劉彩娟，任 亮，付文國(guó)，王永信

原生態(tài)牧業(yè)公司，黑龍江齊齊哈爾 161000

0 引言

霉菌毒素（Mycotoxins）是由曲霉屬、鏈格孢屬、青霉屬、麥角屬和鐮刀菌屬等絲狀真菌在生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的有毒次級(jí)代謝產(chǎn)物[1]，可造成飼料品質(zhì)降低，嚴(yán)重影響反芻動(dòng)物生產(chǎn)。尤其是黃曲霉毒素會(huì)損害奶牛肝臟功能，其代謝產(chǎn)物黃曲霉毒素M1會(huì)影響乳品質(zhì)；玉米赤霉烯酮會(huì)造成奶牛繁殖障礙；嘔吐毒素會(huì)造成奶牛胃腸道出血，采食量下降，體細(xì)胞數(shù)上升，提高乳房炎發(fā)病率，增加圍產(chǎn)期奶牛代謝疾病的風(fēng)險(xiǎn)。而食用含有霉菌毒素污染的奶、肉等會(huì)影響人的健康[2]。因此，實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)了解飼料中主要霉菌毒素的污染狀況，進(jìn)行有針對(duì)性的防控，已經(jīng)成為牧場(chǎng)重要的工作之一。因此，本文使用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）對(duì)黑龍江省5 家規(guī)?；翀?chǎng)飼料原料進(jìn)行了6 種常見(jiàn)霉菌毒素的檢測(cè)，分析不同飼料原料的霉菌毒素污染情況，并為飼料原料中霉菌毒素污染的防控提出建議，為奶牛養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)健康發(fā)展提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源

2021年1—12月黑龍江省5 家規(guī)?；翀?chǎng)采購(gòu)的飼料原料及庫(kù)存飼料。

1.2 樣品采集

不同飼料原料根據(jù)其飼料運(yùn)輸和存貯狀態(tài)對(duì)應(yīng)采樣量，采集方式及采樣點(diǎn)，見(jiàn)表1。

表1 飼料原料采樣量、采集方式及采樣點(diǎn)

1.3 試樣的制備

將采集的樣品，用“四分法”混合后，均分為兩份：一份為留存樣品（水分大的飼料需要進(jìn)行烘干后留存）；一份為檢測(cè)樣品，粉碎后全部通過(guò)40目篩，裝于密封塑料袋中，待稱量用。

1.4 試劑及儀器

黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、赭曲霉毒素A、伏馬毒素（B1+B2）、T-2毒素ELISA檢測(cè)試劑盒，拜發(fā)分析系統(tǒng)銷售（北京）有限公司；甲醇（分析純），天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；微量移液器，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司，ML204T/02十萬(wàn)分之一電子分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司；FW-100高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，天津泰斯特；Bio-Tek ELX808酶標(biāo)儀，美國(guó)寶特公司。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)整理，根據(jù)霉菌毒素試劑盒檢出限為參考，通過(guò)霉菌毒素分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)，黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、赭曲霉毒素A、伏馬毒素（B1+B2）、T-2毒素檢測(cè)限分別為1 μg/kg、222 μg/kg、222 μg/kg、5 μg/kg、222 μg/kg、50 μg/kg，高于檢出限值視為陽(yáng)性。根據(jù)《GB13078—2017飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》，黃曲霉毒素B1允許量≤30 μg/kg，泌乳期精料補(bǔ)充料黃曲霉毒素B1允許量≤10 μg/kg；玉米赤霉烯酮允許量≤500 μg/kg；嘔吐毒素允許量≤3 000 μg/kg，泌乳期精料補(bǔ)充料嘔吐毒素允許量≤1 000 μg/kg，赭曲霉毒素A允許量≤100 μg/kg；伏馬毒素（B1+B2）允許量≤60 000 μg/kg；T-2毒素允許量≤500 μg/kg。

2 結(jié)果

2.1 2021年規(guī)模化牧場(chǎng)飼料原料霉菌毒素污染情況

從表2可以看出，規(guī)?；翀?chǎng)的飼料原料霉菌毒素檢出率較高的主要是嘔吐毒素和伏馬毒素，陽(yáng)性檢出率分別為35%、14%。其中嘔吐毒素污染最高值超過(guò)6 000 μg/kg，伏馬毒素（B1+B2）污染最高值達(dá)2 390 μg/kg。值得注意的是，玉米赤霉烯酮雖檢出率為2%，但其污染最高值超過(guò)800 μg/kg。黃曲霉毒素B1、T-2毒素均有檢出，但相對(duì)值較低，分別為3%和2%。赭曲霉毒素A的檢出率最低，為0%。

表2 2021年規(guī)?；翀?chǎng)飼料原料霉菌毒素污染情況

2.2 2021年不同規(guī)模化牧場(chǎng)飼料原料霉菌毒素污染情況

由表3可以得出，不同規(guī)模化牧場(chǎng)霉菌毒素污染情況，除赭曲霉毒素A均未檢出外，其余霉菌毒素均有檢出，但不同牧場(chǎng)呈現(xiàn)不同規(guī)律性。A牧場(chǎng)黃曲霉毒素B1陽(yáng)性檢出率為5.62%，污染最高值為6.45 μg/kg；玉米赤霉烯酮陽(yáng)性檢出率1.35%，污染最高值為659.20 μg/kg；嘔吐毒素陽(yáng)性檢出率最高為44.66%，陽(yáng)性平均值為1 983 μg/kg，污染最高值為2 199 μg/kg；伏馬毒素（B1+B2）陽(yáng)性檢出率分別為16.33%，陽(yáng)性平均值984μg/kg，污染最高值1 043.55 μg/kg；T-2毒素檢出率為1.32%，陽(yáng)性平均值102.02 μg/kg，污染最高值為137.68 μg/kg。B牧場(chǎng)黃曲霉毒素B1陽(yáng)性檢出率為0.96%，污染最高值為5.59 μg/kg；玉米赤霉烯酮陽(yáng)性檢出率4.15%，污染最高值為572.40 μg/kg；嘔吐毒素陽(yáng)性檢出率為35.07%，陽(yáng)性平均值為1 415 μg/kg，污染最高值為6 000 μg/kg以上；伏馬毒素（B1+B2）陽(yáng)性檢出率為19.72%，陽(yáng)性平均值1 103.10 μg/kg，污染最高值2 390 μg/kg；T-2毒素檢出率為0.80%，污染最高值為128.60 μg/kg。C牧場(chǎng)黃曲霉毒素B1陽(yáng)性檢出率為0%；玉米赤霉烯酮陽(yáng)性檢出率0.83%，污染最高值為790 μg/kg；嘔吐毒素陽(yáng)性檢出率為22.30%，陽(yáng)性平均值為1 532.42 μg/kg，污染最高值為6 000 μg/kg以上；伏馬毒素（B1+B2）陽(yáng)性檢出率為16.20%，污染最高值1 120 μg/kg；T-2毒素檢出率為6.30%，污染最高值為125.45 μg/kg。D牧場(chǎng)黃曲霉毒素B1陽(yáng)性檢出率為4.72%，污染最高值為5.92 μg/kg；玉米赤霉烯酮陽(yáng)性檢出率0%；嘔吐毒素陽(yáng)性檢出率為28.78%，陽(yáng)性平均值為1 700 μg/kg，污染最高值為3 999 μg/kg；伏馬毒素（B1+B2）陽(yáng)性檢出率為3.48%，陽(yáng)性平均值600 μg/kg，污染最高值714 μg/kg；T-2毒素檢出率為0%。E牧場(chǎng)黃曲霉毒素B1陽(yáng)性檢出率為0.1%，污染最高值為1.23 μg/kg；玉米赤霉烯酮陽(yáng)性檢出率2.2%，陽(yáng)性平均值753 μg/kg，污染最高值為800 μg/kg以上；嘔吐毒素陽(yáng)性檢出率為30.1%，陽(yáng)性平均值為1 861 μg/kg，污染最高值為4280 μg/kg；伏馬毒素（B1+B2）陽(yáng)性檢出率為6.2%，污染最高值733 μg/kg；T-2毒素陽(yáng)性檢出率為3.1%，污染最高值為124.56 μg/kg。

表3 2021年不同規(guī)?；翀?chǎng)飼料原料霉菌毒素污染情況

從整體來(lái)看，五個(gè)牧場(chǎng)的嘔吐毒素風(fēng)險(xiǎn)均較高，其中A牧場(chǎng)、B牧場(chǎng)陽(yáng)性檢出率較高，但B牧場(chǎng)、C牧場(chǎng)污染最高值相對(duì)較高，高于《GB13078—2017 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》上限3 000 μg/kg，A牧場(chǎng)、B牧場(chǎng)、C牧場(chǎng)、D牧場(chǎng)、E牧場(chǎng)整體均值低于《GB13078—2017 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》上限3 000 μg/kg，但在泌乳牛使用中，需要特別注意嘔吐毒素的限量，不能使用檢測(cè)值高的飼料原料。玉米赤霉烯酮雖陽(yáng)性檢出率較低，但C牧場(chǎng)、E牧場(chǎng)陽(yáng)性平均值和污染最高限高于《 GB13078—2017 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》上限值500 μg/kg，尤其是E牧場(chǎng)，污染最高限較高。黃曲霉毒素B1、伏馬毒素（B1+B2）、T-2各牧場(chǎng)陽(yáng)性檢出率相對(duì)較低，風(fēng)險(xiǎn)性相對(duì)較低。五個(gè)牧場(chǎng)雖同在黑龍江省，但A牧場(chǎng)、B牧場(chǎng)、C牧場(chǎng)處于相同氣候環(huán)境，溫濕度相對(duì)D牧場(chǎng)較高，且采購(gòu)貨物來(lái)源地不相同，這可能是導(dǎo)致差異較大的原因。

2.3 不同飼料原料霉菌毒素污染情況

由表4可知，24 種不同的飼料原料檢出霉菌毒素種類不同，有19 種飼料原料嘔吐毒素均有檢出，17 種飼料原料伏馬毒素均有檢出，規(guī)?；翀?chǎng)奶牛飼養(yǎng)常用的飼料原料青貯，精補(bǔ)料，全棉籽，玉米面根據(jù)品種不同呈現(xiàn)出不同的規(guī)律性?？梢愿鶕?jù)檢出規(guī)律性進(jìn)行針對(duì)性的篩查。

表4 不同飼料原料霉菌毒素污染情況

3 討論

霉菌毒素會(huì)破壞動(dòng)物腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性，損傷其免疫和抗氧化系統(tǒng)，使腸道菌群和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝發(fā)生紊亂，進(jìn)而影響動(dòng)物機(jī)體健康[3]。飼料中常見(jiàn)且危害較大的霉菌毒素有黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素等。這三種霉菌毒素能夠降低動(dòng)物免疫力，具有致癌性、基因毒性和生殖毒性等[4～7]，而且疊加毒性遠(yuǎn)大于單一毒素的作用[8]，因?yàn)椴煌拿咕舅囟加刑囟ǖ淖饔冒悬c(diǎn)，且霉菌毒素間的協(xié)同作用會(huì)加重免疫損傷。Luongo等[9]的研究證明了上述觀點(diǎn)，指出玉米赤霉烯酮（α-ZEN）和伏馬毒素B1（FB1）存在協(xié)同作用，會(huì)損害動(dòng)物的抗病毒能力。

黑龍江省規(guī)?；翀?chǎng)2021年的黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素整體陽(yáng)性檢出率（3%、2%、35%），比王倩等[10]2020年調(diào)查主要來(lái)自山東、河南、江蘇、湖南、四川等地的原料飼料污染黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素（87.69%、92.49%、94.59%）檢出率低，有可能與所收集的飼料原料來(lái)源地區(qū)有關(guān)，也可能和不同年份的季節(jié)氣候變化有關(guān)。黑龍江省規(guī)?；翀?chǎng)目前存在風(fēng)險(xiǎn)較高的霉菌毒素是嘔吐毒素，同時(shí)應(yīng)注意嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮污染最高值較高的飼料原料，對(duì)該種飼料原料進(jìn)行重點(diǎn)防控；赭曲霉毒素A均未檢出，說(shuō)明該地區(qū)赭曲霉毒素A風(fēng)險(xiǎn)性較小，可以放寬該種霉菌毒素飼料原料的篩查。國(guó)內(nèi)關(guān)于伏馬毒素（B1+B2）和T-2毒素相關(guān)的數(shù)據(jù)和研究報(bào)道相對(duì)較少，但因其與其他毒素具有協(xié)同作用，也應(yīng)引起重視，對(duì)全棉籽、泰瑞嘉、糖蜜、燕麥青貯、羊草等飼料原料進(jìn)行重點(diǎn)篩查。

根據(jù)5 個(gè)規(guī)?；翀?chǎng)的飼料原料霉菌毒素檢出情況不同，以及不同飼料原料檢出霉菌毒素種類不同，因此針對(duì)霉菌毒素的防控要根據(jù)不同地區(qū)，不同牧場(chǎng)的飼料原料使用類型制定相應(yīng)的防控方案，做好飼料原料入場(chǎng)，存貯和飼喂管理，最好做到“一場(chǎng)一策”。具體建議如下：一是抓好源頭控制，原料采購(gòu)選擇時(shí)避開(kāi)污染嚴(yán)重的原料產(chǎn)區(qū)，優(yōu)先選擇和采購(gòu)氣候環(huán)境好的地區(qū)所生產(chǎn)的原料，原料采購(gòu)時(shí)選擇質(zhì)量穩(wěn)定的供應(yīng)商，可要求供應(yīng)商提供相關(guān)檢測(cè)報(bào)告；原料入場(chǎng)驗(yàn)收時(shí)，要根據(jù)不同飼料原料，設(shè)立內(nèi)控預(yù)警機(jī)制，進(jìn)行霉菌毒素的重點(diǎn)篩查，加大檢測(cè)頻次，及時(shí)識(shí)別風(fēng)險(xiǎn)較高的飼料原料，杜絕進(jìn)入牧場(chǎng)。二是做好庫(kù)存管理，對(duì)于水分較高容易滋生霉菌的的飼料原料要注意存貯環(huán)境，防潮、防雨，加強(qiáng)通風(fēng)，建議相對(duì)濕度低于50%，溫度控制在30 ℃以下；根據(jù)牧場(chǎng)的飼料用量、存貯能力和儲(chǔ)存環(huán)境等確定購(gòu)買飼料原料數(shù)量，盡量縮短飼料原料的儲(chǔ)存時(shí)間，同時(shí)做到“先進(jìn)先出”。對(duì)庫(kù)存飼料原料加大監(jiān)控檢測(cè)頻次，尤其是青貯等飼料，在使用前要重新檢測(cè)毒素指標(biāo)，處于低風(fēng)險(xiǎn)時(shí)才能安排飼喂。三是加強(qiáng)飼喂環(huán)境衛(wèi)生和消毒管理。重視奶牛舍內(nèi)的環(huán)境衛(wèi)生，包括飼喂道、飲水槽、糞道、臥床等；對(duì)于飼料存貯區(qū)、飼喂道等防止漏水等出現(xiàn)淋濕，堅(jiān)持每天巡查，對(duì)被水淋濕、發(fā)霉和結(jié)塊的飼料原料及時(shí)清理；根據(jù)外界氣溫，合理安排帶牛舍內(nèi)消毒的頻率和時(shí)間。