陳志遠(yuǎn)，張宇名，遲麗麗，李樹(shù)凡，王昆，徐守振

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，青島 266109；2.青島高通農(nóng)業(yè)科技有限公司，青島 266109）

牛副結(jié)核?。˙ovine paratuberculosis）是主要由副結(jié)核分枝桿菌（MAP）引起的牛的慢性、增生性、頑固性腸炎和以消瘦為特征的傳染病[1]。根據(jù)菌株培養(yǎng)特性及致病力的不同將副結(jié)核分枝桿菌分為3個(gè)亞型[2]。牛副結(jié)核病主要侵害的是消化道，回腸是最常見(jiàn)的感染部位，病畜的臨床表現(xiàn)是持續(xù)性下痢、漸進(jìn)性變瘦、生產(chǎn)能力下降。牛副結(jié)核病流行的范圍比較大，多呈隱性感染且潛伏期比較長(zhǎng)，往往得不到重視。該病沒(méi)有特定的治療方法，反芻動(dòng)物是該病的主要宿主，除此之外還有豬、馬和野生動(dòng)物也有一些發(fā)病的現(xiàn)象，我國(guó)將其列為二類(lèi)傳染病[3]。世界上多個(gè)國(guó)家都出現(xiàn)過(guò)牛副結(jié)核病，如美國(guó)、英國(guó)、荷蘭、丹麥、澳大利亞等國(guó)家。在美國(guó)，由于副結(jié)核病感染患病引起的年度損失已經(jīng)高達(dá)2.25億美元[4]。牛副結(jié)核病在我國(guó)大部分地區(qū)都存在，各個(gè)地區(qū)的感染率也比較高，給我國(guó)的養(yǎng)牛業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，進(jìn)一步全面開(kāi)展牛副結(jié)核的流行病學(xué)調(diào)查，明確流行規(guī)律十分重要。2017年高?；蹖?duì)寧夏地區(qū)9個(gè)奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)隨機(jī)采血1 796份進(jìn)行奶牛副結(jié)核檢測(cè)，結(jié)果顯示，樣品血清平均抗體陽(yáng)性率為4.29%[5]。林濤和陳豐偉分別對(duì)北京市規(guī)?；膛?chǎng)進(jìn)行副結(jié)核血清學(xué)檢測(cè)，結(jié)果顯示，血清平均抗體陽(yáng)性率分別為20.36%和13.39%[6]。山東省也是牛副結(jié)核病發(fā)生比較嚴(yán)重的地區(qū)，但目前鮮有對(duì)山東省各地區(qū)牛副結(jié)核病的血清學(xué)調(diào)查。為了解山東各地區(qū)副結(jié)核分枝桿菌的感染情況，本調(diào)查采用ELISA方法對(duì)2018年2月-2019年11月期間山東省9個(gè)地區(qū)的18個(gè)奶牛場(chǎng)2歲以上所有泌乳奶牛進(jìn)行了副結(jié)核病的血清抗體檢測(cè)，為山東省牛副結(jié)核病的綜合防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 被檢血清

樣品來(lái)自2018年2月-2019年11月期間山東省9個(gè)地區(qū)18個(gè)奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)，采樣對(duì)象為2歲以上泌乳牛，全群檢測(cè)，共采集疑似牛副結(jié)核病的血清樣品3 253份，其中濟(jì)南454份、濱州413份、濟(jì)寧165份、菏澤376份、聊城263份、青島270份、濰坊367份、威海184份、德州501份。其中大型養(yǎng)殖場(chǎng)（≥1 000頭）6個(gè)，樣品總數(shù)為848份；中型養(yǎng)殖場(chǎng)（501～999頭）6個(gè)，樣品總數(shù)為1 673份；小型養(yǎng)殖場(chǎng)（100～500頭）6個(gè)，樣品總數(shù)為732份。

1.2 檢測(cè)試劑盒

牛副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自IDEXX公司。

1.3 結(jié)果判定

抗體檢測(cè)按照IDEXX ELISA試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定每個(gè)孔的OD值。試驗(yàn)結(jié)果成立的條件為：陽(yáng)性對(duì)照OD450平均值≥0.350，且陽(yáng)性對(duì)照OD450的平均值與陰性對(duì)照OD450的比值≥3.00，檢測(cè)的結(jié)果有效，否則試驗(yàn)不成立，應(yīng)重新檢測(cè)。按照以下S/P百分值計(jì)算判定每個(gè)樣品的結(jié)果：S/P（%）=100×（OD樣本-OD陰性）/（OD陽(yáng)性-OD陰性）。當(dāng)樣品的S/P≤45%，判為抗體陰性，樣品45%＜S/P＜55%，判為抗體可疑；樣品的S/P≥55%，判為抗體陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用Origin2019軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行地區(qū)內(nèi)差異顯著性分析及置信區(qū)間上下限計(jì)算，P＞0.05為差異不顯著，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極其顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛副結(jié)核病總體調(diào)查結(jié)果

2018年2月-2019年11月期間山東省9個(gè)地區(qū)18個(gè)奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)共采集血清樣品3 253份，其中可疑病例21例，陽(yáng)性病例579例，總體陽(yáng)性率為17.80%（579/3253），其中2019年陽(yáng)性率為22.31%（441/1976）；2018年陽(yáng)性率為11.24%（138/1227）。

2.2 不同地區(qū)牛副結(jié)核病血清抗體的檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果表明，9個(gè)地區(qū)均檢出抗體陽(yáng)性奶牛，但不同地區(qū)陽(yáng)性率有所不同，其中濟(jì)南抗體陽(yáng)性率最高為40.75%（185/454），聊城次之，陽(yáng)性率為21.17%（57/263），威海抗體陽(yáng)性率最低為5.98%（11/184），見(jiàn)表1。根據(jù)軟件計(jì)算得出各地區(qū)區(qū)內(nèi)置信區(qū)間均差異不顯著（P＞0.05）。9個(gè)地區(qū)分布情況（圖1），濟(jì)南與其他地區(qū)均差異顯著（P＜0.05），威海與濰坊差異不顯著（P＞0.05），與其他地區(qū)差異顯著（P＜0.05）。9個(gè)地區(qū)之間的陽(yáng)性率差異顯著性情況見(jiàn)表2。說(shuō)明各地區(qū)之間的置信區(qū)間存在很大的差異，牛副結(jié)核病在山東省是普遍存在的。

表1 不同地區(qū)牛副結(jié)核病血清抗體的檢測(cè)結(jié)果

圖1 不同地區(qū)分布情況及牛副結(jié)核病血清抗體的檢測(cè)結(jié)果

表2 不同地區(qū)牛副結(jié)核病陽(yáng)性率差異顯著性情況

2.3 不同月份牛副結(jié)核病血清抗體的檢測(cè)結(jié)果

2018年2月-2019年11月期間，不同月份存在明顯差異，其中8月份最高，為80.00%，7月份次之，為52.70%，2月份最低，為6.27%（圖2）。

圖2 不同月份牛副結(jié)核病血清抗體的檢測(cè)結(jié)果

2.4 不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)牛副結(jié)核病血清抗體的檢測(cè)結(jié)果

6個(gè)大型養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率為15.57%（P＞0.05），6個(gè)中型養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率為20.14%（P＞0.05），6個(gè)小型養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率為15.30%（P＞0.05），中型養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率均大于大型和小型養(yǎng)殖場(chǎng)（表3），不同規(guī)模的養(yǎng)殖場(chǎng)之間牛副結(jié)核病陽(yáng)性率均差異不顯著（P＞0.05），見(jiàn)表4。

表3 不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)牛副結(jié)核病血清抗體的檢測(cè)結(jié)果

表4 不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)牛副結(jié)核病陽(yáng)性率差異顯著性情況

3 討論

牛副結(jié)核病是一種慢性消耗性疾病，主要臨床癥狀包括腹瀉、腸炎、體重迅速減輕、產(chǎn)奶量下降等，奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)一旦有牛感染了該病可以從糞便中排出大量的病原菌，因此，病牛和帶菌牛是該病重要的傳染源[7]。懷孕母畜一旦感染，犢牛通過(guò)吮吸母牛乳汁經(jīng)口感染，也可通過(guò)子宮垂直感染胎兒，子宮感染率可達(dá)50%以上[8]，致使胎兒先天感染，進(jìn)而引起死亡。崔金磊對(duì)我國(guó)部分?。▍^(qū)）規(guī)模化牧場(chǎng)牛副結(jié)核病的流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，牛副結(jié)核分枝桿菌抗體總體陽(yáng)性率為2.59%，其中安徽省8.00%、四川省5.23%、湖北省2.05%[9]。何利昆對(duì)遼寧省2017年14個(gè)地市奶牛場(chǎng)的860份牛血清樣品進(jìn)行了副結(jié)核病抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示，所檢血清樣品總陽(yáng)性率為5.6%[10]。韓猛利用提純副結(jié)核菌素進(jìn)行皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)的方法對(duì)2010-2012年山東省規(guī)?；膛?chǎng)進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，2012年牛副結(jié)核陽(yáng)性率由2010年的29.34%下降到14.93%[11]。本次調(diào)查結(jié)果顯示2018年2月-2019年11月山東省9個(gè)具有代表性的地區(qū)牛副結(jié)核總體陽(yáng)性率為17.80%，與韓猛的調(diào)查結(jié)果基本吻合，但陽(yáng)性率有所升高。調(diào)查結(jié)果表明，山東省牛副結(jié)核病的感染情況在國(guó)內(nèi)處于較高水平，應(yīng)引起飼養(yǎng)者和有關(guān)部門(mén)的重視。

山東省9個(gè)地區(qū)均檢出了奶牛副結(jié)核抗體陽(yáng)性病例，但各地區(qū)差異較大，其中濟(jì)南地區(qū)最高，為40.75%，這可能與該地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)的養(yǎng)殖模式、2歲以上泌乳牛的飼養(yǎng)管理水平、采樣季節(jié)有一定的關(guān)系；該地區(qū)的養(yǎng)殖模式以規(guī)?；B(yǎng)殖為主，但是某些養(yǎng)殖場(chǎng)的飼養(yǎng)方式比較粗放，管理不夠規(guī)范，對(duì)牛舍的消毒措施不到位，這些因素都有可能造成奶牛副結(jié)核病的發(fā)生。威海地區(qū)最低，為5.98%，可能與地理位置、氣候差異有關(guān)。該地區(qū)的氣候條件適宜，養(yǎng)殖場(chǎng)比較重視牛舍的衛(wèi)生、清潔與通風(fēng)換氣，生物安全防范措施到位，這些措施都降低了奶牛副結(jié)核病的發(fā)生幾率。各地區(qū)之間的置信區(qū)間存在很大差異，可能與牛群的健康狀況、各地的動(dòng)物疫病防控政策、養(yǎng)殖場(chǎng)規(guī)?；某潭龋约帮曫B(yǎng)管理有很大關(guān)系。牛副結(jié)核一年四季都有可能發(fā)生，但不同月份牛副結(jié)核血清抗體陽(yáng)性率差異較大。其中8月份最高，為80.00%，7月份其次，為52.70%，2月份最低，為6.27%，這可能與氣候條件有關(guān)，夏季天氣炎熱，溫度、濕度高，有利于各種昆蟲(chóng)、細(xì)菌的孳生，昆蟲(chóng)可作為傳播媒介，加快該病原菌的擴(kuò)散和傳播。本調(diào)查顯示，牛副結(jié)核病血清抗體在不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)陽(yáng)性率為15.30%～20.14%，中型養(yǎng)殖場(chǎng)的陽(yáng)性率最高，為20.14%，高于大型和小型養(yǎng)殖場(chǎng)，而大型和小型養(yǎng)殖場(chǎng)陽(yáng)性率差別不大。鄢志剛在2017年對(duì)上海崇明地區(qū)6個(gè)規(guī)模化奶牛場(chǎng)副結(jié)核抗體檢測(cè)結(jié)果表明，有4個(gè)奶牛場(chǎng)檢出血清陽(yáng)性牛，不同規(guī)模牛場(chǎng)的陽(yáng)性率分別為：大型牛場(chǎng)1.8%、中型牛場(chǎng)7.7%、小型牛場(chǎng)8.6%[12]，這與本調(diào)查結(jié)果略有差異，可能與樣本量大小有關(guān)。大型養(yǎng)殖場(chǎng)機(jī)械化程度較高，防控消毒措施、生物安全管理嚴(yán)格到位，陽(yáng)性率相對(duì)較低。小型養(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)數(shù)量少，易于飼養(yǎng)管理，所以陽(yáng)性率較低。中型養(yǎng)殖場(chǎng)之所以陽(yáng)性率較高，可能是養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)該病的重視程度不夠，防控措施不到位所致。

4 結(jié)語(yǔ)

牛副結(jié)核病在不同地區(qū)、不同規(guī)模的養(yǎng)殖場(chǎng)中一年四季都有可能發(fā)生，且病原對(duì)外界的抵抗力較強(qiáng)，可在環(huán)境中存活較長(zhǎng)時(shí)間，多數(shù)病畜呈隱性感染，可長(zhǎng)期向體外排菌，無(wú)明顯的臨床癥狀，不易引起養(yǎng)殖人員的重視，可給養(yǎng)殖場(chǎng)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失，也威脅著公共衛(wèi)生安全。由于該病沒(méi)有有效的治療措施，也沒(méi)有特異性的疫苗，因此，加強(qiáng)預(yù)防、盡早診斷、及時(shí)淘汰是控制該病流行的關(guān)鍵。養(yǎng)殖單位和防疫部門(mén)對(duì)此應(yīng)高度重視，要加強(qiáng)預(yù)防控制，定期檢疫，盡早發(fā)現(xiàn)病畜并及時(shí)隔離和淘汰，以實(shí)現(xiàn)牛群的凈化，促進(jìn)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。