胡同靜 嚴(yán)婷 劉敏 易云蕾

【摘要】目的：通過參加外部組織的能力驗(yàn)證達(dá)到考核內(nèi)部技術(shù)人員微生物檢測能力，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室綜合競爭力。方法：2021年，本實(shí)驗(yàn)室參加了由大連中食國實(shí)檢測技術(shù)有限公司組織和負(fù)責(zé)實(shí)施的《CFAPA-1203化妝品中金黃色葡萄球菌的測定驗(yàn)證計(jì)劃》。檢測依據(jù)為《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）。結(jié)果：樣品169的鑒定結(jié)果為金黃色葡萄球菌陰性;樣品421的鑒定結(jié)果為金黃色葡萄球菌陰性;樣品579的鑒定結(jié)果為金黃色葡萄球菌陽性。結(jié)論：本次能力驗(yàn)證活動的3個(gè)樣品檢驗(yàn)均取得令人滿意的結(jié)果，同時(shí)達(dá)到了實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)控、人員考核、水平驗(yàn)證的預(yù)期目的，也為應(yīng)對日常檢測工作積累了寶貴的經(jīng)驗(yàn)。

【關(guān)鍵詞】能力驗(yàn)證;金黃色葡萄球菌;化妝品;微生物檢驗(yàn)

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2022.03.019

Analysis and Discussion on the Validation Results of Staphylococcus Aureus in Cosmetics

HU Tong-jing，YAN Ting，LIU Min，YI Yun-lei

（Nanjing Product Quality Supervision and Inspection Institute，Nanjing 210019，China）

Abstract：Objective：through participating in the ability verification of external organizations，the laboratory achieves the expectation of assessing the microbial detection ability of internal technicians and enhancing the comprehensive competitiveness of the laboratory. Methods：in 2021，our laboratory participated in the cfapa-1203 determination and validation plan for Staphylococcus aureus in cosmetics organized and implemented by Dalian ZhongshiGuoshi Detection Technology Co.，Ltd. The test basis is the Technical specification for safety of cosmetics（2015 Edition）. Results：the identification result of sample 169 was negative for Staphylococcus aureus;the identification result of sample 421 was negative for Staphylococcus aureus;the identification result of sample 579 was positive for Staphylococcus aureus. Conclusion：the three results of this capability verification activity have achieved satisfactory results，achieved the expected purpose of laboratory internal quality control，personnel assessment and level verification，and accumulated valuable experience for daily testing.

Key words：capability verification;Staphylococcus aureus;cosmetics;microbiological examination

金黃色葡萄球菌是自然界中廣泛存在的致病菌。革蘭氏陽性球菌，是微球菌科葡萄球菌屬的一個(gè)下屬種[1]，當(dāng)空氣中氧分含量降低時(shí)易產(chǎn)生腸毒素，可能引起食物中毒的癥狀[2]。金黃色葡萄球菌也是常見的病原菌，可能引起化膿性炎癥。如果人發(fā)生感染，病原菌進(jìn)入血液可造成肺炎、心包炎等內(nèi)臟器官感染，嚴(yán)重的可引起敗血癥、膿毒血癥等全身感染[3]。

人們?nèi)粘Ｉ铍x不開化妝品，而化妝品又常與人體皮膚接觸，如果化妝品中檢出不明微生物，則存在引發(fā)皮膚發(fā)炎、過敏的風(fēng)險(xiǎn)。部分化妝品本身含水量高、營養(yǎng)豐富，容易發(fā)生微生物污染。被微生物污染的化妝品不僅會引起產(chǎn)品質(zhì)量下降造成經(jīng)濟(jì)損失，也可能會對消費(fèi)者的健康造成威脅?！痘瘖y品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）中明確規(guī)定：化妝品中不得檢出金黃色葡萄球菌[4]。對化妝品中微生物的檢測是保障化妝品衛(wèi)生安全的一個(gè)重要環(huán)節(jié)[5]。

能力驗(yàn)證是一個(gè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)能力的重要考核指標(biāo)，與現(xiàn)場評審考核共同構(gòu)成了能力評價(jià)體系[6-7]。通過能力驗(yàn)證可以加強(qiáng)本實(shí)驗(yàn)室的微生物檢測能力，提高檢驗(yàn)人員的業(yè)務(wù)水平，也是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制的重要補(bǔ)充[8]。2021年，本實(shí)驗(yàn)室參加了由大連中食國實(shí)檢測技術(shù)有限公司組織和負(fù)責(zé)實(shí)施的《CFAPA-1203化妝品中金黃色葡萄球菌的測定驗(yàn)證計(jì)劃》，通過對結(jié)果的評價(jià)考核本實(shí)驗(yàn)室微生物檢測能力和檢驗(yàn)人員業(yè)務(wù)能力，完成內(nèi)部質(zhì)控。

1材料與方法

能力驗(yàn)證等同于日常檢測工作，每一步操作都應(yīng)該在嚴(yán)格遵循能力驗(yàn)證作業(yè)指導(dǎo)書和相應(yīng)國標(biāo)要求的基礎(chǔ)上，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊、內(nèi)部SOP要求以及實(shí)驗(yàn)人員相關(guān)工作經(jīng)驗(yàn)，仔細(xì)把控每一步操作細(xì)節(jié)來完成本次能力驗(yàn)證，以期達(dá)到滿意結(jié)果和內(nèi)部質(zhì)量控制的要求。

1.1檢測依據(jù)

本次能力驗(yàn)證全部依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）中給出的金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)方法，結(jié)合本次《CFAPA- 1203化妝品中金黃色葡萄球菌的測定能力驗(yàn)證計(jì)劃參試指導(dǎo)書》進(jìn)行。

1.2檢測材料

1.2.1培養(yǎng)基及試劑

試驗(yàn)中使用SCDLP液體培養(yǎng)基、甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基、Baird-Parker平板、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基均購自北京陸橋微生物制劑有限公司;科馬嘉金黃色葡萄球菌顯色瓊脂購自法國科馬嘉，以上均按產(chǎn)品標(biāo)簽配制后使用;凍干血漿、血瓊脂平板均購自北京陸橋技術(shù)股份有限公司，按照使用說明直接使用成品;革蘭氏陽性菌GP鑒定卡（法國梅里埃生物公司）。

1.2.2標(biāo)準(zhǔn)菌株

按照國標(biāo)要求，試驗(yàn)中使用金黃色葡萄球菌ATCC6538 作為陽性對照，表皮葡萄球菌CMCC（B）26069作為陰性對照。

1.2.3儀器設(shè)備

電子天平（上海衡際科學(xué)儀器有限公司）;生化培養(yǎng)箱（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）;vitek2全自動微生物鑒定系統(tǒng)（法國梅里埃生物公司）。

1.3待測樣品

待測樣品為真空包裝，均保存在西林瓶內(nèi)冷鏈運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，共3件樣品，樣品編號分別為：樣品169、樣品421、樣品579，由大連中食國實(shí)檢測技術(shù)有限公司提供。

1.4檢測過程

1.4.1樣品處理

取出待測樣品，在無菌條件下開啟樣品西林瓶，然后立即加入4 mL無菌生理鹽水進(jìn)行溶解。待瓶內(nèi)樣品溶解后，將其吸出再放入無菌瓶中，接著反復(fù)用余下的生理鹽水清洗西林瓶內(nèi)壁，回收清洗液放入上述無菌瓶中，最后得到生理鹽水稀釋液共計(jì)40 mL，此溶液為待測樣品原液。用無菌吸管吸取10 mL待測原液加入到90 mL滅菌生理鹽水中混勻，制成作業(yè)指導(dǎo)書要求的1：10檢液。

1.4.2增菌培養(yǎng)

使用無菌移液管吸取1：10稀釋的檢液10 mL接種到90 mL 滅菌SCDLP液體培養(yǎng)基中，置于（36±1）℃培養(yǎng)（24±2）h進(jìn)行增菌培養(yǎng)。

1.4.3分離培養(yǎng)

從上述增菌培養(yǎng)液中挑取培養(yǎng)物，通過劃線法接種到Baird-Parker平板培養(yǎng)基或血瓊脂平板上，置于（36±1）℃培養(yǎng)48 h后觀察并描述菌落形態(tài)。

1.4.4鑒定試驗(yàn)

挑取單個(gè)可疑菌落接種到血瓊脂平板上，置于（36±1）℃培養(yǎng)（24±2）h。挑取分純后的菌落，分別進(jìn)行染色鏡檢、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)、血漿凝固酶試驗(yàn)，對其進(jìn)行篩選驗(yàn)證。

1）染色鏡檢：挑取分純后的菌落涂片，進(jìn)行革蘭氏染色后鏡檢。金黃色葡萄球菌為典型的革蘭氏陽性菌株，一般情況下其形態(tài)應(yīng)排列成葡萄狀，無芽抱、無莢膜，菌體相對較小，直徑約為0.5～1 μm。

2）甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：挑取分純后的菌落接種到甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)基液面上加入高度約2～3 mm的滅菌液體石蠟。置于（36±1）℃培養(yǎng)（24±2）h后，一般情況下金黃色葡萄球菌應(yīng)能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，出現(xiàn)變黃的現(xiàn)象。

3）血漿凝固酶試驗(yàn)：根據(jù)凍干血漿使用說明先用0.5 mL生理鹽水溶解均勻，加入新鮮的可疑菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物0.5 mL，混勻，（36±1）℃恒溫箱培養(yǎng)，每半小時(shí)觀察一次，6h之內(nèi)出現(xiàn)凝塊則判定為陽性結(jié)果。同時(shí)將已知血漿凝固酶陽性、陰性菌株的肉湯培養(yǎng)物及肉湯培養(yǎng)基視作陽性對照、陰性對照和空白對照。

2能力驗(yàn)證結(jié)果

若在上述選擇培養(yǎng)基出現(xiàn)符合形態(tài)的菌落生長，后經(jīng)過革蘭氏染色鏡檢證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，同時(shí)能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸、血漿凝固酶試驗(yàn)陽性，可報(bào)告為檢出金黃色葡萄球菌。本次能力驗(yàn)證試驗(yàn)的結(jié)果見表1、表2、表3。

3討論與分析

本次能力驗(yàn)證主要依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）中的金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)方法，結(jié)合本次《CFAPA-1203化妝品中金黃色葡萄球菌的測定能力驗(yàn)證計(jì)劃》參試指導(dǎo)書進(jìn)行增菌培養(yǎng)、劃線分離以及后續(xù)鑒定等檢測步驟，最終給出了樣品169陰性、樣品421陰性、樣品579陽性的結(jié)果。隨后大連中食國實(shí)檢測技術(shù)有限公司給出的能力驗(yàn)證結(jié)果評價(jià)均為滿意。

本次能力驗(yàn)證本質(zhì)為金黃色葡萄球菌定性試驗(yàn)，故在本次試驗(yàn)過程中，參考如GB 4789.10—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》等標(biāo)準(zhǔn)信息，結(jié)合實(shí)驗(yàn)員經(jīng)驗(yàn)，使用科馬嘉金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基作為補(bǔ)充驗(yàn)證的依據(jù)，有效避免了添加在樣品內(nèi)的干擾菌對試驗(yàn)結(jié)果的影響，優(yōu)化了檢測流程，加快了實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。在本次試驗(yàn)過程中，使用了成品血瓊脂培養(yǎng)基、凍干血漿試劑等商業(yè)化成品培養(yǎng)基。成品培養(yǎng)基的出現(xiàn)方便了日常檢測工作，把實(shí)驗(yàn)人員從繁瑣的試劑配置工作中解放出來。專業(yè)化生物制劑公司生產(chǎn)的產(chǎn)品大多是有質(zhì)量保證的，但仍需要按照實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的培養(yǎng)基比對試驗(yàn)驗(yàn)證合格后方可投入使用。

在微生物檢測工作中，每個(gè)環(huán)節(jié)的把控都關(guān)系到檢測工作的質(zhì)量，因此，對各個(gè)工作環(huán)節(jié)始終都要做好質(zhì)量控制工作，而能力驗(yàn)證就是質(zhì)量控制的重要一環(huán)。定期參加能力驗(yàn)證并通過考核也有助于提升客戶對實(shí)驗(yàn)室出具準(zhǔn)確可靠檢測結(jié)果的信心，有利于實(shí)驗(yàn)室的發(fā)展。

4結(jié)論

本次能力驗(yàn)證活動的3個(gè)結(jié)果均取得了滿意的結(jié)果，同時(shí)達(dá)到了實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)控、人員考核、水平驗(yàn)證的預(yù)期目的，也為應(yīng)對日常檢測工作積累了寶貴的經(jīng)驗(yàn)。

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