劉新澤 胡友軍 趙曉南 張瑞陽 朱宇旌 張 勇 李方方**

(1.沈陽農(nóng)業(yè)大學動物科學與醫(yī)學學院，沈陽110866；2.廣東酸動力生物科技有限公司，清遠511500)

我國是畜禽養(yǎng)殖大國，同時也是抗生素使用大國，伴隨著畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中抗生素的大量使用，環(huán)境衛(wèi)生、耐藥性等一系列公共衛(wèi)生問題引發(fā)了人們對食品安全的重視[1-2]。因此，尋找飼用抗生素的有效替代產(chǎn)品尤為關鍵。國內(nèi)外常用的酸化劑種類有單一酸化劑、包被酸化劑以及復合酸化劑等，目前復合酸化劑應用較為廣泛[3]。研究表明，在家禽飼糧中添加復合酸化劑可提高其生長性能[4]、養(yǎng)分表觀代謝率[5]、抗氧化功能以及免疫功能[6-7]。酸化劑的類型影響其作用效果，如富馬酸、檸檬酸等大分子有機酸的保護性酸化劑，只能在胃中降低pH并參與機體能量代謝過程，無法到達小腸[8]；甲酸、乙酸、丙酸等相對分子質(zhì)量較小的抑制性酸化劑，可通過降低胃腸道酸度、破壞細菌細胞膜完整性、干擾營養(yǎng)物質(zhì)代謝和遺傳基因合成等過程來達到抑菌目的，可改更好地改善家禽腸道健康，提高生產(chǎn)力和增強免疫力[9]。目前對不同類型的復合酸化劑應用效果之間的比較研究較少，大部分研究考察的酸化劑種類比較單一。因此，本試驗旨在研究飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞生長性能、養(yǎng)分表觀代謝率及血清生化、抗氧化和免疫指標的影響，為肉雞飼糧中酸化劑的應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用酸化劑均為市銷產(chǎn)品，甲酸甲酸銨型復合酸化劑主要成分為甲酸、甲酸銨，有效成分≥60%；緩釋甲酸主要成分為甲酸，有效成分≥40%；精油主要成分為桉葉素、肉桂醛、香芹酚，有效成分≥40%。

1.2 試驗設計

試驗采用4×2析因設計，2個因素分別為酸化劑添加類型和添加水平，4個添加類型分別為甲酸甲酸銨型復合酸化劑(A類型)、(甲酸甲酸銨+精油)復合酸化劑(B類型)、緩釋甲酸(C類型)、(緩釋甲酸+精油)復合酸化劑(D類型)；根據(jù)前期預試驗的結(jié)果設置2個添加水平，分別為0.1%和0.2%。

選取體況良好的7日齡愛拔益加(AA)肉仔雞1 080只，隨機分為9組，每組6個重復，每個重復20只雞，各組初始體重差異不顯著(P>0.05)。各組分別飼喂基礎飼糧(Ⅰ組)、基礎飼糧+0.1%甲酸甲酸銨型復合酸化劑(Ⅱ組)、基礎飼糧+0.2%甲酸甲酸銨型復合酸化劑(Ⅲ組)、基礎飼糧+0.1%(甲酸甲酸銨+精油)復合酸化劑(Ⅳ組)、基礎飼糧+0.2%(甲酸甲酸銨+精油)復合酸化劑(Ⅴ組)、基礎飼糧+0.1%緩釋甲酸(Ⅵ組)、基礎飼糧+0.2%緩釋甲酸(Ⅶ組)、基礎飼糧+0.1%(緩釋甲酸+精油)復合酸化劑(Ⅷ組)、基礎飼糧+0.2%(緩釋甲酸+精油)復合酸化劑(Ⅸ組)。試驗期42 d。

1.3 試驗飼糧

采用玉米-豆粕型基礎飼糧，1～7日齡飼喂育雛料并過渡到試驗飼糧，8日齡開始正式試驗。試驗飼糧參照NRC(1994)營養(yǎng)需要配制成顆粒料，根據(jù)肉雞成長階段對營養(yǎng)需求不同，基礎飼糧組成分為2個階段，基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

續(xù)表1項目Items含量 Content8～28日齡 8 to 28 days of age29～49日齡 29 to 49 days of age 氯化膽堿 Choline chloride0.100.10腐植酸鈉 Sodium humate0.200.20甜菜堿 Betaine0.030.03小蘇打 NaHCO30.100.10預混料 Premix1)0.500.50合計 Total100.00100.00營養(yǎng)水平 Nutrient levels2)代謝能 ME/(MJ/kg)13.4913.81L-賴氨酸 L-Lys1.341.32L-蘇氨酸 L-Thr1.021.00DL-蛋氨酸 DL-Met0.540.51粗蛋白質(zhì) CP20.5020.10粗脂肪 EE8.409.51鈣 Ca0.840.77磷 P0.410.32

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗在遼寧春天養(yǎng)殖場進行，AA肉雞由鐵嶺市海寧種禽養(yǎng)殖有限公司提供。所有試驗雞在一棟雞舍內(nèi)，溫度為(20±2) ℃，保持良好的通風。按常規(guī)的管理和免疫接種程序進行飼養(yǎng)。試驗期間，肉雞自由采食和飲水。

1.5 指標測定與方法

1.5.1 生長性能

正式試驗第1和42天清晨仔雞空腹稱重，記錄試驗初始體重和終末體重，每天結(jié)算肉雞耗料量，計算肉雞前期(8～28日齡)、后期(29～49日齡)和全期(8～49日齡)的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)、料重比(F/G)。

1.5.2 養(yǎng)分表觀代謝率

試驗結(jié)束前3 d，采用內(nèi)源指示劑法進行代謝試驗。每天以重復為單位，早、中、晚各收最上層鮮糞1次，每次收糞35～50 g，每100 g糞樣加20 mL 10%濃硫酸用以固定氮。將樣品存放于-20 ℃冰箱內(nèi)保存。將每組糞樣混合均勻后，采用鹽酸不溶灰分(AIA)作為內(nèi)源指示劑，干物質(zhì)(DM)、粗蛋白質(zhì)(CP)、粗脂肪(EE)、鈣(Ca)、磷(P)、鹽酸不溶灰分含量測定按照袁纓[10]的飼料常規(guī)分析方法進行，養(yǎng)分表觀代謝率計算公式如下：

某養(yǎng)分表觀代謝率(%)=[1-(糞便中該養(yǎng)分含
量×飼糧中鹽酸不溶灰分含量)/(飼糧中該養(yǎng)分
含量×糞便中鹽酸不溶灰分)]×100。

1.5.3 血清生化指標

屠宰前頸動脈采血約10 mL，靜止30 min，置于TG16W型微量高速離心機中，調(diào)節(jié)至3 000 r/min低溫離心10 min，分離血清并裝于無菌EP管中，迅速轉(zhuǎn)到-20 ℃冰箱冷凍保存待測。利用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法測定肉雞血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(UN)、干擾素-α(IFN-α)含量，試劑盒購于江蘇寶萊生物科技有限公司，按照試劑盒說明書操作。

1.5.4 血清抗氧化和免疫指標

利用ELISA法測定肉雞血清總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)含量，試劑盒購于江蘇寶萊生物科技有限公司，按照試劑盒說明書操作。

1.6 數(shù)據(jù)處理及分析

采用Excel 2010對數(shù)據(jù)進行初步整理，采用SPSS 17.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，Duncan氏法進行多重比較；采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行4×2析因分析。結(jié)果以“平均值±標準差”表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞生長性能的影響

由表2可知，主效應分析表明，從酸化劑添加類型來看，D類型的前期ADFI顯著高于B類型(P<0.05)；A、B類型的后期ADFI顯著高于D類型(P<0.05)，B、C類型的后期F/G顯著低于A類型(P<0.05)；B類型的全期ADFI顯著高于C、D類型(P<0.05)；B、C、D類型的全期F/G顯著低于A類型(P<0.05)。酸化劑添加類型和水平的交互作用對肉雞前期F/G有顯著影響(P<0.05)，對肉雞后期生長性能無顯著影響(P>0.05)，對肉雞全期ADFI有顯著影響(P<0.05)。

單因素方差分析表明，與對照組相比，Ⅴ、Ⅵ、Ⅸ組肉雞前期F/G顯著提高(P<0.05)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅸ組肉雞全期ADFI顯著提高(P<0.05)。

2.2 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞養(yǎng)分表觀代謝率的影響

由表3可知，主效應分析表明，從酸化劑添加類型來看，B類型的肉雞EE、CP、Ca和P表觀代謝率顯著高于A、D類型(P<0.05)。從酸化劑添加水平來看，0.2%水平的Ca表觀代謝率顯著高于0.1%水平(P<0.05)。酸化劑添加類型和水平的交互作用對肉雞EE、CP、Ca、P表觀代謝率有顯著影響(P<0.05)。

表3 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞養(yǎng)分表觀代謝率的影響

單因素方差分析表明，與對照組相比，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ組肉雞EE、CP表觀代謝率顯著提高(P<0.05)，其他各組Ca、P表觀代謝率均顯著提高(P<0.05)。

2.3 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞血清生化指標的影響

由表4可知，主效應分析表明，從酸化劑添加類型來看，A、B、C類型的血清TP含量顯著高于D類型(P<0.05)，C類型的血清ALB含量顯著高于A、B、D類型(P<0.05)，B類型的血清UN含量顯著低于A、C、D類型(P<0.05)，D類型的血清IFN-α含量顯著高于A、B、C類型(P<0.05)；A、D類型的血清COR含量顯著低于B、C類型(P<0.05)。從酸化劑添加水平來看，0.1%水平的血清TP、ALB、IFN-α含量顯著高于0.2%水平(P<0.05)，0.2%水平的血清COR含量顯著低于0.1%水平(P<0.05)。酸化劑添加類型和水平的交互作用對血清TP、ALB、UN、IFN-α及COR含量有顯著影響(P<0.05)。

表4 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞血清生化指標的影響

續(xù)表4項目Items總蛋白TP/(μg/mL)白蛋白ALB/(μg/mL)尿素氮UN/(μmol/L)干擾素-αIFN-α/(pg/mL)皮質(zhì)酮COR/(ng/L)P值P-value類型 Type<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01水平 Level<0.01<0.010.15<0.01<0.01類型×水平 Type×level<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01

單因素方差分析表明，與對照組相比，Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ組血清TP含量顯著降低(P<0.05)，Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ組血清ALB含量顯著提高(P<0.05)，Ⅳ、Ⅸ組血清UN含量顯著降低(P<0.05)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅸ組血清IFN-α含量顯著降低(P<0.05)，Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ、Ⅸ組血清COR含量顯著降低(P<0.05)。

2.4 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞血清抗氧化指標的影響

由表5可知，主效應分析表明，從酸化劑添加類型來看，D類型的血清T-AOC和SOD活性顯著高于A、B、C類型(P<0.05)，A、B、C類型的血清GSH-Px活性顯著高于D類型(P<0.05)，C、D類型的血清MDA活性顯著低于A、B類型(P<0.05)。從酸化劑添加水平來看，0.1%水平的血清SOD活性顯著高于0.2%水平(P<0.05)，0.2%水平的血清GSH-Px活性顯著高于0.1%水平(P<0.05)，0.1%水平的血清MDA含量顯著低于0.2%水平(P<0.05)。酸化劑添加類型和水平的交互作用對血清T-AOC和SOD、GSH-Px活性及MDA含量有顯著影響(P<0.05)。

單因素方差分析表明，與對照組相比，Ⅴ、Ⅷ、Ⅸ組血清T-AOC活性顯著提高(P<0.05)，Ⅵ組血清SOD活性顯著提高(P<0.05)，Ⅲ組血清GSH-Px活性顯著提高(P<0.05)，Ⅵ、Ⅷ組血清MDA含量顯著降低(P<0.05)。

表5 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞血清抗氧化指標的影響

2.5 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞血清免疫指標的影響

由表6可知，主效應分析表明，從酸化劑添加類型來看，B、D類型的血清IgA、IgG含量顯著高于A、C類型(P<0.05)；B、C類型的血清IgM含量顯著高于A、D類型(P<0.05)。從酸化劑添加水平來看，0.1%水平的血清IgA、IgG、IgM含量顯著高于0.2%水平(P<0.05)。酸化劑添加類型和水平的交互作用對血清IgA、IgG、IgM含量有顯著影響(P<0.05)。

表6 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞血清免疫指標的影響

單因素方差分析表明，與對照組相比，Ⅳ、Ⅷ組血清IgA含量顯著提高(P<0.05)，Ⅵ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ組血清IgG含量顯著提高(P<0.05)。

3 討 論

3.1 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞生長性能和養(yǎng)分表觀代謝率的影響

生長性能可直接反映肉雞生長特點，改善生長性能是提高經(jīng)濟效益的關鍵[11]。Ragaa等[12]研究表明，飼糧中添加0.5%甲酸和0.5%二甲酸鉀均可顯著提高肉雞的增重、飼料轉(zhuǎn)化率；徐青青[13]研究表明，在飲水中添加0.15%乳酸型復合酸化劑(乳酸80%、檸檬酸20%)可改善肉雞的生長性能。劉佑明等[14]研究表明，0.2%乳酸型復合酸化劑和0.2%甲酸型復合酸化劑對白羽肉雞生產(chǎn)性能均具有一定促進意義，可降低F/G。本試驗研究結(jié)果與徐青青[13]、劉佑明等[14]的研究結(jié)果基本一致，甲酸型酸化劑改善肉雞生產(chǎn)性能效果與乳酸型酸化劑相同。劉松柏等[15]研究表明，無抗飼糧添加1.5%復合型酸化劑(檸檬酸35%)對于改善黃羽肉雞的生長性能及腸道健康狀況有一定作用；殷繼勛[16]研究表明，飼糧中添加0.15%復合酸化劑(檸檬酸30%)對肉雞的生長性能無顯著影響；二者試驗均表明低劑量(0.15%)檸檬酸對肉雞生長性能無顯著影響，較高劑量(1.5%)檸檬酸對增重才有提升效果，說明以檸檬酸為主的復合酸化劑對生長性能的作用效果不理想。結(jié)合本試驗結(jié)果，飼糧中添加0.1%的(甲酸甲酸銨+精油)復合酸化劑不僅可以達到提高生長性能的效果，又節(jié)省了經(jīng)濟成本。

表觀代謝率可直接反映畜禽腸道的整體機能的強弱，畜禽對飼糧的消化能力隨著表觀代謝率的提高而變強[17]。李軍等[18]研究表明，飼糧中添加0.15%磷酸型(65%)復合酸化劑和乳酸型(30%)復合酸化劑能顯著提高肉雞各個階段飼糧的養(yǎng)分表觀代謝率。詹海杰等[19]研究表明，飼糧中添加0.1%復合酸化劑(二甲酸鉀∶磷酸為3∶2)可以提高肉兔的生長性能和養(yǎng)分表觀代謝率。本試驗結(jié)果與前人的研究結(jié)果基本一致，0.10%～0.15%水平的復合酸化劑能提高動物對飼料中脂肪、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收效率。Hernández等[20]研究表明，飼糧中添加1%甲酸對肉雞DM表觀回腸消化率有積極影響；Runho等[21]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.5%～1.0%的富馬酸增加了肉雞飼糧的能量代謝率。結(jié)合本試驗結(jié)果，飼糧中添加0.1%(甲酸甲酸銨+精油)復合酸化劑即可相當于添加高水平(0.2%)的單一型酸化劑，可有效提高養(yǎng)分表觀代謝率，從而提高仔雞ADG。

3.2 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞血清生化指標的影響

血清生化指標可以反映動物機體健康狀況。許金根等[7]研究表明，飼糧中添加0.1%復合酸化劑(乳酸、磷酸、檸檬酸)可以提高肉雞血清TP和ALB含量。本試驗結(jié)果也表明，飼糧中添加0.1%的(甲酸甲酸銨+精油)復合酸化劑、緩釋甲酸、(緩釋甲酸+精油)復合酸化劑均提高了血清ALB含量。許麗惠等[22]研究表明，飼糧中添加0.3%的包被酸化劑，肉雞血清UN含量顯著下降。本試驗結(jié)果同樣表明，飼糧中添加0.1%的(甲酸甲酸銨+精油)復合酸化劑，肉雞血清UN含量顯著降低，與生長性能和養(yǎng)分表觀代謝率結(jié)果趨勢一致，說明酸化劑的使用有效促進了機體對飼糧中營養(yǎng)物質(zhì)尤其是對蛋白質(zhì)的利用率，從而改善了肉雞的生長性能。血清IFN-α含量反映動物機體抗病毒和免疫力的水平[23-24]。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加復合酸化劑降低了血清IFN-α含量，與血清免疫指標的結(jié)果變化趨勢一致。

3.3 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞血清抗氧化指標的影響

動物機體防御體系的抗氧化功能與動物健康存在著緊密聯(lián)系[25]。李建平等[26]研究表明，斷奶仔豬飼糧中添加1.5%檸檬酸可提高血清SOD活性及T-AOC；魏艷紅等[27]研究表明，東鄉(xiāng)綠殼蛋雞飼糧中添加0.025%～0.100%復合酸化劑(甲酸、乙酸、檸檬酸等混合)可顯著提高血清SOD、GSH-Px活性和T-AOC，顯著降低血清MDA含量，與本試驗研究結(jié)果基本一致。王銘洋等[28]研究表明，在蛋雞飲水中每天添加0.1%有機鹽復合酸化劑(14%甲酸、14%乙酸、10%乳酸和2.5%丙酸)顯著提高了23和43周齡血清T-AOC，與本試驗添加0.1%和0.2%(緩釋甲酸+精油)復合酸化劑的結(jié)果一致，說明酸化劑通過降低胃腸道pH，抑制有害微生物生長和繁殖，提高肉雞對養(yǎng)分的消化利用能力，從而提高機體抗氧化能力。

3.4 飼糧中添加不同類型和水平的酸化劑對肉雞血清免疫指標的影響

免疫球蛋白是一類存在于機體內(nèi)廣泛參與體液免疫反應的球蛋白，禽類已確證的免疫球蛋白有3種，即IgG、IgM和IgA，目前酸化劑對肉雞免疫功能影響的研究報道還很少。Mustafa等[29]研究表明，飼糧中添加0.10%～0.15%有機酸復合物(主要含有包被丁酸鹽、山梨酸和酚類化合物等)可提高肉雞血清IgG含量；羅曦等[30]研究表明，飼糧中添加0.2%復合酸化劑(主要由羥基蛋氨酸、檸檬酸、甲酸組成)提高了肉雞的免疫水平；沈家鯤等[6]研究表明，飼糧中添加0.2%復合酸化劑(主要由檸檬酸、磷酸、苯甲酸組成)提高了生長后期血清IgG含量。本試驗的研究結(jié)果與前人研究結(jié)果基本一致，而且飼糧中添加0.1%的(甲酸甲酸銨+精油)復合酸化劑即可提高肉雞IgA和IgG含量，可見酸化劑主要通過提高血清IgG和IgA含量和免疫器官指數(shù)來改善家禽免疫功能。

4 結(jié) 論

飼糧中添加0.1%(甲酸甲酸銨+精油)復合酸化劑改善了肉雞生長性能，提高了養(yǎng)分表觀代謝率，增強了免疫機能。本試驗條件下，推薦在肉雞飼糧中添加0.1%(甲酸甲酸銨+精油)復合酸化劑。