摘 要：為保證抽檢結(jié)果準(zhǔn)確可靠，提高實(shí)驗(yàn)室檢測水平，本實(shí)驗(yàn)室參加了2021年遼寧省市場監(jiān)督管理局組織的能力驗(yàn)證。采用人員比對，2名檢驗(yàn)員同時依據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計數(shù)》（GB 4789.3—2016）對同一質(zhì)控樣品進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果表明，2名檢驗(yàn)員檢驗(yàn)結(jié)果基本一致，最終大腸菌群結(jié)果報告為3 600 CFU/mL，|Z|<2。

關(guān)鍵詞：大腸菌群;能力驗(yàn)證;人員比對;質(zhì)量控制

Analysis of Coliform Ability Verification Results in Food

CHONG Ting

（Liaoning Inspection， Examination and Certification Centre， Shenyang 110032， China）

Abstract： In order to ensure the accuracy and reliability of the sampling results and improve the laboratory testing level， our laboratory participated in the proficiency testing organized by the Liaoning Provincial Administration for Market Regulation in 2021. Using personnel comparison， two inspectors simultaneously inspected the same quality control sample according to GB 4789.3—2016. The results show that the inspection results of the two inspectors are basically the same， the final coliform group result was reported as 3 600 CFU/mL， |Z|<2.

Keywords： coliform; capability verification; personnel comparison; quality control

大腸菌群是一群革蘭氏陰性無芽孢桿菌，能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，一般用來作為食品是否受到糞便污染的衛(wèi)生指示菌[1]。糞便中可能含有腸道致病菌，如沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生李斯特氏菌等，食用受到糞便污染的食品具有潛在危害，所以大腸菌群檢測在食品微生物檢驗(yàn)中具有重要意義[2]。

能力驗(yàn)證是利用實(shí)驗(yàn)室間比對，來評價實(shí)驗(yàn)室檢測能力的一種重要方式[3]。本實(shí)驗(yàn)室報名參加遼寧省市場監(jiān)督管理局組織的食品中大腸菌數(shù)計數(shù)能力驗(yàn)證，按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計數(shù)》（GB 4789.3—2016）檢驗(yàn)，2名檢驗(yàn)員對同一質(zhì)控樣品進(jìn)行檢驗(yàn)。通過參加能力驗(yàn)證，提高本實(shí)驗(yàn)室檢測人員的技術(shù)水平，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，確保出具的檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 材料與方法

1.1 樣品

遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)放的編碼為W033質(zhì)控樣。在生物安全柜內(nèi)將含有大腸菌群的西林瓶打開，加入少量（2～4 mL）無菌生理鹽水進(jìn)行溶解，待溶解后，吸出放入無菌瓶中，反復(fù)用余下的無菌生理鹽水清洗西林瓶內(nèi)壁，回收無菌生理鹽水，并放入上述無菌瓶中，稀釋液合計40 mL，此溶液即為待測樣品。吸取待測樣品25 mL加入225 mL無菌生理鹽水中，充分溶解，均質(zhì)混勻。

1.2 儀器與試劑

KB240型電熱恒溫培養(yǎng)箱（德國Binder公司）;BSC-1300ⅡA2型生物安全柜（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）;CX31型顯微鏡（日本Olympus公司）;KG-SX-700高壓滅菌鍋（日本Tomy Kogoy公司）;均質(zhì)器（法國梅里埃公司）;MICROFLEX LT/SH基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜儀（德國布魯克公司）。

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（Violet Red Agar，VRBA）、煌綠乳糖膽鹽（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）、肉湯（美國BD公司）;伊紅美藍(lán)瓊脂（Eosin-Methylene Blue Agar）、革蘭氏染色液試劑盒（北京陸橋技術(shù)股份有限公司）;氯化鈉（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;α-氰基-4-羥基肉桂酸（α-cyano-4-hydroxycinnamic acid，HCCA）（德國Bruker公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

依據(jù)作業(yè)指導(dǎo)書以及《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計數(shù)》（GB 4789.3—2016）第二法大腸菌群平板計數(shù)法，2名檢驗(yàn)員同時進(jìn)行檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 可疑菌落計數(shù)

VRBA平板上有3種菌落形態(tài)，各不同菌落形態(tài)見表1。不同菌落形態(tài)的菌落數(shù)見表2。

2.2 確證試驗(yàn)

選取1∶10和1∶100稀釋度VRBA平板上各10個不同類型典型和可疑菌落，接種至BGLB肉湯管中，36 ℃培養(yǎng)24～48 h，觀察產(chǎn)氣情況，結(jié)果見圖1，凡BGLB肉湯管產(chǎn)氣，即可報告為大腸菌群陽性（+），結(jié)果見表3。為了確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠，將典型菌落和可疑菌落分別接種至EMB平板，同時革蘭氏染色鏡檢觀察，結(jié)果分別見圖2和圖3。

2.3 樣品結(jié)果報告

經(jīng)證實(shí)，大腸菌群陽性的試管比例乘以相應(yīng)稀釋度VRBA平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每mL樣品中大腸菌群結(jié)果，因此樣品W033結(jié)果報告為

3 600 CFU/mL。

3 結(jié)論與討論

GB 4789.3—2016標(biāo)準(zhǔn)中第一法MPN計數(shù)適用于檢測大腸菌群含量較低的食品;第二法平板計數(shù)法適用于檢測大腸菌群含量較高的食品，本次試驗(yàn)采取平板計數(shù)法進(jìn)行檢驗(yàn)[4]。平板計數(shù)法用結(jié)晶紫中性紅膽鹽培養(yǎng)，分2次傾注平板。第1次傾注平板時要有一定的厚度，給細(xì)菌提供充足的營養(yǎng)。第2次傾注平板，能防止細(xì)菌蔓延生長;降低需氧菌生長速度;截留大腸菌群產(chǎn)生的氣體，觀察產(chǎn)氣情況。

BGLB發(fā)酵管有明顯不同，可疑菌落接種的BGLB肉湯管培養(yǎng)24 h無變化，培養(yǎng)至48 h時，不僅產(chǎn)氣，而且BGLB肉湯變黃。為了確證該菌是否屬于大腸菌群，將產(chǎn)氣不變色和產(chǎn)氣變黃的BGLB肉湯均劃線接種至EMB平板，36 ℃培養(yǎng)24 h，產(chǎn)氣不變色的BGLB肉湯劃線接種在EMB平板上生長的菌落具有大腸桿菌的典型特征，紫黑色菌落，帶有綠色金屬光澤。產(chǎn)氣變黃的BGLB肉湯劃線接種在EMB平板上生長的菌落呈現(xiàn)淡粉色，表面濕潤。經(jīng)革蘭氏染色鏡檢VRBA平板上生長的3種不同形態(tài)的菌均為革蘭氏陰性桿菌。采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜對3種菌進(jìn)行快速鑒定，鑒定結(jié)果顯示典型菌落1為大腸桿菌（分值2.235），典型菌落2為大腸桿菌（分值2.367），可疑菌落3為克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌，分值2.286）。克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）屬于腸桿菌屬，其特征符合大腸菌群的定義，故其數(shù)量應(yīng)計算在結(jié)果中[5]。

參加能力驗(yàn)證時應(yīng)注意：①運(yùn)輸過程中溫度控制是否達(dá)標(biāo)，溫度波動過大，對計數(shù)型質(zhì)控樣菌數(shù)有較大影響;②收到樣品后要第一時間冷藏保存，若冷凍保存，易導(dǎo)致結(jié)果異常;③樣品在水化前是否使樣品恒溫到室溫，若快速升溫易造成細(xì)胞破裂，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差[6];④均質(zhì)時間要適宜，若均質(zhì)時間過短，冷凍干燥的樣品溶解不充分，其中的菌體團(tuán)沒有完全分散開，易造成結(jié)果偏低;⑤應(yīng)在15 min內(nèi)完成試驗(yàn)，操作時間過長會導(dǎo)致菌體死亡，導(dǎo)致結(jié)果偏低。

經(jīng)能力驗(yàn)證組織機(jī)構(gòu)反饋，本實(shí)驗(yàn)室W033大腸菌群的檢測結(jié)果|Z|<2，結(jié)果滿意[7]。本次能力采取人員比對來減小操作誤差，以確保檢測結(jié)果可靠。2名檢驗(yàn)員檢測結(jié)果基本一致，說明本次能力驗(yàn)證基本無人為誤差。本次能力驗(yàn)證所用的培養(yǎng)基及試劑均經(jīng)過《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》（GB 4789.28—2013）驗(yàn)證，符合試驗(yàn)要求。通過本次能力驗(yàn)證，可提高本實(shí)驗(yàn)室大腸菌群檢測能力以及本實(shí)驗(yàn)室的競爭力。

參考文獻(xiàn)

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