費(fèi)多靈，柯進(jìn)晶

胃食管反流?。℅ERD）為胃內(nèi)容物反流入食管所造成的不適癥狀及并發(fā)癥的一類消化內(nèi)科疾病，臨床上較為常見(jiàn)。其發(fā)病為一個(gè)多因素的、長(zhǎng)期的發(fā)展過(guò)程，可能與生活環(huán)境、生活習(xí)慣、便秘及肥胖等多種因素有關(guān)。近年來(lái)越來(lái)越多的研究表明遺傳因素在GERD 的發(fā)病中存在重要作用，尋找導(dǎo)致該病發(fā)生和發(fā)展的因素對(duì)臨床診治具有重要意義[1]?；蚨鄳B(tài)性為影響疾病易感性的重要因素，在多種疾病的易感性中探討基因多態(tài)性具有顯著價(jià)值。目前已發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞因子、趨化因子等參與了GERD 的疾病過(guò)程，白細(xì)胞介素-1（IL-1 ）是較為典型的炎性介質(zhì)，可通過(guò)多種途徑調(diào)節(jié)胃酸分泌，研究顯示IL-1 的IL-1 -31、IL-1 -511 基因位點(diǎn)與GERD 存在密切關(guān)系[2]。同時(shí)，腸道菌群的變化也會(huì)改變腸道炎癥水平、免疫狀態(tài)，影響GERD的發(fā)生發(fā)展[3]。因此，本研究對(duì)IL-1 基因多態(tài)性與GERD 患者炎癥及腸道菌群的關(guān)系進(jìn)行了探究，以期為該病的臨床防治提供有效依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取浙江省岱山縣第一人民醫(yī)院2019 年1 月至2020 年1 月收治的GERD 患者60 例作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合GERD 的診斷標(biāo)準(zhǔn)，GERD 量表評(píng)分≥8 分[4-5]；（2）自愿參與本研究并簽署知情同意書，臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并消化性潰瘍、繼發(fā)性食管炎、食管手術(shù)后食管炎等相關(guān)食管炎；（2）其他因素所致食管病變；（3）近期服用促胃腸動(dòng)力藥、質(zhì)子泵抑制劑（PPI）等抑酸劑及胃黏膜保護(hù)劑等藥物；（4）合并影響本研究的其他因素。其中男34 例，女26 例；年齡26～58 歲，平均（42.4±3.7）歲。另選擇同期健康志愿者60 例作為對(duì)照組，其中男36 例，女24例；年齡22～60 歲，平均（42.5±3.8）歲。兩組一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 IL-1 -31 及IL-1 -511 基因多態(tài)性檢測(cè) 于入院當(dāng)日（健康志愿者于檢查日）清晨收集3 ml 空腹靜脈血，采用紅細(xì)胞裂解液-酚-氯仿提取法提取DNA，－20 ℃保存待測(cè)。聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）檢測(cè)IL-1 -31、IL-1 -511 基因多態(tài)性，引物由上海生工生物工程有限公司合成。IL-IL-1 -31 引物序列：上游：5’-AGAAGCTTCCACCAATACTC-3’；下游 ：5’-ACCACCTAGTTGTAAGGAAG-3’；IL-1 -511 引物序列：上游：5’-TGGCATTGATCTGGTTCATC-3’；下游：5’-GTTTAGGAATCTTCCCACTT-3’。PCR 反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35 個(gè)循環(huán)，再72 ℃延伸5min。2%瓊脂糖凝膠電泳觀測(cè)結(jié)果。PCR 產(chǎn)物由上海生工生物工程有限公司測(cè)序，結(jié)果返回后對(duì)相應(yīng)位點(diǎn)分型記錄。

1.2.2 血清炎癥因子水平檢測(cè) 于入院當(dāng)日（健康志愿者于檢查日）清晨收集3ml空腹靜脈血，3000 r/min 離心10 min 獲取血清，采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清炎癥因子IL-1、IL-4、IL-10 及腫瘤壞死因子-（TNF-）水平，試劑盒由賽默飛世爾科技公司提供。

1.2.3 腸道菌群數(shù)量測(cè)定 收集所有研究對(duì)象10 g 新鮮糞便，與90 ml 無(wú)菌稀釋液混合，10 倍稀釋后采用微量加樣法接種培養(yǎng)，對(duì)糞便樣本中大腸桿菌、腸球菌、乳酸菌、類桿菌、雙歧桿菌及梭菌數(shù)量進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)和鑒定。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用方差分析或t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清炎癥因子水平比較 研究組血清IL-1、IL-4 及TNF-水平均高于對(duì)照組（均P＜0.05）；兩組血清IL-10水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組血清炎癥因子水平比較 ng/L

2.2 兩組腸道菌群數(shù)量比較 研究組大腸桿菌、腸球菌數(shù)量高于對(duì)照組，乳酸菌、類桿菌及雙歧桿菌數(shù)量低于對(duì)照組（均P ＜0.05）；兩組梭菌數(shù)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組腸道菌群數(shù)量比較 個(gè)

2.3 兩組IL-1 基因多態(tài)性比較 研究組IL-1 -31 TT 基因型高于對(duì)照組，CC基因型低于對(duì)照組，T 等位基因頻率高于對(duì)照組（均P ＜0.05）；IL-1 -511 CC、CT基因型高于對(duì)照組，C等位基因頻率高于對(duì)照組（均P ＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 兩組IL-1 基因多態(tài)性比較 例（%）

2.4 GERD患者IL-1 -31、IL-1 -511 基因型與血清炎癥因子水平的相關(guān)性IL-1 -31 TT 基因型GERD 患者血清IL-1、IL-4 及TNF-水平均高于IL-1-31 CT 基因型、CC 基因型（均P ＜0.05）；IL-1 -511 CC 基因型GERD 患者血清IL-1、IL-4 及TNF-水平均高于IL-1 -511 CT 基因型、TT 基因型（均P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 GERD 患者IL-1 -31、IL-1 -511 不同基因型血清炎癥因子水平比較 ng/L

2.5 GERD患者IL-1 -31、IL-1 -511 基因型與腸道菌群數(shù)量的相關(guān)性 不同基因型GERD 患者腸道菌群大腸桿菌、乳酸菌、類桿菌及雙歧桿菌數(shù)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＜0.05）。見(jiàn)表5。

表5 GERD 患者IL-1 -31、IL-1 -511 不同基因型腸道菌群數(shù)量比較 個(gè)

3 討論

GERD 在臨床上較為常見(jiàn)，患者有典型的反酸、胃灼熱等表現(xiàn)，并伴有聲音嘶啞、哮喘、咽部異物感及慢性鼻炎等食管外癥狀，因而患者容易因食管外癥狀造成就診延誤或誤診。隨著疾病的發(fā)展加重容易形成Barrett’s 食管及食管癌，嚴(yán)重影響患者的身體健康及生活質(zhì)量。研究表明，GERD存在家族聚集性，提示遺傳因素在GERD 的發(fā)病過(guò)程中存在重要作用[6]。因此，研究GERD 發(fā)病過(guò)程中相關(guān)基因?qū)τ谠摬〉呐R床防治具有重要意義。

IL-1 主要包含IL-1、IL-1 及IL-1 RA，為免疫炎癥反應(yīng)中最關(guān)鍵的功能細(xì)胞因子，IL-1 參與調(diào)解胃黏膜上皮壁細(xì)胞功能，參與調(diào)解上皮壁細(xì)胞胃酸分泌的調(diào)節(jié)過(guò)程，多項(xiàng)研究證實(shí)在GERD 患者中存在IL-1 水平升高[7]。另有研究顯示，GERD 患者食管黏膜組織中IL-1 mRNA表達(dá)水平明顯高于正常黏膜組織[8]。本研究結(jié)果顯示，GERD 較健康志愿者IL-1、IL-4 及TNF-水平顯著升高，提示GERD 患者炎癥因子水平顯著升高。IL-1 在-31、-511 等位點(diǎn)C-T 堿基發(fā)生突變而產(chǎn)生的基因多態(tài)性與多種疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。本研究研究組IL-1-31 TT基因型顯著高于對(duì)照組，CC基因型顯著低于對(duì)照組，T 等位基因頻率顯著高于對(duì)照組；同時(shí)，IL-1 -511 CC、CT基因型顯著高于對(duì)照組，C 等位基因頻率顯著高于對(duì)照組。這提示IL-1 -31、IL-1 -511 基因多態(tài)性與GERD 的發(fā)病有著密切關(guān)系，IL-1 -31 TT 基因型和T等位基因、IL-1 -511 CC 基因型和C 等位基因?yàn)镚ERD 發(fā)生的重要遺傳因素。本研究IL-1 -31 TT 基因型GERD 患者血清IL-1、IL-4 及TNF-水平顯著高于IL-1 -31 CT 基因型和CC 基因型；IL-1-511 CC 基因型GERD 患者血清IL-1、IL-4 及TNF-水平顯著高于IL-1 -511 CT 基因型和TT 基因型。這提示IL-1-31、IL-1 -511 基因多態(tài)性與GERD 患者機(jī)體炎癥因子水平升高存在密切關(guān)系，IL-1 -31、IL-1 -511 位點(diǎn)堿基突變后，可增加IL-1 的分泌，IL-1 升高可提升胃體內(nèi)炎癥水平，破壞胃壁細(xì)胞導(dǎo)致胃酸分泌減弱[9-10]。

腸道菌群是影響消化道疾病發(fā)生的重要因素，腸道微生物不僅可影響腸道營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解、吸收，進(jìn)而影響機(jī)體代謝過(guò)程，還可影響機(jī)體炎癥、免疫狀態(tài)，影響消化道疾病的發(fā)生發(fā)展[11]。研究指出，消化道微生態(tài)改變參與了GERD 的病理過(guò)程[12]。本研究GERD 患者較健康對(duì)照組大腸桿菌、腸球菌數(shù)量顯著升高，乳酸菌、類桿菌及雙歧桿菌數(shù)量顯著降低；同時(shí)，IL-1 -31、IL-1 -511 位點(diǎn)堿基突變與GERD 患者腸道菌群大腸桿菌、乳酸菌、類桿菌、雙歧桿菌數(shù)量存在相關(guān)性。但本研究中GERD 患者各微生物菌群數(shù)量級(jí)差異不大，這可能與微量加樣法接種培養(yǎng)結(jié)果與患者腸道真實(shí)菌群數(shù)量存在一定差異有關(guān)，且本研究納入患者數(shù)量較少也可能導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)一定偏倚。