李蓉　朱疆　付匿

關(guān)鍵詞：馬齒莧;離體心臟;心肌收縮力;實(shí)踐教學(xué)

馬齒莧（Portulaca oleracea L.）別名爪子菜、長(zhǎng)命菜、豆瓣菜等，分布于云南全省，多生于潮濕雜草地、荒地、田邊、路邊[1]，含有多種化學(xué)成分，主要有生物堿類、萜類、香豆素類、黃酮類、有機(jī)酸類等成分，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抑菌、降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗氧化等作用[2]。李蓉等[3]研究發(fā)現(xiàn)，馬齒莧對(duì)正常離體心臟和離體衰竭心臟的心肌收縮力均有明確的增強(qiáng)作用。本課題主要在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究馬齒莧對(duì)離體心臟的作用，以獲得最適宜的給藥濃度與劑量，用于楚雄醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校中藥專業(yè)中藥藥理學(xué)的實(shí)踐教學(xué)，以不斷完善、推廣運(yùn)用于更多的醫(yī)學(xué)院校，解決長(zhǎng)期以來(lái)教材中的實(shí)踐教學(xué)內(nèi)容相對(duì)較少的問(wèn)題，從而實(shí)現(xiàn)更好地培養(yǎng)學(xué)生實(shí)踐能力、創(chuàng)新能力和動(dòng)手能力的教學(xué)目的。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康牛蛙60只，雌雄不限，體重（250±50）g，購(gòu)于當(dāng)?shù)厮a(chǎn)品市場(chǎng)，并由楚雄醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校生物學(xué)教師鑒定為健康合格牛蛙，課題組成員均已參加云南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從業(yè)人員專業(yè)培訓(xùn)，并獲得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究資格，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)規(guī)范。

1.2藥物與試劑

馬齒莧全草，采于云南省楚雄醫(yī)專校園周邊，經(jīng)該校中藥鑒定室鑒定為中藥材馬齒莧;任氏液;純化水。

1.3主要儀器

數(shù)顯式鼓風(fēng)干燥箱（101A-3，上海滬粵明科學(xué)儀器有限公司）;計(jì)算機(jī)（啟天B4550-B031，聯(lián)想有限公司）;電子天平（ScoutSE型，奧豪斯儀器有限公司）;多功能紅外爐（MC-HI8SO11，中山市家福來(lái)電器有限公司）;肌張力傳感器、生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（BL-420S，成都泰盟公司）;中藥保健壺（JK-23，廣東時(shí)珍電器有限公司）;恒溫水浴鍋（HWS-28，上海一恒）;蛙心夾、蛙心套管（成都泰盟公司）。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1藥物制備

2.1.1 5種馬齒莧水煎液的配制（按實(shí)驗(yàn)小組自行制備）

由老師帶隊(duì)組織學(xué)生參與新鮮馬齒莧的采摘，每小組1～2名學(xué)生，采摘后取全草，洗凈烘干后，剪成小段，稱取5g，加適量純化水浸泡約30min，大火煎煮至沸騰后，改為小火繼續(xù)煎煮30min，過(guò)濾，藥渣再加適量純化水煎煮15min，過(guò)濾。合并兩次過(guò)濾液，于水浴上濃縮配制成50.0mL，冷卻后置于冰箱冷藏保存，用純化水稀釋成0.1%、0.2%、0.4%、0.8%、1.6%5種馬齒莧溶液。

2.1.2任氏液的配制

按參考文獻(xiàn)[4]的配方配制任氏液。配方：NaCl 6.50g/L，KCl 0.14g/L，NaHCO 0.20g/L，NaHPO0.01g/L，葡萄糖2.00g/L，CaCl0.12g/L。

2.2不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)馬齒莧對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響

取60只牛蛙，隨機(jī)分為對(duì)照組、0.1%馬齒莧組、0.2%馬齒莧組、0.4%馬齒莧組、0.8%馬齒莧組、1.6%馬齒莧組，每組10只。所有牛蛙均用脊髓破壞針從枕骨大孔處插入破壞蛙的腦和脊髓，用斯氏（Straub）離體蛙心法[4]制備離體蛙心標(biāo)本后，向蛙心套管內(nèi)灌注0.5mL任氏液，再用蛙心夾夾住心尖，連接在生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的張力傳感器上并調(diào)整好拉力，即可打開(kāi)計(jì)算機(jī)和機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，記錄蛙心的正常收縮張力曲線，待心臟收縮活動(dòng)穩(wěn)定后，向?qū)φ战M蛙心套管內(nèi)再灌注0.2mL任氏液，觀察并記錄蛙心收縮變化曲線。其他各組用同樣的方法制備離體蛙心標(biāo)本，待心臟收縮活動(dòng)穩(wěn)定后，分別加入0.2mL對(duì)應(yīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)馬齒莧溶液后，同樣觀察并記錄蛙心收縮變化曲線。用TM-WAVE軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)采集、導(dǎo)出與分析。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1的結(jié)果表明，馬齒莧對(duì)牛蛙離體心臟的灌流具有明顯的正性肌力作用，且呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系。在一定范圍內(nèi)，離體蛙心收縮張力隨馬齒莧質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加而增強(qiáng)。當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%時(shí)，正性肌力作用最顯著;當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)高于0.8%時(shí)，心肌收縮力隨質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加而有所減弱，但仍高于正常值;當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加至1.6%時(shí)，心肌收縮張力反而減弱，提示大劑量馬齒莧可能產(chǎn)生心臟毒性，進(jìn)而出現(xiàn)抑制作用。因此，學(xué)生在實(shí)踐課上主要觀察了正常離體心臟收縮，借鑒了李蓉等[3]用缺鈣任氏液導(dǎo)致心衰的研究，再用0.2%馬齒莧進(jìn)行解救，獲得了良好的教學(xué)效果。

4結(jié)論與討論

馬齒莧對(duì)離體牛蛙心臟收縮力有明顯的增強(qiáng)作用，尤其是在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%時(shí)，作用最顯著。21世紀(jì)，高等教育的戰(zhàn)略目標(biāo)是培養(yǎng)具有一定科研創(chuàng)新能力的人才，因此，培養(yǎng)學(xué)生的科研能力和創(chuàng)新能力具有重要意義[5]。本實(shí)驗(yàn)更好地體現(xiàn)了研究性教學(xué)，強(qiáng)調(diào)了教師研究性地教與學(xué)生研究性地學(xué)的有機(jī)融合，充分體現(xiàn)了創(chuàng)新教育理念。開(kāi)展研究型教學(xué)有利于學(xué)生綜合能力的提升、有利于學(xué)生創(chuàng)新能力的培養(yǎng)、有利于學(xué)生學(xué)習(xí)能力的提高[6-7]。

近三年，楚雄醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校教師利用身邊的藥材讓學(xué)生全程參與中藥藥理學(xué)課程教學(xué)，課時(shí)設(shè)置為4學(xué)時(shí)，關(guān)于新鮮藥材的采摘、凈制、煎煮的方法和藥液的配制等，都由各實(shí)驗(yàn)小組自行解決，由教師進(jìn)行指導(dǎo)。從離體蛙心標(biāo)本的制備到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理與分析，教師通過(guò)視頻投影的方式邊示教邊講解，在一定程度上提高了學(xué)生的參與度，也培養(yǎng)了學(xué)生溝通與分工合作和思考問(wèn)題、解決問(wèn)題的綜合能力，同時(shí)也激發(fā)了學(xué)生的專業(yè)熱情。結(jié)果分析出來(lái)后，小組之間還會(huì)互相比對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，出現(xiàn)差異的小組還會(huì)互相找原因，直到理解實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每一步的重要性。學(xué)生認(rèn)為，通過(guò)這樣的實(shí)踐課既學(xué)到了理論知識(shí)，也鍛煉了動(dòng)手能力，會(huì)讓人非常有成就感，不僅激發(fā)了學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)的創(chuàng)新意識(shí)，還充分調(diào)動(dòng)了學(xué)生參與的積極性。本課題主要研究中藥藥理學(xué)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)，讓學(xué)生了解新藥的研究開(kāi)發(fā)過(guò)程，為推動(dòng)高校實(shí)驗(yàn)教學(xué)和實(shí)驗(yàn)室發(fā)展提供參考，以期為中藥研究開(kāi)發(fā)培養(yǎng)更多的人才，為藥學(xué)服務(wù)、為臨床服務(wù)。