VEGF蛋白表達率明顯高于無淋巴結轉移組，表明結直腸腺癌中VEGF表達上調參與腫瘤的淋巴結轉移。張彬等人[7]采用免疫組化和酶聯(lián)免疫法分別檢測136例宮頸癌患者癌組織和血清中VEGF表達和Cox風險回歸模型分析，結果表明VEGF表達上調是宮頸癌患者預后不良的獨立危險因素。結直腸腺癌中VEGF蛋白表達可能是預測淋巴結轉移和患者預后的較好指標。124698E7-26CF-40DB-9D52-26B87174CA0F

腫瘤細胞的運動和趨化性是惡性腫瘤轉移的重要生物學基礎，腫瘤細胞的遷移能力受腫瘤自身分泌的眾多運動因子影響，其中肝細胞生長因子（HGF）也參與細胞遷移的調控。HGF/c-Met途徑主要通過干擾其他基因的表達水平來影響腫瘤的微環(huán)境，王瑞等人[8]將c-Met基因質粒注射到小鼠肝臟后發(fā)現(xiàn)，c-Met可促進AKT/mTOR信號通路的激活而誘發(fā)肝癌。目前發(fā)現(xiàn)胃癌、口腔鱗狀細胞癌、宮頸癌等[9～11]都可檢出c-Met蛋白的表達，在乳腺癌、結直腸癌中也觀察到c-Met的表達水平與淋巴結轉移有關。其機制可能是c-Met與HGF特異結合導致磷脂肽肌醇-3激酶（P13K）磷酸化，誘導腫瘤細胞VEGF的分泌、表達和促進腫瘤血管的生成;HGF/c-Met可激活下游信號轉導通路使β-連環(huán)蛋白的酪氨酸殘基磷酸化，不能與E-鈣黏蛋白結合形成功能復合體，降低細胞黏附。此外，HGF/c-Met途徑尚可誘導基質金屬蛋白酶（MMP）的分泌、促進細胞外基質降解等機制促進腫瘤細胞轉移[12]。本組免疫組化結果分析顯示，有淋巴結轉移的結直腸腺癌組c-Met表達率為78.6%，明顯高于無淋巴結轉移組的52.8%，提示c-Met參與結直腸腺癌的淋巴結轉移過程，高表達或過表達提示結直腸腺癌患者易于發(fā)生淋巴結轉移并影響患者的預后。李雄峰等[13]分析c-Met在肺腺癌中的表達與臨床病理特征關系發(fā)現(xiàn)，肺腺癌組織中c-Met高表達與淋巴結轉移、病理分級、臨床分期有關，高表達的c-Met提示患者預后不佳，是影響患者預后的獨立因素。上述研究結果均提示c-Met有可能成為預測結直腸腺癌預后的一個重要生物學標志物。

在本實驗中，我們對每例患者均用同一腫瘤蠟塊組織連續(xù)切片進行VEGF和c-Met免疫組化染色，以降低腫瘤不同區(qū)域如不同分化程度等異質性對蛋白表達的影響。結果顯示，VEGF和c-Met在結直腸腺癌中有較高的表達，在伴有淋巴結轉移的結直腸腺癌病例中，VEGF和c-Met兩者的表達率均較高，與非淋巴結轉移組相比，差異有統(tǒng)計學意義，提示VEGF和c-Met在結直腸腺癌的侵襲轉移過程中發(fā)揮重要作用，VEGF和c-Met高表達或過表達促進腫瘤的淋巴結轉移。在本組免疫組化結果觀察中VEGF、c-Met同時陽性和同時陰性的病例較多，相關分析顯示，結直腸腺癌中VEGF和c-Met的表達具有顯著相關性，提示兩者在結直腸腺癌的淋巴結轉移機制中存在協(xié)同作用，VEGF及c-Met可作為判斷結直腸腺癌生物學行為的指標。參考文獻[1] 李本根，梁天才，李曉光.miR-409-3p通過抑制LHX2調控VEGF/VEGFR2信號通路促進前列腺癌細胞凋亡、抑制細胞增殖[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2021，29（21）：3731-3736.

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（收稿日期：2021-11-18修回日期：2022-03-09）

（編輯：梁明佩）124698E7-26CF-40DB-9D52-26B87174CA0F