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        液相色譜-質(zhì)譜法高精準(zhǔn)檢測獸肉中萊克多巴胺

        2022-05-30 17:56:16黃永生葉夏聲何玉榆黃婷陳彤
        國外畜牧學(xué)·豬與禽 2022年4期
        關(guān)鍵詞:串聯(lián)質(zhì)譜液相色譜

        黃永生 葉夏聲 何玉榆 黃婷 陳彤

        摘? 要:本研究基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜建立了一種高精準(zhǔn)檢測鹽酸萊克多巴胺的方法,對所建立的方法進(jìn)行了方法學(xué)的考察與驗(yàn)證。參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),對標(biāo)準(zhǔn)的前處理步驟進(jìn)行優(yōu)化,采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行分析。其標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.999 93,方法檢出限為0.068 8 μg/kg,回收率范圍為93.4%~100.1%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%~3.7%。所得結(jié)果表明該方法檢出限較低,回收率好,處理步驟簡單,得到的結(jié)果精準(zhǔn)度高,重復(fù)性好,為萊克多巴胺的檢測提供了新思路。

        關(guān)鍵詞:萊克多巴胺;液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;前處理優(yōu)化;高精密度

        中圖分類號:S859.84 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號:1001-0769(2022)04-0085-04

        鹽酸萊克多巴胺(ractopamine,RAC),別名雷托巴胺、舒喘靈、金萊多巴、權(quán)萊克、Paylean,化學(xué)名稱為4-[3-[2-羥基-2-(4-羥基苯基)-乙基]氨基丁基]苯酚(4-[3-[2-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-ethyl]aminobutyl]phenol),是美國研制合成的一種β-腎上腺受體激動(dòng)劑類化合物,但被非法商家用作新一代的瘦肉精,被添加于飼料產(chǎn)品中,用于替代克倫特羅來提高動(dòng)物生產(chǎn)效率[1]。相比克倫特羅,RAC具有毒性小、代謝快的特性,故各國政府對其在養(yǎng)殖業(yè)中適用范圍的規(guī)定各不相同。目前,在美國、日本、墨西哥、澳大利亞等國家,RAC可作為瘦肉精被用在養(yǎng)殖生產(chǎn)中,以此來提高畜禽的蛋白質(zhì)含量及瘦肉率。但消費(fèi)者大量食用含RAC殘留的肉制品后,大概率會(huì)引發(fā)中毒癥狀,如惡心、嘔吐、頭暈、頭痛、肌肉震顫、心悸、心律失常、血壓上升等,嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)绊懮诚到y(tǒng)[2-4]。故為了國民身體健康安全,我國政府已經(jīng)對該類藥物實(shí)施全面禁用,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部在第235號公告《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》中將萊克多巴胺及其鹽類物質(zhì)列為檢測藥品,并于2011年12月5日起在中國境內(nèi)禁止生產(chǎn)和銷售RAC;在第176號等公告中明確了在動(dòng)物飼養(yǎng)過程中禁止使用鹽酸克倫特羅。

        目前,對萊克多巴胺的檢測有多種方法,主要有氣質(zhì)聯(lián)用法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫法、毛細(xì)管電泳技術(shù)、液相色譜—質(zhì)譜法? ? ? ? ?等[5-7],但這些方法大多存在前處理過程繁瑣、復(fù)雜、費(fèi)時(shí)的缺點(diǎn),快速檢測的方法則存在精準(zhǔn)度低、檢測對象單一等不足。故本研究基于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部1025公告-18-2008《動(dòng)物源性食品中β-受體激動(dòng)劑殘留檢測 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》、GB/T21313-2017《動(dòng)物源性食品中β-受體激動(dòng)劑殘留檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》、GB/T22286-2008《動(dòng)物源性食品中多種β-受體激動(dòng)劑殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》等[8-10],建立了一種樣品的快速凈化手段,縮短了前處理的時(shí)間,有效地提高了檢測工作的效率。

        1? 材料與方法

        1.1 儀器與試劑

        1.1.1 儀器

        安捷倫1290液相色譜儀、AB Science質(zhì)譜儀、氮吹儀、多管漩渦混合儀、天平、旋渦混合器、冷凍離心機(jī)、超純水儀、超聲波清洗機(jī)、混合陽性離子(mixed-mode cation exchanger,MCX固相萃取柱(規(guī)格為3 cc、60 mg)、恒溫水浴搖床。

        1.1.2 藥品與試劑

        0.2 mol/L乙酸銨(pH=5.2);0.1 mol/L高氯酸溶液;5%氨化甲醇;甲醇(色譜純)、甲酸(色譜純);乙酸(分析純);氫氧化鈉(分析純);β-葡萄糖醛苷酸酶/芳基硫酸酯酶(20 U/mL);復(fù)溶液:甲醇/水/甲酸(v/v/v =10∶90∶0.09)。

        1.2 樣品準(zhǔn)備

        取適量新鮮牛肉組織,將其攪碎為肉質(zhì)均勻的狀態(tài),于-20 ℃避光保存。

        1.3 標(biāo)液配制

        準(zhǔn)確稱取萊克多巴胺的標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇配成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,-18 ℃冰箱中保存,有效期6個(gè)月;再分別移取適量的萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用甲醇逐級稀釋成適當(dāng)濃度的萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)工作液。

        1.4 樣品前處理

        準(zhǔn)確稱取2.00 g(±0.01 g)試樣,置于50 mL離心管中,加入8.0 mL 0.2 moL/L乙酸銨溶液(pH=5.2)和40 ?L β-葡萄糖醛苷酸酶/芳基硫酸酯酶(20 U/mL),加蓋? ? ?2 000 r/min渦旋振蕩8 min,37 ℃恒溫?fù)u床避光酶解18 h。酶解后放置至室溫,在酶解液中加入300 ?L高氯酸(將pH調(diào)至1.00),渦旋30 s,10 000 r/min低溫離心5 min,移上清液于另一離心管中。在殘?jiān)屑尤? mL 0.1 mol/L高氯酸溶液,渦旋30 s,10 000 r/min 低溫離心5 min,合并上清液。上清液中加入570 μL 5 mol/L的NaOH(將pH調(diào)至4.00),備用。

        MCX固相萃取柱分別依次用5 mL甲醇、5 mL水活化。取備用液全部過柱,再依次用? ?5 mL水、5 mL甲醇淋洗小柱,抽干。用5 mL 5%氨化甲醇洗脫,收集至15 mL塑料離心管。洗脫液在50 ℃下氮?dú)獯蹈?,用?fù)溶劑將濃縮液定容至1 mL,劇烈振蕩5 min,用1 mL針筒移取過0.22 μm濾膜,供液質(zhì)儀測定。

        2? 結(jié)果與討論

        2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

        按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部1025號公告-18-2008《動(dòng)物源食品中磺胺類藥物殘留檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》標(biāo)準(zhǔn)條件設(shè)置儀器參數(shù),配制一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液(0.25 μg/kg、? ?0.50 μg/kg、1.00 μg/kg、2.50 μg/kg、5.00 μg/kg),待儀器基線穩(wěn)定后,對系列標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液進(jìn)行測定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其相關(guān)系數(shù)為R2=0.999 93。

        2.2 檢出限測定

        使用空白牛肉樣品做基質(zhì),設(shè)置一個(gè)濃度C (0.25 μg/kg)的陽性樣,按照操作進(jìn)行前處理,之后上機(jī)測定,測得萊克多巴胺的信噪比為S/N=10.9,可計(jì)算檢出限(method detection limit,MDL)為0.068 8 μg/kg。計(jì)算公式如下:

        檢出限(MDL)(μg/kg) =3C/(S/N)

        2.3 方法精密度和回收率測定

        以空白牛肉樣品為基質(zhì),進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),加標(biāo)濃度為0.25 ?g/kg、0.50 ?g/kg、 2.50 ?g/kg。將加標(biāo)樣品和空白樣品按方法進(jìn)行前處理,上機(jī)測試,方法精密度和回收率結(jié)果分別見表1、表2所示。根據(jù)表1與表2中相對標(biāo)準(zhǔn)偏差和回收率結(jié)果可發(fā)現(xiàn),該方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差較低,且回收率表現(xiàn)較好,萊克多巴胺的回收率介于93.4%~100.1%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%~3.7%。該方法的檢出限較低、重復(fù)性較好,也能保持較為優(yōu)異的回收率,可用于萊克多巴胺的準(zhǔn)確定性、定量 檢測。

        3? 結(jié)論

        本研究提出了一種高效檢測萊克多巴胺的方法,優(yōu)化了相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)提取步驟,采用乙酸銨對酶解后的牛肉進(jìn)行提取,提取離心后過固相萃取柱進(jìn)行凈化,利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行測定。整個(gè)過程所進(jìn)行操作簡單,對前處理過程設(shè)備要求低,所需溶劑相對較少。同時(shí),結(jié)果表明,該方法的檢出限低,回收率較好,且重復(fù)效果好,有效地消除了基質(zhì)效應(yīng)的干擾,提高了萊克多巴胺的方法檢測的準(zhǔn)確性及精密度,有效地節(jié)約了檢測時(shí)間和人力,提升了檢測的效果。通過多種食品樣品的實(shí)測實(shí)驗(yàn)證明,本方法適用于畜禽肌肉組織中萊克多巴胺的快速定性、定量檢測。

        參考文獻(xiàn)

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        [8]動(dòng)物源性食品中β-受體激動(dòng)劑殘留檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法:GB/T 21313-2007[S].2007.

        [9] 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部1025號公告-18-2008, 動(dòng)物源性食品中β-受體激動(dòng)劑殘留檢測 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S/OL].http://www.moa.gov.cn/nybgb/2008/dwuq/201806/t20180609_6151576.htm.

        [10]動(dòng)物源性食品中多種β-受體激動(dòng)劑殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法:GB/T 22286-2008[S].2008.

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