張靜依 哈雪梅(通信作者) 趙博雅 張自潔

101500首都醫(yī)科大學燕京醫(yī)學院2016級五年制臨床醫(yī)學1，北京

101500首都醫(yī)科大學燕京醫(yī)學院密云教學醫(yī)院綜合教研室2，北京

101500首都醫(yī)科大學燕京醫(yī)學院2018級五年制臨床醫(yī)學3，北京

皮膚鱗狀細胞癌(cSCC)是一種以角質細胞異常增殖為特征的惡性腫瘤，其發(fā)病率隨人口老齡化發(fā)展逐年上升。本病臨床表現(xiàn)單一、病程長，反復摩擦感染常影響臨床判斷，不典型的病變，更易過診或漏診。研究cSCC 早期高危特征和發(fā)生的分子機制，可為臨床提供重要信息。多能性相關轉錄因子(SOX2)在哺乳動物胚胎發(fā)生和后來的生活中必不可少，異常表達卻非常有害，通過調節(jié)干細胞功能、細胞黏附、外基質降解及血管生成等參與腫瘤發(fā)生、轉移與復發(fā)[1-2]。微管不穩(wěn)定蛋白(Stathmin)又稱癌蛋白，具有微管解聚活性，在有絲分裂調控中起關鍵作用，是腫瘤相關因子之一[3]。本研究檢測SOX2和Stathmin在cSCC和皮膚良性增生性病變中的表達情況，以期發(fā)現(xiàn)相關診斷標記和線索，為臨床提供預后信息及新的治療靶點。

資料與方法

選取2017-2020年北京市密云區(qū)醫(yī)院病理科存檔的皮膚鱗狀細胞癌切除標本41 例為觀察組，良性增生性病變25 例為對照組。觀察組男28 例，女13 例；年齡44～94歲，平均(70.54±13.19)歲；有糖尿病者21例，無糖尿病者17 例(失訪3 例)；發(fā)生于口腔相關上皮者7 例，其他部位者34 例。對照組男13 例，女12例；年齡33～83歲，平均(56.20±14.18)歲；有糖尿病者10 例，無糖尿病者15 例；發(fā)生于口腔相關上皮者1例，其他部位者24例。兩組患者基本資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經醫(yī)院倫理委員會批準。

納入標準：①術前未接受過放化療。②手術切除為初次治療。③原發(fā)性腫物。④經患者及家屬同意。

排除標準：①合并其他惡性腫瘤者。②診斷不明確者。③復發(fā)病例。④不配合隨訪者。

方法：兩組均采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法(SP)。10%中性福爾馬林固定的石蠟標本常規(guī)切片(厚度2～3 μm)，脫蠟水化，磷酸緩沖鹽溶液(PBS)浸泡。乙二胺四乙酸(EDTA)修復液(PH8.0)高壓修復，冷卻至室溫，PBS緩沖液清洗。一抗(SOX2：中山金橋， 20817571， Stathmin： 中山金橋，21095421)，37℃孵育1 h。PBS 清洗后加酶標羊抗鼠二抗(中山金橋：17G87D11)。DAB 顯色。蘇木素復染。乙醇脫水。二甲苯透明后封片。將已知陽性組織設為陽性對照，PBS 液代一抗作為陰性對照。由2 名經驗豐富的主治醫(yī)師行獨立雙盲復閱判讀。

觀察指標：依據(jù)著色強度、陽性細胞百分比進行評分。著色強度：棕褐色計3 分，棕黃色計4 分，淺黃色計1 分，不著色計0 分；陽性細胞百分比：＞75%計4 分，50%～75%計3 分，25%～50%計2 分，≤25%計1 分，無陽性計0 分。以上兩項得分相加計總分，0～1 分為陰性，2～7 分為陽性。高分化鱗狀細胞癌巢近基底層陽性表達時，評為1分(陰性)。

統(tǒng)計學方法：采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學分析系統(tǒng)進行數(shù)據(jù)處理，計量資料用(±s)表示，組間采用t檢驗；計數(shù)資料用[n(%)]表示，組間采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

SOX2 和Stathmin 蛋白在兩組患者中的表達。SOX2蛋白在正常皮膚未見表達，在cSCC中表達于腫瘤細胞核，個別胞質陽性。Stathmin 定位于胞質，在正常鱗狀上皮基底及基底旁層表達，高分化鱗狀細胞癌巢近基底陽性表達，分化越差，信號越強。見圖1、圖2。

圖1 SOX2在癌組織中表達(10x)

圖2 Stathmin在癌組織中表達(10x)

兩組患者病變中SOX2 和Stathmin 蛋白表達率比較：觀察組SOX2 和Stathmin 在cSCC 陽性表達率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組患者病變中SOX2和Stathmin蛋白表達率比較

觀察組SOX2 和Stathmin 蛋白表達與臨床因素的關系：觀察組SOX2 陽性表達與發(fā)病部位和糖尿病史相關，發(fā)生于口腔黏膜的鱗狀細胞癌SOX2 蛋白陽性表達率明顯高于其他部位，有糖尿病史的cSCC 患者SOX2 蛋白陽性表達率高于無糖尿病史者，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Stathmin 蛋白陽性表達與腫瘤分化呈負相關，中-低分化鱗癌Stathmin 蛋白陽性表達率明顯高于高分化者，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 觀察組SOX2和Stathmin蛋白表達與臨床因素的關系

討 論

鱗狀上皮是表皮增殖單元發(fā)生一系列高度調控事件而逐漸分化成熟的，細胞分裂率、凋亡或傳輸時間等微小改變即可導致病理狀況，其調控異常是最可能誘發(fā)惡性腫瘤的原因。

SOX2 對維持胚胎和干細胞群至關重要，可影響細胞增殖、遷移、侵襲和轉移。SOX2 在食管鱗癌、膀胱癌前病變及小鼠侵襲性膀胱癌中持續(xù)表達，對腫瘤的啟動和生長十分重要，推薦SOX2 作為尿路上皮癌標記及潛在靶點[4-5]。這與本研究結果所示SOX2 蛋白在cSCC 細胞核陽性表達，且陽性率明顯高于對照組結果相似。SOX2 蛋白高表達于口腔相關的鱗狀細胞癌，可能與其上皮干細胞性及異質性相關[6]。SOX2還可協(xié)同P63 形成復合體，激活編碼GLUT1 的內含子增強子簇，提高GLUT1 表達，介導糖酵解內流過度激活，鱗狀細胞癌存在其表型，糖代謝異常時高度易感[7]。本研究結果顯示，有糖尿病史的cSCC 患者SOX2 蛋白陽性表達率高于無糖尿病史者，由此推斷，患者糖尿病史及血糖水平可作為cSCC 診斷參考依據(jù)。

幾乎所有宮頸鱗癌和高級別上皮內瘤變中Stathmin 過表達，其蛋白及mRNA 表達水平在食管鱗癌患者血清中高于健康者[8]。但很多研究發(fā)現(xiàn)，Stathmin 高表達與腫瘤分化差、淋巴結轉移、TNM 分期晚和生存期短有關[9-10]。口腔鱗癌過表達Stathmin可通過激活PI3K-AKT-mTOR 信號通路來降低癌細胞對治療的敏感性。本研究結果顯示，Stathmin在cSCC的陽性表達率明顯高于對照組，且其陽性表達與腫瘤分化呈負相關，提示其表達與預后不良相關。

綜上所述，Stathmin 和SOX2 可作為cSCC 診斷標記，陽性表達提示惡性，可協(xié)助鑒別病理形態(tài)相似的cSCC 和良性增生性病變，并為臨床提供預后信息?；颊咛悄虿〔∈芳把撬接锌赡茏鳛閏SCC的參考依據(jù)。