馬婷婷，肖 凌

(湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北 武漢 430065)

鉛是對(duì)人體有害的重金屬，隨著工業(yè)的發(fā)展，鉛污染存在于飲水、糧食[1]、化妝品[2]、藥物[3]、PM2.5等[4]各個(gè)方面，鉛是PM2.5中重金屬的典型成分[5]。雖然人們?nèi)粘Ｍㄟ^(guò)PM2.5攝入的鉛極其微量，但鉛長(zhǎng)期積累于體內(nèi)難以排出。西醫(yī)在驅(qū)鉛治療方面主要有螯合劑、金屬硫蛋白、抗氧化劑等藥物，但是存在惡心、嘔吐、頭暈、過(guò)敏等多種不良反應(yīng)[6]。中醫(yī)認(rèn)為，鉛是陰寒之邪，內(nèi)通肝腎，應(yīng)當(dāng)以排毒利濕、溫補(bǔ)腎陽(yáng)、調(diào)和氣血為治療原則[7]。霾黃金中藥茶主要由羅漢果、蘆根、百合、甘草、薏苡仁、陳皮、余甘子、玉竹等組成，前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)本茶飲無(wú)急性毒理作用[8]，并且對(duì)PM2.5所致的肺損傷具有防護(hù)作用[9]。

本實(shí)驗(yàn)主要探討霾黃金中藥茶是否具有改善鉛毒作用，PM2.5中含鉛量低微，難以通過(guò)PM2.5霧霾顆粒對(duì)大鼠進(jìn)行造模染毒，因此本實(shí)驗(yàn)選擇添加乙酸鉛的飼料喂養(yǎng)大鼠構(gòu)建短期鉛暴露模型，同時(shí)在試驗(yàn)組的飲用水中加入霾黃金中藥茶進(jìn)行干預(yù)治療，觀察霾黃金中藥茶對(duì)大鼠鉛染毒模型的改善作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：30只SPF級(jí)SD雄性大鼠購(gòu)自湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，平均體重(233.4±13.0)g，動(dòng)物合格證號(hào)42010200004222，單位許可證號(hào)SCXK(鄂)2017-0012，將大鼠在適宜條件下進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)10 d。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑：乙酸鉛(批號(hào)L812498)，霾黃金中藥茶(批號(hào)SC10642011801427)，ALT試劑盒(批號(hào)20201222，南京建成公司)，AST試劑盒(批號(hào)20201219，南京建成公司)，尿素氮試劑盒(批號(hào)20201215，南京建成公司)，大鼠白細(xì)胞介素-6(Interleukin 6,IL-6)ELISA試劑盒(批號(hào)MM-0190R2，江蘇菲亞公司)，大鼠腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor,TNF-α)ELISA試劑盒(批號(hào)MM-0180R2，江蘇菲亞公司)。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器：水浴鍋(型號(hào)DK-98-Ⅱ，天津市泰斯特儀器有限公司)，酶標(biāo)儀(型號(hào)MB-580，深圳市匯松科技發(fā)展有限公司)，可見(jiàn)分光光度計(jì)(型號(hào)V-1000，上海翱藝儀器有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組與造模：將適應(yīng)性喂養(yǎng)10 d后的30只SPF級(jí)SD雄性大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組和霾黃金組，每組10只。參考相關(guān)文獻(xiàn)[10]，將醋酸鉛以0.57 g/kg加入普通大鼠飼料中制成含鉛飼料。模型組、霾黃金組大鼠每日給予充足的含鉛飼料喂養(yǎng)，對(duì)照組喂養(yǎng)正常飼料，三組均飼喂4周。

1.2.2 給藥：配制霾黃金溶液，取自霾黃金中藥茶，根據(jù)專(zhuān)利“一種清肺潤(rùn)肺茶的生產(chǎn)方法”(專(zhuān)利號(hào)ZL201410124446.5)，人每日攝入劑量1.5 g，實(shí)驗(yàn)中大鼠劑量設(shè)為人的20倍，參考《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》的體表面積換算法，計(jì)算得出大鼠劑量為0.54 g/d，根據(jù)大鼠每日的大約飲水量為35 ml配制成15.4 g/L的霾黃金溶液。從實(shí)驗(yàn)第1天起，霾黃金組大鼠給予充足的霾黃金溶液飲用，對(duì)照組和模型組則予正常飲水，每隔6 d霾黃金組大鼠正常飲水1 d，共處理4周。

1.2.3 取材：給藥4周后，予大鼠7%水合氯醛0.5 ml/100 g的劑量麻醉，采用促凝真空采血管、肝素抗凝管進(jìn)行大鼠腹主動(dòng)脈取血，然后取蠶豆大小的大鼠肝組織和腎組織置于30 ml的4%多聚甲醛中固定。

1.2.4 大鼠體重檢測(cè)：從實(shí)驗(yàn)第1天起，每隔4 d記錄各組大鼠體重，并觀察大鼠每日行為飲食變化。

1.2.5 血鉛含量檢測(cè)：給藥結(jié)束后腹主動(dòng)脈采血至肝素抗凝管，檢測(cè)各組大鼠血鉛含量。

1.2.6 肝腎功能及IL-6和TNF-α水平檢測(cè)：促凝真空采血管采血后靜置30 min，離心分離血清，檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine transaminase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspertate aminotransferase,AST)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、IL-6、TNF-α水平。

1.2.7 組織病理學(xué)形態(tài)觀察：取4%多聚甲醛中固定過(guò)夜的肝組織、腎組織，石蠟包埋，切片，進(jìn)行HE染色，觀察大鼠肝腎組織的形態(tài)學(xué)變化。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠體重比較 見(jiàn)表1。給藥過(guò)程中發(fā)現(xiàn)模型組大鼠后期明顯行為遲鈍，毛色失去光澤，且進(jìn)食大幅減少。與對(duì)照組相比，含鉛飼料喂養(yǎng)的其他兩組體重上升緩慢，模型組體重在后期存在停滯反減的現(xiàn)象；與模型組相比，霾黃金組大鼠體重平穩(wěn)上升。

表1 各組大鼠體重比較(g)

2.2 各組大鼠血鉛含量比較 見(jiàn)表2。與對(duì)照組比較，模型組、霾黃金組大鼠血鉛含量均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。霾黃金組大鼠血清含鉛量與模型組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 各組大鼠血鉛含量比較(μg/L)

2.3 各組大鼠肝腎功能及血清IL-6、TNF-α水平比較 見(jiàn)表3。與對(duì)照組比較，模型組大鼠血清AST、ALT、BUN水平均高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較，霾黃金組大鼠血清AST、ALT、BUN水平均低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。三組IL-6、TNF-α水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

表3 各組大鼠肝腎功能及血清IL-6、TNF-α水平比較

2.4 各組大鼠肝、腎組織病理學(xué)形態(tài) 對(duì)照組大鼠肝小葉形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰規(guī)則，未見(jiàn)異常病理改變，肝細(xì)胞形態(tài)正常呈放射狀排列整齊；模型組大鼠肝組織病變明顯，肝細(xì)胞腫脹形態(tài)異常，且肝索排列紊亂，肝小葉結(jié)構(gòu)消失，肝血竇充血病變明顯；霾黃金組大鼠肝組織病變較模型組明顯減輕(圖1)。對(duì)照組大鼠的腎小球、腎小管等形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)清晰；模型組大鼠的腎組織形態(tài)異常，出現(xiàn)腎小球體積增大、腎小管空泡樣變以及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變；霾黃金組大鼠的腎組織病理改變較模型組明顯減輕(圖2)。

A：對(duì)照組；B：模型組；C：霾黃金組

A：對(duì)照組；B：模型組；C：霾黃金組

3 討 論

目前，車(chē)輛排放、工業(yè)排放、化石燃料燃燒等均會(huì)衍生重金屬鉛，重金屬鉛暴露可誘發(fā)廣泛的生理、生化、行為障礙，且可能引起各種器官和組織的嚴(yán)重危害[11]，是人類(lèi)肝腎毒性的最普遍原因之一[12]。

中醫(yī)對(duì)鉛毒有較為深入的認(rèn)識(shí)，中醫(yī)認(rèn)為鉛邪入體，可潴留臟腑，造成氣機(jī)郁滯，血行不暢，臟腑機(jī)能因之受損，進(jìn)而損傷肝、脾、腎諸臟[13]。中醫(yī)學(xué)的多種治療方法在驅(qū)鉛治療中取得較好療效，本研究所用的霾黃金中藥茶是一款清肺健脾專(zhuān)利中藥茶，方中羅漢果、余甘子具有保肝、抗腫瘤等作用[14-15]，可以減輕肝損傷；薏苡仁可增強(qiáng)免疫功能，調(diào)節(jié)腸道菌群[16]；陳皮理氣健脾[17]；玉竹健脾養(yǎng)胃[18]；甘草具有解毒抗病毒作用[19]，且富含鈣[20]，余甘子富含鋅[21]，生物態(tài)的鋅鈣等能與鉛競(jìng)爭(zhēng)細(xì)胞位點(diǎn)[22]，因此可降低鉛的細(xì)胞毒性。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠短期鉛暴露可引起明顯的食欲減輕、體重下降，這與既往研究[23]一致，而飲用霾黃金中藥茶的大鼠在體重上明顯高于模型組，表明霾黃金中藥茶可以緩解大鼠鉛中毒所引起的食欲下降、體重減輕。另外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組大鼠血清IL-6、TNF-α比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明是實(shí)驗(yàn)劑量的鉛暴露大鼠體內(nèi)炎癥因子未明顯升高。肝臟與腎臟被視為鉛毒性作用的靶器官。本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠血清AST、ALT、BUN水平均高于對(duì)照組；霾黃金組大鼠血清AST、ALT、BUN水平均低于模型組；與既往研究[24]結(jié)果相一致。AST、ALT是肝功能的兩個(gè)重要指標(biāo)，其升高提示肝細(xì)胞受損，結(jié)合病理學(xué)切片結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠鉛暴露后的肝臟發(fā)生明顯病變，肝細(xì)胞的損傷破壞導(dǎo)致肝細(xì)胞中的轉(zhuǎn)氨酶入血，引起血清AST、ALT含量升高，說(shuō)明鉛暴露可引起大鼠肝臟損傷。BUN是評(píng)價(jià)腎臟濾過(guò)功能的一項(xiàng)指標(biāo)，模型組大鼠BUN異常上升，結(jié)合其腎臟病理切片顯示腎單位出現(xiàn)明顯病變，提示鉛暴露可引起大鼠腎臟損傷。本實(shí)驗(yàn)中霾黃金組大鼠血清AST、ALT和BUN水平均明顯低于模型組，而且組織病理學(xué)形態(tài)變化低于模型組，說(shuō)明霾黃金中藥茶能減輕重金屬鉛引起的肝腎損傷。

然而，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，霾黃金組大鼠血鉛水平與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示霾黃金中藥茶并未降低大鼠的血鉛水平。出現(xiàn)這一結(jié)果的原因可能為：模型組大鼠后期食欲明顯下降，減少含鉛飼料的食用，而霾黃金組大鼠體重高于模型組，說(shuō)明霾黃金組后期較模型組攝入了更多的含鉛飼料，但是模型組和霾黃金組血鉛含量無(wú)明顯差異，間接說(shuō)明霾黃金組可能較模型組排出更多的鉛。

綜上所述，霾黃金中藥茶可明顯改善鉛染毒大鼠食欲，增加體重，保護(hù)肝腎功能。另外，霾黃金中藥茶是否能有效降低大鼠血鉛水平，有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。