毛逸琪，劉 碩，李曉寧，寧云云，史露賓，李世寶，2△

1.徐州醫(yī)科大學醫(yī)學技術(shù)學院，江蘇徐州 221000；2.徐州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院檢驗科，江蘇徐州 221000

我國是食管癌高發(fā)國家，食管鱗狀細胞癌病例占比達90%以上[1-2]。食管癌常見病理類型為食管腺癌和食管鱗狀細胞癌。食管鱗狀細胞癌患者的總體5年生存率在15%～25%，但早期診斷其5年生存率為90%以上[3-4]。癌胚抗原(CEA)、糖類抗原199(CA199) 等可作為食管癌的診斷和預后標志物，但其靈敏度和特異度較低[5]，而內(nèi)窺鏡具有侵襲性等特點限制了其作為食管癌早期篩查的工具[6]。因此，臨床需求一種靈敏且易獲得的診斷標志物。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類非編碼RNA，長度大于200個核苷酸，不具有保守的閱讀框，因此沒有編碼蛋白質(zhì)的能力[7]。有研究證明，lncRNA參與調(diào)控多種生物過程，包括增殖、分化、發(fā)育、代謝改變和信號轉(zhuǎn)導等[8-9]。lncRNA與許多惡性腫瘤有密切關系[10-12]，SEMA3B-AS1作為一種lncRNA，被證實在多種癌癥中異常表達，包括賁門癌、肝細胞癌及食管癌等，且在食管癌組織與細胞中低表達[13-15]。本研究旨在通過分析食管鱗狀細胞癌與食管良性疾病中血清SEMA3B-AS1表達水平的差異，評估血清SEMA3B-AS1在食管鱗狀細胞癌的鑒別診斷價值。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2018年9月至2019年6月徐州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院入院確診的42例食管鱗狀細胞癌和31例食管良性疾病患者的血清標本。其中食管鱗狀細胞癌患者42例，男34例，女8例，年齡50～79歲，平均(66.5±7.1)歲。納入標準：(1)經(jīng)組織病理活檢證實為食管鱗狀細胞癌；(2)納入本研究前未經(jīng)手術(shù)、放療、化療等任何治療方式；(3)臨床病理資料完整。排除標準：(1)合并其他腫瘤；(2)患有嚴重心、肺、腎、神經(jīng)系統(tǒng)等疾病；(3)患有嚴重精神疾病。食管良性疾病患者包括食管良性腫瘤、食管炎、食管潰瘍患者共31例，男22例，女9例，年齡49～65歲，平均(58.2±6.9)歲，食管良性疾病患者納入本研究前未經(jīng)任何治療。本研究中所有患者均知情同意并簽署知情同意書，且本研究獲得徐州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2方法 RNA提取與實時熒光定量聚合酶鏈反應(qPCR)。將置于-80 ℃冰箱的血清標本溶解，移取200 μL血清標本于無核酶小心離心管中，采用Trizol Universal總RAN提取試劑按說明書步驟提取血清總RNA，測量吸光度。使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將2 μL總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，實驗條件為：42 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s。得到的cDNA標本放置于-20 ℃冰箱備用。使用ABI7500PCR儀進行qPCR檢測，反應體系：2 μL cDNA標本為模板，20 μL總反應體系。反應條件：95 ℃孵育10 min，95 ℃ 15 s，59 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共50個循環(huán)。該反應以β-actin為內(nèi)參基因，每個標本設立3個復孔。結(jié)果以循環(huán)閾值(Ct值)表示，SEMA3B-AS1的相對表達水平以2-ΔΔCt表示。SEMA3B-AS1的上游引物：5′-AAACCCAGAGCCGAAAACTGA-3′；SEMA3B-AS1的下游引物：5′-CTCAAGCCCTGGTATATTCACT-3′。β-actin的上游引物：5′-TCCTCTCCCAAGTCCACACA-3′；β-actin的下游引物：5′- GCACGAAGGCTCATCATTCA-3′。

1.3統(tǒng)計學處理 采用SPSS25.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。不呈正態(tài)分布的計量資料以M(P25,P75)表示，組間比較采用獨立樣本的非參數(shù)檢驗(Mann-WhitneyU秩和檢驗)。計數(shù)資料以例數(shù)和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。繪制受試者工作特征(ROC)曲線分析血清SEMA3B-AS1鑒別診斷食管鱗狀細胞癌與食管良性疾病的臨床價值，并計算曲線下面積、95%置信區(qū)間(CI)，取ROC曲線上的最大正確指數(shù)(靈敏度+特異度-1)為最佳臨界值，得到相應靈敏度與特異度。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1食管鱗狀細胞癌及食管良性疾病患者血清SEMA3B-AS1相對表達水平比較 食管鱗狀細胞癌患者血清SEMA3B-AS1相對表達水平為12.09(5.91,35.84)，明顯高于食管良性疾病患者血清SEMA3B-AS1相對表達水平[1.20(0.51,1.69)]，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2血清SEMA3B-AS1鑒別食管鱗狀細胞癌與食管良性疾病的效能 ROC曲線結(jié)果表示，血清SEMA3B-AS1可作為鑒別食管鱗狀細胞癌與食管良性疾病的良好指標。血清SEMA3B-AS1鑒別食管鱗狀細胞癌和食管良性疾病的曲線下面積為0.899(95%CI0.832～0.967，P<0.001)，靈敏度為76.47%，特異度為93.55%，見圖1。

圖1 血清SEMA3B-AS1相對表達水平鑒別食管鱗狀細胞癌與食管良性疾病的ROC曲線

2.3食管鱗狀細胞癌患者血清SEMA3B-AS1相對表達水平與臨床病理參數(shù)的關系 以血清SEMA3B-AS1相對表達水平的中位數(shù)(12.09)為分界，將食管鱗狀細胞癌患者分為高表達組(SEMA3B-AS1>12.09)23例和低表達組(SEMA3B-AS1≤12.09)19例。高表達組與低表達組腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。高表達組與低表達組年齡、性別、TNM分期、神經(jīng)侵犯、分化程度情況比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 食管鱗狀細胞癌血清SEMA3B-AS1相對表達水平與臨床病理參數(shù)的關系[n(%)]

續(xù)表1 食管鱗狀細胞癌血清SEMA3B-AS1相對表達水平與臨床病理參數(shù)的關系[n(%)]

3 討 論

lncRNA是近些年用于腫瘤早期診斷的新型標志物。有研究證明，lncRNA通過多種機制參與基因調(diào)控，包括潛在干擾DNA甲基化網(wǎng)絡、與miRNA的相互作用等[16]。有研究報道，lncRNA與腫瘤細胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、凋亡等生理活動密切相關[17-19]。

SEMA3B-AS1已被證實在多種生物學活動中起作用。ZHANG等[20]研究發(fā)現(xiàn),SEMA3B-AS1可明顯抑制人間充質(zhì)干細胞的增殖，同時減少成骨細胞分化，從而顯著改變成骨過程。ZHONG等[14]研究證實，SEMA3B-AS1表達水平在肝細胞癌組織中相較于非癌組織明顯下調(diào)；此外，miR-718可能介導lncRNA SEMA3B-AS1與PTEN之間的間接相互作用，提示了SEMA3B-AS1可能參與肝細胞癌的進程。GUO等[13]報道顯示，SEMA3B-AS1及SEMA3B、miR-6872-5p共同抑制賁門腺癌，表明3者可以充當腫瘤抑制因子，并可以作為抗腫瘤治療的潛在靶點。LI等[21]獲得了由SEMA3B-AS1及另外11種乳腺癌相關lncRNA組成的預后風險模型，且此模型被進一步驗證為乳腺癌患者的一種新的獨立預后因素。

目前有關食管鱗狀細胞癌SEMA3B-AS1表達水平與其臨床價值的報道較少。DONG等[15]研究發(fā)現(xiàn)，SEMA3B-AS1在食管癌細胞和食管鱗狀細胞癌組織中表達水平降低，且其表達水平與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關，且該研究進一步驗證了超甲基化抑制SEMA3B和SEMA3B-AS1的轉(zhuǎn)錄，促進食管鱗狀細胞癌的發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，食管鱗狀細胞癌患者血清SEMA3B-AS1相對表達水平高于食管良性疾病患者，且與其腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關。本研究結(jié)果顯示，血清SEMA3B-AS1鑒別食管鱗狀細胞癌和食管良性疾病的曲線下面積為0.899(95%CI0.832～0.967，P<0.001)，靈敏度為76.47%，特異度為93.55%。這些結(jié)果提示SEMA3B-AS1是一項潛在的鑒別食管鱗狀細胞癌與食管良性疾病患者的標志物。血清SEMA3B-AS1對食管鱗狀細胞癌的鑒別診斷具有較高的臨床價值。