強(qiáng) 浩，梁 鵬，孟 科，榮 軒，馮登偵

(寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，銀川 750021)

灘羊是寧夏地區(qū)優(yōu)勢特色品種，不僅裘皮品質(zhì)好，而且肉質(zhì)鮮嫩多汁[1-2]。但灘羊生長發(fā)育慢，產(chǎn)肉量較低，一般一年一產(chǎn)且為單胎，限制了羊產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，故引進(jìn)小尾寒羊，又以杜泊羊?yàn)榻K端父本進(jìn)行三元雜交，培育出生長發(fā)育快、產(chǎn)肉性能高、肉質(zhì)風(fēng)味優(yōu)和繁殖力較高的肉羊新品種(系)，以推動(dòng)當(dāng)?shù)氐娜庋虍a(chǎn)業(yè)發(fā)展。

胰島素樣生長因子1受體(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)是一種細(xì)胞表面受體，屬于酪氨酸激酶受體超家族，同時(shí)也是胰島素樣生長因子 (insulin-like growth factor,IGF)系統(tǒng)非常重要的組成部分，IGF系統(tǒng)包括IGF配體(IGF1、IGF2)、IGF受體(IGFR)和IGF結(jié)合蛋白(IGFBPs)，在所有脊椎動(dòng)物的神經(jīng)內(nèi)分泌生長發(fā)育調(diào)節(jié)中起著核心的作用[3-5]。IGF1R由2個(gè)α亞基和2個(gè)β亞基構(gòu)成，α和β亞基均由單個(gè)mRNA前體合成，前體糖基化，蛋白水解切割，并通過半胱氨酸鍵交聯(lián)以形成功能性跨膜αβ鏈，α鏈位于細(xì)胞外，而β亞基跨膜，負(fù)責(zé)配體刺激后的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。IGF1R基因多態(tài)性對(duì)動(dòng)物的生長有一定的影響，Wu等[6]利用PCR-RFLP方法檢測發(fā)現(xiàn)邊雞IGF1R基因存在2個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，分別位于外顯子2和3上，在8、14、16和18周時(shí)，具有AluⅠ酶切位點(diǎn)的AA基因型個(gè)體體重高于AB基因型個(gè)體；Hin1 Ⅰ酶切位點(diǎn)的CD基因型個(gè)體在6、8、10、12及14周時(shí)體重高于CC基因型個(gè)體。通過生物進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)，絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物IGF1R基因很保守[7]，其廣泛表達(dá)于動(dòng)物的肌肉、皮膚、大腦、骨骼等組織內(nèi)[8-11]。IGF1R是IGF1和IGF2發(fā)揮功能的關(guān)鍵受體[12-14]，IGF1R以高親和力結(jié)合IGF1，同時(shí)也可與IGF2結(jié)合，盡管親和力較低，但在胎兒發(fā)育過程中也具有促進(jìn)有絲分裂的作用。IGF1R下游主要激活PI3K/Akt、mTOR、MAPK/ERK和JAK/STAT等信號(hào)通路[15-16]，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞周期、自噬和凋亡，是細(xì)胞正常生長所必需的調(diào)節(jié)受體。

本試驗(yàn)選取灘羊、杜泊羊和小尾寒羊3個(gè)綿羊品種作為研究對(duì)象，使用液相捕獲測序[17-18]對(duì)IGF1R基因靶向測序，分析IGF1R基因在3個(gè)綿羊品種中的單核苷酸多態(tài)性(SNP)和插入缺失(InDel)，并進(jìn)行差異分析，篩選出3個(gè)群體間差異顯著的位點(diǎn)后，利用飛行質(zhì)譜檢測方法在其雜交后代中進(jìn)行SNP分型，并與生長性狀表型數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，以期為今后的品種選育和改良提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

隨機(jī)選取杜泊羊(D，n=30)、灘羊(T，n=30)和小尾寒羊(H，n=31)為試驗(yàn)動(dòng)物，91只羊均為健康、發(fā)育正常的成年羊，使用EDTA抗凝采血管頸靜脈采血，-20 ℃保存，用于IGF1R基因靶向測序，篩選差異位點(diǎn)。隨機(jī)選取3個(gè)品種健康、發(fā)育正常的子代羊383只(表1)，統(tǒng)一取右耳耳尖組織，浸于75%酒精中，-20 ℃保存，用于SNP分型及關(guān)聯(lián)分析。

表1 不同雜交后代群體數(shù)量及來源

1.2 方法

1.2.1 基因檢測 通過查閱國內(nèi)外文獻(xiàn)和Ensemble數(shù)據(jù)庫，確定IGF1R基因上28個(gè)與生長發(fā)育相關(guān)的SNPs突變，由北京康普森農(nóng)業(yè)科技股份有限公司進(jìn)行引物和芯片設(shè)計(jì)，采用捕獲測序技術(shù)對(duì)本試驗(yàn)91個(gè)樣本進(jìn)行檢測，測序結(jié)果與綿羊參考基因組(Oar_rambouillet_v 1.0)進(jìn)行比對(duì)分析。

1.2.2 SNP、InDel檢測及注釋 采用SAMTOOLS軟件進(jìn)行個(gè)體SNP及InDel檢測，并利用ANNOVAR軟件對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行注釋。

1.2.3 生長發(fā)育性能測定 測定383只子代羊初生、3月齡的體重、體高(鬐甲頂點(diǎn)至地面的垂直高度)、體斜長(肩端至坐骨結(jié)節(jié)的后端的距離)、胸圍(沿肩胛骨后緣量取的胸部周徑)。

1.2.4 SNP基因分型及關(guān)聯(lián)分析 根據(jù)篩選的SNPs位點(diǎn)，將383只子代羊耳組織交由北京康普森農(nóng)業(yè)科技股份有限公司使用飛行質(zhì)譜分型檢測技術(shù)進(jìn)行SNP基因分型，并與不同階段生長性狀表型數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

使用Excel 2019對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，計(jì)算各位點(diǎn)的基因頻率和基因型頻率，以及群體遺傳學(xué)參數(shù)：純合度(Ho)、雜合度(He)、有效等位基因數(shù)(Ne)、多態(tài)信息含量(PIC)，并進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，分析其是否處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)。

利用SPSS 22.0軟件對(duì)個(gè)體基因型與生長性狀進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVA)，使用Haploview 4.2軟件進(jìn)行位點(diǎn)之間的連鎖不平衡分析。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，以P<0.05為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 3個(gè)綿羊品種IGF1R基因突變位點(diǎn)篩選

對(duì)3個(gè)綿羊品種共計(jì)91只綿羊IGF1R基因進(jìn)行靶向測序，共檢測到347個(gè)突變位點(diǎn)，包含335個(gè)SNPs，12個(gè)InDel，有2個(gè)位點(diǎn)同時(shí)發(fā)生了SNP和InDel突變。其中，內(nèi)含子區(qū)突變位點(diǎn)333個(gè)，外顯子區(qū)突變位點(diǎn)8個(gè)，5′-UTR區(qū)突變2個(gè)，3′-UTR突變2個(gè)。共檢測到175種突變類型，有93種突變發(fā)生頻次低于5次，基因型頻率過低，群體間無差異，無需進(jìn)行下一步分析，由于內(nèi)含子區(qū)域的位點(diǎn)較多，所以本試驗(yàn)僅對(duì)外顯子區(qū)SNPs和品種間差異顯著的位點(diǎn)進(jìn)行研究，共8個(gè)：g.7628315 T>C、g.7628528 T>C、g.7628690 C>T、g.7833817 C>T、g.7836687 C>T、g.7840691 T>C、g.7855904 C>G、g.7872277 C>T(表2)。

表2 IGF1R基因突變區(qū)域和位點(diǎn)數(shù)

2.2 3個(gè)群體IGF1R基因外顯子區(qū)域突變位點(diǎn)遺傳結(jié)構(gòu)分析

由表3可知，除g.7855904 C>G位點(diǎn)發(fā)生顛換外，其余7個(gè)SNPs位點(diǎn)的突變類型均為轉(zhuǎn)換，且8個(gè)SNPs位點(diǎn)均為同義突變，編碼的氨基酸未發(fā)生改變。g.7628315 T>C和g.7840691 T>C位點(diǎn)在群體間差異顯著，其余6個(gè)SNPs位點(diǎn)在群體間表現(xiàn)為差異極顯著。8個(gè)SNPs位點(diǎn)在3個(gè)群體中均處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(小尾寒羊g.7628690 C>T位點(diǎn)除外)。基因型頻率和基因頻率顯示，8個(gè)SNPs位點(diǎn)在3個(gè)群體中野生型均多于突變型，杜泊羊在g.7836687 C>T位點(diǎn)，灘羊在g.7628528 T>C、g.7628690 C>T和g.7872277 C>T位點(diǎn)均未發(fā)生突變。多態(tài)信息含量數(shù)據(jù)顯示，g.7628528 T>C和g.7872277 C>T位點(diǎn)在3個(gè)群體中均表現(xiàn)為低度多態(tài)(PIC<0.25)，其中杜泊羊的雜合度和有效等位基因數(shù)均高于小尾寒羊和灘羊；g.7833817 C>T位點(diǎn)在3個(gè)群體中均表現(xiàn)為中度多態(tài)(0.25C和g.7855904 C>G位點(diǎn)在杜泊羊和小尾寒羊2個(gè)群體中均表現(xiàn)為中度多態(tài)，在灘羊群體中表現(xiàn)為低度多態(tài)，其中杜泊羊的雜合度和有效等位基因數(shù)均高于小尾寒羊和灘羊；g.7836687 C>T和g.7840691 T>C 2個(gè)位點(diǎn)均在杜泊羊和小尾寒羊群體中均表現(xiàn)為低度多態(tài)，在灘羊群體中表現(xiàn)為中度多態(tài)，灘羊在g.7836687 C>T位點(diǎn)的雜合度和有效等位基因數(shù)高于小尾寒羊，灘羊和小尾寒羊在g.7840691 T>C位點(diǎn)的雜合度和有效等位基因數(shù)高于杜泊羊；g.7628690 C>T位點(diǎn)在杜泊羊群體中表現(xiàn)為中度多態(tài)，在灘羊、小尾寒羊群體中表現(xiàn)為低度多態(tài)，其中杜泊羊的雜合度和有效等位基因數(shù)均高于小尾寒羊和灘羊。

2.3 試驗(yàn)群體質(zhì)譜分型

利用飛行質(zhì)譜法對(duì)群體間差異極顯著的6個(gè)SNPs位點(diǎn)及差異顯著的2個(gè)SNPs位點(diǎn)在子代F1、F2、H1、H2中進(jìn)行SNP基因分型，結(jié)果顯示，g.7628528 T>C、g.7628690 C>T、g.7833817 C>T、g.7628315 T>C、g.7840691 T>C和g.7872277 C>T位點(diǎn)均存在TT、TC(CT)、CC 3種基因型，g.7836687 C>T位點(diǎn)只有CC和CT 2種基因型，g.7855904 C>G位點(diǎn)存在CC、CG、GG 3種基因型。g.7833817 C>T、g.7836687 C>T和g.7855904 C>G 3個(gè)位點(diǎn)的分型圖見圖1。

A，g.7833817 C>T；B，g.7836687 C>T；C，g.7855904 C>G圖1 IGF1R基因外顯子SNPs位點(diǎn)基因分型結(jié)果Fig.1 Genotyping results of IGF1R gene exon SNPs

2.4 IGF1R基因外顯子突變位點(diǎn)與綿羊生長性狀的關(guān)聯(lián)分析

對(duì)IGF1R基因外顯子SNPs位點(diǎn)不同基因型個(gè)體與綿羊初生、3月齡生長性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果見表4～11。由表4～11可知，g.7628528 T>C位點(diǎn)在F2代群體中，TC基因型個(gè)體3月齡體重、胸圍顯著高于TT基因型(P<0.05)，在H2代群體中，TC基因型個(gè)體初生胸圍顯著高于TT基因型(P<0.05)；g.7628690 C>T位點(diǎn)在H2代群體中，TC基因型個(gè)體初生胸圍顯著高于CC基因型(P<0.05)；g.7833817 C>T位點(diǎn)在F2代群體中，TC基因型個(gè)體3月齡體高顯著高于TT和CC基因型(P<0.05)，TT、CC基因型間差異不顯著(P>0.05)。

g.7836687 C>T位點(diǎn)在F1代群體中，TC基因型個(gè)體3月齡體重、胸圍均顯著高于CC基因型(P<0.05)，在F2代群體中， CC基因型個(gè)體3月齡體高顯著高于TC基因型(P<0.05)；g.7855904 C>G位點(diǎn)在F1代群體中，CC基因型個(gè)體3月齡胸圍顯著高于GG基因型(P<0.05)，與CG基因型間差異不顯著(P>0.05)，在F2代群體中，CC和CG基因型個(gè)體初生胸圍顯著高于GG基因型(P<0.05)；g.7872277 C>T位點(diǎn)在H1代群體中，CC基因型個(gè)體3月齡胸圍顯著高于CT基因型(P<0.05)，H2代群體中，CT基因型個(gè)體初生體重、體高、胸圍均顯著高于CC基因型(P<0.05)，而CC基因型個(gè)體3月齡體高顯著高于CT基因型(P<0.05)；g.7628315 T>C位點(diǎn)在F1群體中，TT基因型個(gè)體3月齡體高顯著高于TC和CC基因型(P<0.05)，TT、CC基因型個(gè)體3月齡體斜長顯著高于TC基因型(P<0.05)，TT、CC基因型間差異不顯著(P>0.05)，在H2代群體中，TT基因型個(gè)體3月齡體高顯著高于TC基因型(P<0.05)；g.7840691 T>C位點(diǎn)基因型與各群體階段生長性狀均無顯著關(guān)聯(lián)(P>0.05)。

2.5 連鎖不平衡分析

使用Haploview軟件對(duì)所有SNPs位點(diǎn)進(jìn)行連鎖不平衡分析，并構(gòu)建單倍型，結(jié)果見圖2。由圖2可知，這8個(gè)SNPs位點(diǎn)存在2處強(qiáng)連鎖：其中，g.7628315 T>C和g.7628528 T>C位點(diǎn)形成了Block 1區(qū)域，產(chǎn)生3種單倍型：CT、TT和CC，分別命名為：H1、H2和H3，占比分別為0.227、0.668和0.103；g.7833817 C>T和g.7840691 T>C位點(diǎn)形成了Block 2區(qū)域，產(chǎn)生3種單倍型：CC、CT和TT，分別命名為：H4、H5和H6，占比分別為0.101、0.508和0.392。將g.7628315 T>C和g.7628528 T>C位點(diǎn)產(chǎn)生的3種單倍型組合后形成了6種基因型，其中H2H2基因型占比最高；g.7833817 C>T和g.7840691 T>C位點(diǎn)產(chǎn)生的3種單倍型組合后形成了6種基因型，其中H5H6基因型占比最高。

圖2 連鎖不平衡分析Fig.2 Linkage disequilibrium analysis

2.6 單倍型組合與綿羊生長性狀的關(guān)聯(lián)分析

g.7628315 T>C-g.7628528 T>C、g.7833817 C>T-g.7840691 T>C位點(diǎn)單倍型組合與綿羊生長性狀的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果見表12、13。由表12可知，H2H2基因型個(gè)體在群體中數(shù)量最多，H3H3基因型個(gè)體數(shù)量最少，H3H1基因型個(gè)體初生體斜長顯著高于H3H2基因型(P<0.05)，H2H2基因型個(gè)體3月齡體高顯著高于H1H2基因型(P<0.05)，其余生長指標(biāo)在各組合基因型間差異均不顯著(P>0.05)。由表13可知，H5H6基因型個(gè)體在群體中數(shù)量最多，H4H4基因型個(gè)體數(shù)量最少，H4H5基因型個(gè)體3月齡體斜長顯著高于H4H6基因型(P<0.05)，其余生長指標(biāo)在各組合基因型間差異均不顯著(P>0.05)。

表12 g.7628315 T>C-g.7628528 T>C位點(diǎn)單倍型組合與綿羊生長性狀的關(guān)聯(lián)分析

表13 g.7833817 C>T-g.7840691 T>C位點(diǎn)單倍型組合與綿羊生長性狀的關(guān)聯(lián)分析

3 討 論

本研究以杜泊羊、灘羊、小尾寒羊3個(gè)群體共91只綿羊作為試驗(yàn)動(dòng)物，通過靶向測序技術(shù)在已知的IGF1R基因與生長發(fā)育相關(guān)的28個(gè)SNPs位點(diǎn)附近進(jìn)行測序，篩選了群體間差異顯著的8個(gè)外顯子SNPs，通過飛行質(zhì)譜分型技術(shù)對(duì)3個(gè)群體的子代進(jìn)行了差異位點(diǎn)的SNP分型[19]，并與生長性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，獲得一些新的遺傳標(biāo)記。田佺等[20]、張磊等[21]分別對(duì)延邊黃牛MEG3基因、東佛里生羊MSTN基因進(jìn)行多態(tài)性檢測及其與生長性狀的關(guān)聯(lián)分析，均發(fā)現(xiàn)了在生長性狀中的優(yōu)勢基因型；張琪等[22]在松遼黑豬METTL基因的多態(tài)性研究中發(fā)現(xiàn)，位于外顯子4上A62G位點(diǎn)的GG基因型個(gè)體總產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)和斷奶仔豬數(shù)均顯著高于其他基因型個(gè)體。目前，有關(guān)基因多態(tài)性的研究結(jié)果較多[23-25]，這對(duì)于現(xiàn)代畜牧的選育選配有非常積極的意義，有效地加快了品種培育的遺傳進(jìn)展。

群體遺傳變異程度反映了群體遺傳多樣性的豐富度，常用多態(tài)信息含量(PIC)來衡量，其值的高低能夠反映群體內(nèi)個(gè)體的均質(zhì)度，數(shù)值越大表明該群體的遺傳多樣性越豐富，遺傳潛力越大，對(duì)育種改良越有利[26-27]。本研究中，研究群體多呈中度多態(tài)和低度多態(tài)，g.7833817 C>T位點(diǎn)在3個(gè)綿羊群體中雜合度和純合度接近，說明這個(gè)位點(diǎn)的等位基因在3個(gè)綿羊群體中分布均勻，具有較好的遺傳潛力；g.7628315 T>C和g.7855904 C>G 2個(gè)位點(diǎn)在杜泊羊和小尾寒羊2個(gè)群體中都具有較好的豐富度；g.7628690 C>T、g.7836687 C>T和g.7840691 T>C 3個(gè)位點(diǎn)僅在杜泊羊或?yàn)┭蛉后w中呈現(xiàn)中度多態(tài)，選擇潛力較低；g.7628528 T>C和g.7872277 C>T 2個(gè)位點(diǎn)在3個(gè)綿羊群體中均呈低度多態(tài)，說明3個(gè)綿羊群體在這2個(gè)位點(diǎn)的基因型較單一，選擇潛力較差，且2個(gè)位點(diǎn)都表現(xiàn)為野生型遠(yuǎn)多于突變型，說明突變型未發(fā)生明顯的有利變異，群體基數(shù)較小。χ2檢驗(yàn)結(jié)果表明，除小尾寒羊g.7628690 C>T位點(diǎn)外的其余位點(diǎn)均符合Hardy-Weinberg平衡，3個(gè)綿羊群體絕大多數(shù)位點(diǎn)沒有受到人工選育、遷徙和遺傳漂變等因素的影響，保證了研究樣本的可靠性，可進(jìn)行下一步與綿羊生長性狀的關(guān)聯(lián)分析。

IGF1R基因是影響生長發(fā)育的關(guān)鍵基因，在非綜合征性矮小兒童中，使用MLPA對(duì)IGF1R和其他公認(rèn)的身高相關(guān)基因(如SHOX和GH)的拷貝數(shù)變異(CNV)進(jìn)行診斷檢查可以判斷是否身材矮小，用于識(shí)別生長發(fā)育不良的患者并考慮激素治療[28]。IGF1R基因的雜合突變會(huì)導(dǎo)致胎兒在子宮內(nèi)和出生后生長遲緩、小頭畸形，這種突變還會(huì)導(dǎo)致不同程度的精神活動(dòng)遲緩和畸形[29-32]。同時(shí)，具有IGF1純合缺失或突變的個(gè)體患有嚴(yán)重的宮內(nèi)和出生后生長障礙、小頭畸形、智力障礙、感音神經(jīng)性耳聾等特征[33]，IGF1R基因的CNV可能導(dǎo)致產(chǎn)前和產(chǎn)后生長受限[34-36]，這些研究均表明IGF1R基因在機(jī)體的生長發(fā)育過程中起重要的作用。劉亞楠等[37]通過分析河北和北京地區(qū)中國荷斯坦牛群體產(chǎn)奶量和乳成分性狀的遺傳效應(yīng)發(fā)現(xiàn)，IGF1R基因主要影響乳蛋白量性狀，同時(shí)對(duì)產(chǎn)奶量和乳脂量也具有一定遺傳效應(yīng)；宋姍姍等[38]對(duì)水貂IGF1R基因進(jìn)行SNP檢測，發(fā)現(xiàn)了2個(gè)位于外顯子上的突變，進(jìn)一步與生長發(fā)育性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，c.207G>A位點(diǎn)與金州黑水貂和咖啡水貂體長均呈顯著相關(guān),其中GG基因型為水貂體長的優(yōu)勢基因型；c.1782G>A與咖啡水貂的體長和體重均呈顯著或極顯著相關(guān)，GA基因型作為咖啡水貂的優(yōu)勢基因型，體長、體重均顯著高于純合基因型個(gè)體。以上研究結(jié)果表明，IGF1R基因多態(tài)性與動(dòng)物的生長發(fā)育指標(biāo)息息相關(guān)。在其他動(dòng)物上，孫鵬翔等[39]對(duì)雞IGF1R基因AluⅠ位點(diǎn)進(jìn)行多態(tài)性檢測，結(jié)果表明，共檢測到AA、AB和BB 3種基因型，關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)對(duì)腿肌率有顯著影響，而對(duì)其余屠宰性狀的影響均不顯著；高鳳華等[40]研究了IGF1R基因外顯子4和13突變對(duì)高、低腹脂系肉雞生長和體組成(龍骨長、脛骨長、脛骨重、股骨重)性狀的影響，發(fā)現(xiàn)這2個(gè)突變對(duì)7周齡體組成和5周齡體重均具有顯著影響；王佩佩等[41]研究了IGF1R基因7個(gè)SNPs對(duì)雞體重性狀的影響，發(fā)現(xiàn)其中2個(gè)SNPs對(duì)部分周齡體重具有顯著影響。本研究中，g.7628528 T>C位點(diǎn)與F2代3月齡體重和胸圍、H2代初生胸圍均呈顯著相關(guān)，TC為優(yōu)勢基因型；g.7628690 C>T位點(diǎn)與H2代初生胸圍呈顯著相關(guān)，TC為優(yōu)勢基因型；g.7833817 C>T位點(diǎn)與F2代3月齡體高呈顯著相關(guān)，TC為優(yōu)勢基因型；g.7836687 C>T位點(diǎn)與F1代3月齡體重和胸圍均呈顯著相關(guān)，TC為優(yōu)勢基因型，與F2代3月齡體高呈顯著相關(guān)，CC為優(yōu)勢基因型；g.7855904 C>G位點(diǎn)與F1代3月齡胸圍，F(xiàn)2代初生胸圍均呈顯著相關(guān)，C為優(yōu)勢基因；g.7872277 C>T位點(diǎn)與H1代3月齡胸圍，H2代初生體重、體高、胸圍，以及3月齡體高均呈顯著相關(guān)，CT為初生優(yōu)勢基因型，CC為3月齡優(yōu)勢基因型；g.7628315 T>C位點(diǎn)與F1代3月齡體高、體斜長，H2代3月齡體高均呈顯著相關(guān)，T為優(yōu)勢基因；g.7840691 T>C位點(diǎn)基因型與各階段生長性狀均無顯著相關(guān)，進(jìn)一步驗(yàn)證了IGF1R基因多態(tài)性可以影響動(dòng)物生長發(fā)育性狀。

生長性狀是受微效多基因控制的數(shù)量性狀，多個(gè)突變位點(diǎn)的連鎖作用對(duì)生物表型性狀變化的影響較單個(gè)位點(diǎn)變化更大，單倍型組合分析考慮了非等位基因間的相互作用及多個(gè)變異位點(diǎn)間的連鎖不平衡，這種組合分析具有更好的統(tǒng)計(jì)效力。本研究對(duì)8個(gè)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行連鎖不平衡分析發(fā)現(xiàn)，g.7628315 T>C-g.7628528 T>C位點(diǎn)連鎖后產(chǎn)生6種單倍型組合，H2H2基因型個(gè)體在群體中的數(shù)量最多，H3H1基因型個(gè)體初生體斜長顯著高于H3H2基因型，H2H2基因型個(gè)體3月齡體高顯著高于H1H2基因型；g.7833817 C>T-g.7840691 T>C位點(diǎn)連鎖后產(chǎn)生6種單倍型組合，其中H5H6基因型個(gè)體在群體中的數(shù)量最多，H4H5基因型個(gè)體3月齡體斜長顯著高于H4H6基因型。

本研究中發(fā)現(xiàn)的8個(gè)外顯子突變類型均為同義突變，編碼的氨基酸未發(fā)生改變，但有研究表明，同義突變雖未改變蛋白質(zhì)的氨基酸序列，但或許可以通過密碼子偏愛性、mRNA穩(wěn)定性影響蛋白質(zhì)的折疊與合成，進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的構(gòu)象和功能[42]，本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的差異是否是由于這種同義突變下單個(gè)堿基不同造成的仍有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

本研究以在親本群體中篩選的IGF1R基因8個(gè)SNPs位點(diǎn)為基礎(chǔ)，利用飛行質(zhì)譜技術(shù)對(duì)子代群體進(jìn)行SNP分型關(guān)聯(lián)分析顯示，8個(gè)外顯子突變位點(diǎn)基因型與各世代綿羊生長發(fā)育性狀有顯著關(guān)聯(lián)，同時(shí)g.7628315 T>C-g.7628528 T>C和g.7833817 C>T-g.7840691 T>C位點(diǎn)具有連鎖不平衡現(xiàn)象，且雙倍型在生長性狀上也表現(xiàn)出差異性。 因此，可以將g.7628315 T>C、g.7628528 T>C、g.7628690 C>T、g.7833817 C>T、g.7836687 C>T、g.7840691 T>C、g.7855904 C>G、g.7872277 C>T 8個(gè)位點(diǎn)作為優(yōu)質(zhì)肉羊培育中生長性狀的潛在分子標(biāo)記，在今后的育種工作中加強(qiáng)關(guān)注，以達(dá)到分子輔助育種的目的。