梁美艷 鐘水橋

摘 要：本文建立一種利用Captiva EMR-Lipid固相萃取結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時分析魚肉中20種藥物殘留的方法。樣品經(jīng)0.1%冰醋酸-乙腈提取，Captiva EMR-Lipid固相萃取柱凈化，UPLC-MS/MS測定，采用電噴霧離子源，正離子掃描，動態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測模式檢測，外標(biāo)法定量。20種農(nóng)藥殘留在各自范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r均大于0.995，平均回收率在84.0%～116.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.2%～5.8%。該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏，適用于魚肉中多種農(nóng)藥殘留的檢測。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;農(nóng)藥;魚肉

Captiva EMR-Lipid Technology Combined with UPLC-MS/MS for Rapid Screening and Confirmation of Multiple Pesticide Residues in Fish

LIANG Meiyan， ZHONG Shuiqiao*

（Wuzhou Institute for Food and Drug Control， Wuzhou 543000， China）

Abstract： In this paper， a method was established for the simultaneous analysis of 20 drug residues in fish meat using Captiva EMR-Lipid solid-phase extraction combined with ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The samples were extracted with 0.1% formic acid-acetonitrile solution， then purified by solid-phase extraction column of Captiva EMR-Lipid， finally detected by UPLC-MS/MS with electrospray ionization source in positive ion scanning under dynamic multi-reaction monitoring mode， quantified by external method. The 20 kinds of pesticide residues have good linear relationship in their respective ranges with correlation coefficients more than 0.995. The average recoveries of 20 pesticides were 84.0%～116.4% with the relative standard deviations of 0.2%～5.8%. The method is fast， accurate and sensitive， and is suitable for the detection of various pesticide residues in fish.

Keywords： ultra performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry; pesticides; fish meat

農(nóng)藥殘留分析是對復(fù)雜混合物中痕量組分進(jìn)行分析的技術(shù)，具有微量操作精細(xì)、靈敏度高以及特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。目前能快速篩查與確證農(nóng)藥殘留的檢測方法主要有氣質(zhì)聯(lián)用色譜法[1]、液質(zhì)聯(lián)用色譜法[2-3]

和高分辨質(zhì)譜法[4-5]。這3種檢測方法抗干擾能力強(qiáng)，靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度都較高。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于蔬菜、水果、茶葉、肉類和中藥材等產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留檢測中，被檢測的農(nóng)藥種類也越來越多[6-8]。近年來，新發(fā)展起來的Captiva EMR-Lipid固相萃取柱，通過空間位阻和親水性的協(xié)同作用，對于C5及以上碳鏈化合物具有極強(qiáng)的選擇性吸附，可以在去除干擾脂質(zhì)的同時不吸附目標(biāo)物，因而具有良好的凈化效果。該凈化技術(shù)主要用于獸藥殘留檢測，應(yīng)用于肉類中農(nóng)藥殘留檢測研究較少[9-12]。本研究以Captiva EMR-Lipid為凈化手段，并用液相質(zhì)譜聯(lián)用儀對魚肉中20種農(nóng)藥殘留進(jìn)行了快速篩查和定量分析。該方法的凈化效果好、靈敏度高，能夠滿足魚肉中多種農(nóng)藥篩查確證工作的需要。

1 材料與方法

1.1 材料

魚肉，采購于當(dāng)?shù)爻小?/p>

1.2 試劑

乙腈（HPLC級），德國Merck公司;無水乙酸鈉，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;EMR-Lipid（3 mL/300 mg），安捷倫科技有限公司;氧化樂果、涕滅威亞砜、多菌靈、久效磷、涕滅威砜、滅多威、噻蟲嗪、殺蟲脒、敵百蟲、3-羥基克百威、噻蟲胺、吡蟲啉、樂果、氯噻啉、啶蟲脒、硫環(huán)磷、涕滅威、磷胺、苯線磷亞砜和西瑪津（純度>95.0%），德國Dr.Ehrenstorfer公司。

1.3 主要儀器設(shè)備

LC-1290/QQQ-6490液相質(zhì)譜聯(lián)用儀，Agilent technology;XA205DU電子分析天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司;BSA3202S電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司;T18 digital均質(zhì)器，德國IKA;AllegraX-15R高性能通用臺式離心機(jī)，美國貝克曼公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

①標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的配制。分別精密稱取20種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品適量，加入少量丙酮振蕩溶解后，用乙腈定容，配制成約1.0 mg·mL-1的20種農(nóng)藥單標(biāo)儲備液。②混合工作液的配制。準(zhǔn)確量取上述儲備液適量，乙腈逐級稀釋，制備成濃度為37～2 032 ng·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，4 ℃保存。

1.4.2 樣品前處理

稱取5 g試樣，精確至0.01 g，于50 mL離心管中，加入10 mL 0.2%甲酸乙腈，均質(zhì)5 min，加入2 g無水乙酸鈉、4 g無水硫酸鎂，振蕩2 min，8 000 r·min-1離心5 min，取上清液2 mL過EMR-Lipid凈化柱，收集洗脫液，再用2 mL乙腈淋洗，收集洗脫液，合并洗脫液，40 ℃氮吹至近干，用20%乙腈定容至2 mL，0.22 ?m濾膜過濾，供LC-MS/MS測定。

1.4.3 儀器條件

（1）色譜條件。色譜柱：Agilent SB-C18（2.1×100 mm，1.8 μm）;進(jìn)樣量：1 ?L;柱溫：35 ℃;流動相：0.2%甲酸水（含5 mmol甲酸銨）（A相）和乙腈（B相）;梯度洗脫程序：0～1.50 min，20% B;1.50～8.00 min，20%→90% B;8.00～10.00 min，90% B;后運(yùn)行時間：3 min;流速：0.30 mL·min-1。

（2）質(zhì)譜參數(shù)。電噴霧離子源（ESI）;動態(tài)多反應(yīng)檢測DMRM模式;碎裂電壓380 V。離子對參數(shù)見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍及定量限、檢出限

試驗(yàn)選取陰性魚肉作為空白基質(zhì)，分別稱取7份（每份5 g），按照樣品前處理方法進(jìn)行操作，氮吹近干后分別加入混合工作液10 ?L、20 ?L、40 ?L、80 ?L、160 ?L、200 ?L和400 ?L，20%乙腈定容至2 mL后進(jìn)行分析。結(jié)果表明，20種農(nóng)藥在各自范圍內(nèi)都具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r均大于0.995。記錄各待測組分色譜峰面積，以各組分的進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)（X），以各組分的峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行回歸分析，以10倍信噪比對應(yīng)的濃度作為方法定量限（S/N=10），以3倍信噪比對應(yīng)的濃度作為方法檢出限（S/N=3），各農(nóng)藥的LOD及LOQ結(jié)果見表2。

2.2 回收率及精密度

在魚肉空白樣品中添加約1倍、2倍、5倍LOQ的20種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“1.4.2”方法進(jìn)行前處理，每個濃度做3個平行樣，得到方法平均回收率及精密度結(jié)果見表2。20種農(nóng)藥殘留的平均回收率為84.0%～116.4%，RSD為0.2%～5.8%。

2.3 討論

2.3.1 色譜條件的優(yōu)化

試驗(yàn)對常用流動相甲醇-水、甲醇-0.2%甲酸水、甲醇-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸銨）、乙腈-水、乙腈-0.2%甲酸水和乙腈-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸銨）等進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)使用乙腈-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸銨）溶液體系時，各成分洗脫效果好、峰形對稱以及靈敏度明顯提高，故選擇乙腈-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸銨）溶液作為流動相進(jìn)行梯度洗脫。

2.3.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

由于DMRM模式可以智能化地分配離子掃描時間，并且能夠同時兼顧靈敏度與數(shù)據(jù)采集質(zhì)量，適用于高通量、多組分化合物的分析，本試驗(yàn)采用動態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測模式（DMRM）進(jìn)行檢測。

2.3.3 樣品提取方法優(yōu)化

樣品提取液用0.2%甲酸乙腈進(jìn)行均質(zhì)提取，因在酸性提取環(huán)境中有利于各農(nóng)藥成分的穩(wěn)定。試驗(yàn)分別考察了不同量上清液過EMR-Lipid凈化柱對結(jié)果的影響。稱取5 g試樣，精確至0.01 g，于50 mL離心管中，加入10 mL 0.2%甲酸乙腈，均質(zhì)5 min，加入2 g無水乙酸鈉、4 g無水硫酸鎂，振蕩2 min，8 000 r·min-1離心5 min，分別取上清液2 mL、5 mL過EMR-Lipid凈化柱，收集洗脫液，再用2 mL乙腈淋洗，收集洗脫液，合并洗脫液，40 ℃氮吹至近干，用20%乙腈分別定容至2 mL、5 mL。結(jié)果表明，2 mL提取液過柱后采用動態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測（DMRM）進(jìn)行檢測，各成分回收率穩(wěn)定且在允許范圍內(nèi)，而5 mL提取液過柱后部分成分的回收率達(dá)到150%以上，故選2 mL上清液過柱。

3 結(jié)論

本文采用Captiva EMR-Lipid為凈化手段，結(jié)合液相質(zhì)譜聯(lián)用儀對魚肉中20種農(nóng)藥殘留進(jìn)行了快速篩查和定量分析。結(jié)果表明，該方法不僅具有前處理簡單、操作方便和凈化除脂效果好等優(yōu)點(diǎn)，還具有分離效果好、分析快速、檢出限低、靈敏度和精密度高等特點(diǎn)，適用于對魚肉中20種農(nóng)藥殘留的檢測。

參考文獻(xiàn)

[1]司露露，梁楊琳，李湧，等.QuEChERS-氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定供港蔬菜中118種農(nóng)藥殘留[J].化學(xué)研究與應(yīng)用，2020，32（11）：2034-2043.

[2]蘭嵐，周恒，李雯婷，等.QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定葡萄中388種農(nóng)藥殘留[J].食品工業(yè)科技，2019，40（21）：256-267.

[3]張帆，張瑩，黃志強(qiáng)，等.多壁碳納米管固相萃取/超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定茶油中12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥[J].分析測試學(xué)報，2019，38（4）：411-416.

[4]孟志娟，孫文毅，趙麗敏，等.氣相色譜-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜快速篩查農(nóng)產(chǎn)品中70種農(nóng)藥殘留[J].分析化學(xué)，2019，47（8）：1227-1234.

[5]張海超，艾連峰，馬育松，等.在線凈化液相色譜-高分辨質(zhì)譜法快速篩查果蔬中212種農(nóng)藥殘留[J].分析測試學(xué)報，2018，37（2）：180-189.

[6]李凌云，許曉敏，林桓，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速檢測蔬菜中248種農(nóng)藥殘留[J].色譜，2016，34（9）：835-849.

[7]胡林林，郝海亮，石檜楨.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定茶葉中47種農(nóng)藥殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2020，11（6）：1833-1840.

[8]苗水，李雯婷，陳銘，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定三七中508種農(nóng)藥殘留[J].分析測試學(xué)報，2019，38（7）：761-774.

[9]王東鵬，葉 誠，李小莎.Captiva EMR-Lipid固相萃取結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定豬肉中氯霉素類藥物殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2021，12（19）：7660-7666.

[10]黃澤瑋，閔宇航，杜鋼，等.QuEChERS EMR-Lipid技術(shù)結(jié)合LC/MS/MS快速篩查與確證豬肉中55種獸藥殘留[J].食品工業(yè)科技，2019，40（11）：270-276.

[11]王飛，宓捷波，李淑靜，等.改良的QuEChERS樣本前處理/高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬肉中四環(huán)素類獸藥的殘留[J].分析測試學(xué)報，2017，36（2）：272-275.

[12]陳庚超，顏素娟.超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用測定咸魚中16種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留[J].糧食科技與經(jīng)濟(jì)，2019（2）：70-72.