劉 倩，郭志廷，張 康，王學(xué)智，張景艷，李建喜

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所，甘肅省中獸藥工程技術(shù)研究中心，蘭州 730050；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，蘭州 730070)

黃芪性甘，微溫，入脾、肺、肝、腎經(jīng)，有“補氣之長”之稱，作為補氣要藥，其調(diào)節(jié)免疫的作用已經(jīng)廣為接受。黃芪主要包含生物堿、皂苷類、葡萄糖醛酸、黃酮類、多糖等生物活性物質(zhì)，其中黃芪多糖(Astragaluspolysaccharides，APS)作為一類生物大分子成分，是免疫活性最強的一類物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，APS具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤[1-2]、保護心血管系統(tǒng)[3]，降血糖，抗糖尿病[4]、抗動脈粥樣硬化[5-6]等多種生物學(xué)作用。APS能促進動物免疫器官發(fā)育、提高外周血中免疫球蛋白含量及T淋巴細(xì)胞數(shù)量、增強多種疫苗的保護效力，且不會存在藥物殘留的問題。作為飼料添加劑和免疫增效劑，APS可有效提高幼齡動物的抗病力和生長性能[7-8]。但由于生藥黃芪中APS的提取率較低，黃芪價格不斷增高，缺乏有效的特異性檢測方法，造成市場中獸用APS的質(zhì)量參差不齊，限制了該產(chǎn)品的推廣應(yīng)用。

天然免疫系統(tǒng)是機體的第一道免疫防御屏障，在抵抗病原微生物感染的過程中起著關(guān)鍵性作用。巨噬細(xì)胞作為機體重要的天然免疫效應(yīng)細(xì)胞，是機體造血系統(tǒng)中可塑性最強的一類細(xì)胞，具有極強的功能多樣性，在機體正常發(fā)育、體內(nèi)平衡、組織修復(fù)和抗感染中發(fā)揮著重要作用[9-10]。一方面，巨噬細(xì)胞吞噬能力強，能識別、吞噬和清除機體衰老細(xì)胞及侵入機體的外源性病原微生物，在參與天然免疫應(yīng)答等方面具有十分重要的作用；另一方面，巨噬細(xì)胞能遞呈抗原并激活T細(xì)胞而參與特異性免疫應(yīng)答。巨噬細(xì)胞主要分為M1型和M2型，其中M1型巨噬細(xì)胞通過分泌促炎性細(xì)胞因子和趨化因子，并專職遞呈抗原，參與正向免疫應(yīng)答，發(fā)揮免疫監(jiān)視的功能，對于早期抵御畜禽感染性疾病至關(guān)重要。中藥有效成分對巨噬細(xì)胞極化及功能的影響是目前的研究熱點。作者通過對國內(nèi)外相關(guān)文獻的分析歸納，總結(jié)APS提取及結(jié)構(gòu)分析的最新研究進展，闡述其對機體巨噬細(xì)胞及相關(guān)分子信號通路的調(diào)節(jié)作用機制，以期為新型畜禽免疫增強劑的研發(fā)提供新思路。

1 APS的提取技術(shù)和組分分析

1.1 APS的提取及純化方法

APS的提取方法主要有大孔樹脂提取法[11]、水提醇沉法[12]、堿水提法[13-15]、堿醇提法[16]、纖維素酶提法[17]及超聲輔助提取[18]等。APS是黃芪中的水溶性成分，極性偏大，因此多采用水提法進行提取，水提液濃縮后直接醇沉或分級醇沉后可得到不同分子質(zhì)量的APS。秦哲[19]分別用溫浸法、纖維素酶提取法、水煎法及飽和生石灰水提取法提取APS，發(fā)現(xiàn)纖維素酶提取法APS得率最高。經(jīng)水提醇沉后，APS在純化過程中往往需要進行脫蛋白處理，常用的方法有酶法和Sevage法。胡媛媛等[20]對蛋白酶和Sevage法聯(lián)用脫APS蛋白工藝進行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)在酶底比2.0%、pH 5.0、50 ℃水浴酶解24 h時效果最好，蛋白脫除率為89.82%，APS質(zhì)量分?jǐn)?shù)為83.48%。因此，酶法和Sevage法聯(lián)用除蛋白質(zhì)效果較好且多糖的損失率較低。除蛋白后經(jīng)透析、冷凍干燥后即得黃芪粗多糖。黃芪粗多糖經(jīng)不同填料類型的層析柱可進一步得到精制的APS，一般可用離子交換層析柱，常用的有二乙氨乙基纖維素(DEAE系列)及凝膠排阻層析柱 (Sephadex-G系列、Superdex系列等)[21]。

1.2 APS的組分分析

APS是一類結(jié)構(gòu)復(fù)雜的生物大分子復(fù)合物，因藥材產(chǎn)地、提取與精制工藝的不同[22]，其分子質(zhì)量和單糖組成的比例存在較大差異。陳艷蕊等[23]采用閃式提取、乙醇沉淀法從黃芪根部提取多種多糖化合物，脫除蛋白、凝膠層析后的多糖化合物經(jīng)水解、乙?；?，利用氣相色譜-質(zhì)譜法分析黃芪水溶性多糖中單糖組成、結(jié)構(gòu)及其比例，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地如山西、內(nèi)蒙古、甘肅產(chǎn)APS的單糖種類及各單糖的百分含量有顯著差異。APS含有的單糖組分包括：L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、L-木糖、D-核糖、L-核糖、D-半乳糖、D-葡萄糖和D-甘露糖等，其中最主要的成分是D-葡萄糖和D-甘露糖。唐雨薇等[24]采用DEAE-52和Sephadex G-100色譜柱分離純化，得到2種不同分子質(zhì)量的黃芪均一多糖APS-Ⅰ(1 060 ku)和APS-Ⅱ(2 470 ku)，通過高效液相色譜(HPLC)、紅外光譜(IR)和環(huán)境掃描電鏡(ES-EM)對APS-Ⅰ和APS-Ⅱ進行分析發(fā)現(xiàn)，APS-Ⅰ由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖和半乳糖組成，摩爾比為29.12∶1.89∶4.00∶1.35∶1.00∶81.97；APS-Ⅱ由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和木糖組成，摩爾比為50.46∶1.16∶1.00∶2.27∶2.66∶15.72∶7.86。說明不同分子質(zhì)量APS的單糖組成及其比例不同，其糖鏈連接順序及糖苷鍵類型會有差異，相應(yīng)的生物活性也會不同。Jiang等[25]采用高效液相色譜從黃芪中分離得到4種不同多糖，其中，APS1與APS2為均一的多糖，分別只含有葡萄糖和阿拉伯糖；APS3含有鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，摩爾比為1.00∶10.76∶6.55∶12.00；APS4含有半乳糖和阿拉伯糖，摩爾比為3.02∶1.00，且只有APS2和APS3具有刺激淋巴細(xì)胞增殖的活性，說明APS的單糖組成與其生物活性密切相關(guān)。

2 ASP對巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用

2.1 ASP對巨噬細(xì)胞極化的調(diào)節(jié)

研究表明，巨噬細(xì)胞極化有促炎和促進早期創(chuàng)傷愈合的功能，且在感染、代謝、免疫及腫瘤的發(fā)生發(fā)展等過程中發(fā)揮著重要作用[26-27]?；罨木奘杉?xì)胞大致分為M1和M2 2種表型，通常用3種細(xì)胞特性來判定，即細(xì)胞表面蛋白表達、酶活性及細(xì)胞因子分泌。表1總結(jié)了一些最常見的表示巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)或增強的標(biāo)記分子及所采用的檢測方法[28-29]。

對機體的健康而言，巨噬細(xì)胞極化是一把雙刃劍，其對機體的影響有好有壞。APS對巨噬細(xì)胞極化有雙向調(diào)節(jié)作用，能發(fā)揮抗腫瘤和抑制炎癥的生物學(xué)作用。人單核細(xì)胞源巨噬細(xì)胞(THP-1)M1/M2極化率的降低有利于促進腫瘤生長，Bamodu等[30]采用流式細(xì)胞術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，8和16 mg/mL APS可顯著提高THP-1的CD80high-M1/CD206high-M2極化率，顯著減少CD206high-M2巨噬細(xì)胞的數(shù)目，且16 mg/mL APS可顯著提高經(jīng)H441肺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清液孵育的CD80lowCD206highTHP-1的CD80high-M1/CD206high-M2極化率，與脂多糖(LPS，40 ng/mL)/γ干擾素(IFN-γ，200 ng/mL)對細(xì)胞的刺激作用相似，可抑制腫瘤細(xì)胞增殖。Wei等[29]研究發(fā)現(xiàn)，30～100 μg/mL APS誘導(dǎo)的小鼠骨髓源巨噬細(xì)胞(BMDMs)可抑制乳腺癌腫瘤細(xì)胞(4T1)在BALB/c小鼠體內(nèi)的增殖及實體瘤生長；采用實時熒光定量PCR法測得APS可刺激BMDMs細(xì)胞M1型標(biāo)記分子(iNOS、IL-6、TNF-α及CXCL10)轉(zhuǎn)錄水平的顯著升高，顯著抑制M2型標(biāo)記分子(MR、Arginase-1)轉(zhuǎn)錄水平；采用流式細(xì)胞術(shù)測得APS可顯著抑制IL-4(20 ng/mL)誘導(dǎo)的CD86lowCD206high-M2型BMDMs細(xì)胞分化。柴長斌等[31]研究發(fā)現(xiàn)，小鼠連續(xù)7 d腹腔注射2 mg/mL APS，可顯著增加小鼠腹腔巨噬細(xì)胞M1型的極化。

此外，APS還可通過下調(diào)M1/M2極化率，促進抑炎細(xì)胞因子表達，發(fā)揮治療疾病的作用。實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)的主要發(fā)病機制是免疫失衡。劉建春等[32]研究發(fā)現(xiàn)，0.1 mg/mL APS可顯著增加EAE模型小鼠脾臟M2型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物CD206的表達，0.1和0.2 mg/mL APS均可顯著抑制M1型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物CD16/32+的表達，改善炎癥反應(yīng)的微環(huán)境。提示APS對EAE有潛在的治療作用。

2.2 APS對巨噬細(xì)胞遷移的作用

巨噬細(xì)胞來源于血液中的單核細(xì)胞，分布于機體的各個器官與組織中，在微環(huán)境改變和信號刺激下可遷移到炎癥、損傷部位，參與機體的各種免疫反應(yīng)。巨噬細(xì)胞的密度和時空分布方式、遷移均可直接或間接地受到外界信號或物質(zhì)調(diào)控。LPS可誘導(dǎo)大鼠子宮中巨噬細(xì)胞的數(shù)量增加及分布發(fā)生變化，單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP-1)、腫瘤壞死因子(TNF-α)含量升高，誘發(fā)胚胎吸收或流產(chǎn)。鄭燕等[33]研究發(fā)現(xiàn)，將APS提取物按2 mL/d的劑量灌服大鼠，可有效降低LPS引起的大鼠胚胎吸收率和升高流產(chǎn)率；APS組大鼠環(huán)肌外層、環(huán)肌內(nèi)層和功能層中CD14+、α-NAE+巨噬細(xì)胞數(shù)量和MPC-1含量均顯著低于LPS組大鼠。分析機制可能與APS抑制MCP-1生成減弱巨噬細(xì)胞從環(huán)肌外層向胚胎著床處聚集、遷移有關(guān)。

2.3 APS對巨噬細(xì)胞吞噬作用的影響

巨噬細(xì)胞的吞噬功能是其識別并消滅病原體、清除衰亡細(xì)胞、維持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的重要手段。寧康健等[34]分別采用灌服、腹腔注射、皮下注射3種給藥途徑將不同劑量的APS提取液作用于昆明小鼠，發(fā)現(xiàn)高、中、低劑量(15、20、25 g/(kg·d))APS組的細(xì)胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)均高于對照組，其中以高劑量組(25 g/(kg·d))效果最好；APS腹腔注射組的細(xì)胞吞噬百分率高于皮下注射和灌服組。 劉印華等[35]按2 mL/d的劑量連續(xù)灌服小鼠APS(5、10、20 mg/mL)10 d，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)均顯著高于正常對照組。

在免疫抑制環(huán)境下，APS也表現(xiàn)出良好的增強巨噬細(xì)胞吞噬功能的活性作用，且與劑量存在正相關(guān)性。史晶晶等[36]研究發(fā)現(xiàn)，給予環(huán)磷酰胺所致免疫抑制模型小鼠不同劑量的APS(0.02、50、100、200 mg/kg)后，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對雞紅細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)明顯升高，且具有劑量依賴性，以200 mg/kg APS作用最強。Qiu等[37]研究發(fā)現(xiàn)，口服不同劑量(50、100、200 mg/kg) APS能改善地塞米松所致免疫抑制犬的臨床癥狀，顯著增強犬腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性，并呈現(xiàn)劑量依賴性，以200 mg/kg APS作用最強。與此相似，APS對腫瘤、致病菌感染環(huán)境下巨噬細(xì)胞的吞噬功能也具有增強作用，且與劑量存在正相關(guān)性。Yang等[38]研究發(fā)現(xiàn)，100、400 mg/kg APS均能顯著增強H22肝癌小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，抑制肝癌實體瘤的生長。張雷芳[39]研究發(fā)現(xiàn)，腹腔注射0.2～3 mg/mL APS能夠促進小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化，增強其吞噬和殺傷布魯菌S2株的作用；APS對巨噬細(xì)胞吞噬S2的作用具有雙向性，濃度過高時反而有抑制作用。

臨床研究證明，APS可作為疫苗的佐劑，有效提高機體的細(xì)胞與體液免疫，提高疫苗的抗體水平。研究發(fā)現(xiàn)，在接種疫苗前預(yù)先給予APS可提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力，APS劑量與其增強疫苗特異性免疫應(yīng)答存在相關(guān)性，如在口蹄疫病毒(FMDV)疫苗免疫前1 d分別口服1.0 mL不同劑量APS(6.25、12.5、25、50 mg/kg)的小鼠，與單獨接種口蹄疫病毒(FMDV)的小鼠相比，腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率和吞噬指數(shù)、疫苗抗體滴度均有增高，其中50 mg/kg APS作用最強[40]。

2.4 巨噬細(xì)胞炎癥因子的釋放

在炎癥反應(yīng)中，巨噬細(xì)胞會分泌大量促炎因子，如NO、TNF-α、IL-1β等，這類因子會激活更多未活化的巨噬細(xì)胞參與炎癥反應(yīng)，由此形成一個正反饋調(diào)節(jié)。通常情況下，這一正反饋調(diào)節(jié)也會受抑炎因子(如IL-4、IL-10、TGF等)的調(diào)控；然而在某些情況下，這種調(diào)節(jié)機制失靈，造成過度炎癥反應(yīng)，進而引起機體損傷。一定濃度范圍(12.5～300 μg/mL)內(nèi)的APS可通過雙向調(diào)控促炎、抑炎因子的表達，增強巨噬細(xì)胞的天然免疫功能，從而發(fā)揮抗炎、抗腫瘤等生物學(xué)作用。

一方面，APS可促進正常巨噬細(xì)胞中促炎因子的表達，激活巨噬細(xì)胞，具有與低濃度(不引起毒性反應(yīng))LPS相似的生物學(xué)作用。研究發(fā)現(xiàn)，分子質(zhì)量為1 334 ku、總糖含量為76.5%、濃度為30～300 μg/mL的APS可刺激RAW264.7細(xì)胞中TNF-α、IL-6和iNOS蛋白與基因轉(zhuǎn)錄水平的表達量升高，該作用與100 ng/mL LPS的作用相似，且與APS濃度呈正相關(guān)性[41]；用25 μg/mL APS孵育RAW 264.7細(xì)胞24 h后，上清中分泌的細(xì)胞因子NO、TNF-α和IL-6含量顯著升高，與100 ng/mL LPS作用相似[42]。 其他研究報道也表明，一定濃度的APS(12.5、25、50、100 μg/mL)作用于RAW264.7細(xì)胞24 h后，均能促進巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)、NO、IL-6和IL-1β，且與APS濃度呈正相關(guān)性[43]。Zhou等[44]發(fā)現(xiàn)，APS與1 μg/mL LPS的作用相似；孟婷婷[45]還發(fā)現(xiàn)100 μg/mL APS可以顯著降低NF-κB抑制劑二硫氨基甲酸肽吡咯烷(PDTC)刺激引起的RAW264.7細(xì)胞IL-1β、TNF-α、IL-6及iNOS表達水平降低。APS對魚頭腎巨噬細(xì)胞、THP-1細(xì)胞等不同來源的巨噬細(xì)胞也表現(xiàn)出促進促炎因子釋放的作用，一定濃度的APS能顯著增強巨噬細(xì)胞中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的表達，且隨著APS孵育時間(6、12、24 h)的延長，增加趨勢逐漸降低[46-47]。Yang等[38]研究發(fā)現(xiàn)，100和400 mg/kg APS能顯著增加H22肝癌小鼠腹腔巨噬細(xì)胞促炎因子IFN-γ、IL-2、IL-12和TNF-α細(xì)胞因子的釋放，顯著減少抑炎因子IL-10的釋放，且APS濃度為400 mg/kg時作用效果最顯著。因此，APS可以通過釋放炎癥因子改善宿主機體的免疫反應(yīng)，發(fā)揮體內(nèi)抗腫瘤活性。周麗菁等[48]研究表明，300 μg/mL APS作用于THP-1細(xì)胞24 h后可顯著促進細(xì)胞NO、IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌，但對IL-12無顯著影響。體內(nèi)研究也有一致性的發(fā)現(xiàn)，Xu等[49]研究表明，不同濃度(0.05、0.2、0.6、1.5、4、8 mg/mL)APS均可激活小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，顯著促進促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌，其達到最高分泌水平的APS濃度分別為4、1.5和4 mg/mL。

另一方面，APS可抑制炎癥損傷下巨噬細(xì)胞中促炎因子的過度釋放，保護和調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞免疫功能，發(fā)揮抗炎、抗腫瘤的生物學(xué)作用。研究發(fā)現(xiàn)，APS對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞損傷具有保護作用，100、500、1 000 μg/mL APS均能夠顯著降低1 μg/mL LPS誘導(dǎo)損傷細(xì)胞中促炎因子IL-1β和TNF-α的分泌，與APS濃度呈正相關(guān)性，其中1 000 μg/mL APS作用24 h效果最為顯著，且APS作用優(yōu)于人參多糖(GPS)[50-51]；1 mg/mL APS能顯著抑制100 ng/mL LPS誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞分泌過量的IL-1β和IL-6，從而達到免疫調(diào)節(jié)作用[52-53]；不同濃度(37.5～150 μg/mL)APS作用24 h均能抑制1 μg/mL LPS誘導(dǎo)的人單核巨噬細(xì)胞系(U937細(xì)胞)產(chǎn)生過量的TNF-α、IL-1β和NO[54]；APS可顯著抑制LPS誘導(dǎo)的大鼠子宮巨噬細(xì)胞TNF-α的過量生成，對流產(chǎn)大鼠子宮的免疫微環(huán)境發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[33]。

2.5 相關(guān)信號通路

Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)是一類天然免疫模式識別受體，屬于Ⅰ型跨膜糖蛋白，在病原微生物免疫和誘導(dǎo)快速防御反應(yīng)激活固有免疫系統(tǒng)中具有重要作用。其中，TLR4受體是第一個在膜表面發(fā)現(xiàn)的Toll蛋白，可以識別革蘭氏陰性菌的LPS。TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑包括TLR4-TIRAP/MAL途徑(MyD88依賴途徑)和TLR4-TRAM/TIRF途徑(MyD88非依賴途徑)。巨噬細(xì)胞表面分子TLR4在APS主導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，其中TLR4-TIRAP/MAL-MyD88依賴途徑是APS調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞功能的主要途徑。

APS可通過識別正常巨噬細(xì)胞TLR4，激活TLR4-MyD88依賴信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進NF-κB核轉(zhuǎn)位及轉(zhuǎn)錄水平的表達，從而活化巨噬細(xì)胞，發(fā)揮對機體的免疫調(diào)節(jié)作用(圖1)。 研究發(fā)現(xiàn)，25～400 μg/mL APS作用于RAW264.7細(xì)胞后，與空白對照組相比，關(guān)鍵信號通路TLR4、MyD88、NF-κB、TRAF-6基因表達和蛋白水平都有明顯的上調(diào)[44，55]。其中，APS作用于RAW264.7細(xì)胞4 h后NF-κB(p65)開始活化，6 h達到高峰，并維持到8 h[56]。孟婷婷[45]研究發(fā)現(xiàn)，隨著APS濃度的升高，NF-κB(p65)入核表達水平升高。Wei等[41]研究發(fā)現(xiàn)，1 μg/mL APS作用RAW264.7細(xì)胞后能激活TLR4信號通路下游的MAPKs相關(guān)蛋白，包括磷酸化的細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,c-JNK)和磷酸化的p38，誘導(dǎo)NF-κB易位及NF-κB抑制因子α(IκBα)降解。Feng[43]也有相類似的發(fā)現(xiàn)，25～100 μg/mL APS能提高RAW264.7細(xì)胞中NF-κB(p65、p38)和JNK細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶的蛋白水平，表明APS的免疫調(diào)節(jié)作用是通過激活NF-κB(p65)MAPK信號通路介導(dǎo)的。

此外，APS還可抑制炎癥損傷下巨噬細(xì)胞信號通路中相關(guān)蛋白的過度表達，保護和調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的免疫功能，發(fā)揮抗炎的生物學(xué)作用(圖2)。 研究發(fā)現(xiàn)，0.1、0.5、1 mg/mL APS均可顯著抑制1 μg/mL LPS刺激損傷RAW264.7細(xì)胞中TLR4、MyD88和NF-κB mRNA表達量的升高[57]，表明APS可能通過抑制TLR4/NF-κB的活化從而緩解LPS誘導(dǎo)引起的巨噬細(xì)胞過度炎癥反應(yīng)，減少免疫應(yīng)激。

圖2 APS對LPS損傷巨噬細(xì)胞TLRs信號通路調(diào)節(jié)示意圖Fig.2 Schematic diagram of TLRs signaling pathway on LPS induced injured macrophages regulated by APS

3 小 結(jié)

臨床實踐中，APS常與疫苗相結(jié)合，用于提高畜禽的特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)[58-60]。此外，單獨使用APS也可提高幼畜禽的抗感染能力，改善健康水平，提高免疫球蛋白指數(shù)，增強機體天然免疫水平[61-64]。鑒于APS良好的臨床功效，近年來有關(guān)其提取工藝、組分表征及對機體天然免疫調(diào)節(jié)作用的研究屢見不鮮。目前，APS的提取工藝不盡相同，加之藥材產(chǎn)地、藥材質(zhì)量及提取純化方法的不同，導(dǎo)致用于藥理學(xué)試驗研究的APS在純度、分子質(zhì)量及單糖組成上均存在一定差異。因而，APS調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞功能及其相關(guān)機制的研究中存在有效劑量及活性作用不一致性的問題。研究表明，APS的單糖組成與其生物學(xué)作用存在關(guān)聯(lián)性，但因現(xiàn)有檢測技術(shù)的壁壘，一直以來植物多糖成分的全面分析和表征存在難點。因此，APS生物學(xué)活性作用的評價與機制研究還需要進一步借助現(xiàn)代檢測技術(shù)的完善與發(fā)展才能得到更為準(zhǔn)確和全面的闡述。

綜合已有文獻發(fā)現(xiàn)，APS的安全劑量范圍大，對巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)存在雙向性，可通過識別TLR4、激活TLR4-MyD88依賴信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進NF-κB核轉(zhuǎn)位及轉(zhuǎn)錄水平的表達，活化巨噬細(xì)胞，發(fā)揮免疫增強作用；也可通過抑制炎癥損傷巨噬細(xì)胞中TLR4、TLR2信號通路中相關(guān)蛋白的過度表達，減少促炎因子的釋放，發(fā)揮抗炎的生物學(xué)作用。但目前這類研究均集中在人源、鼠源巨噬細(xì)胞上，缺乏對畜禽如雞、豬、牛等巨噬細(xì)胞的分子調(diào)節(jié)機制研究。人們對機體天然免疫調(diào)節(jié)的認(rèn)識還在不斷發(fā)展之中。因此，APS對畜禽巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用及其分子機制研究對于支撐中國畜禽綠色養(yǎng)殖技術(shù)的發(fā)展將具有重要意義。