劉晶晶，崔璐璐△，萬(wàn) 莉，程 珍

1.湖北省黃石市第五醫(yī)院心血管內(nèi)科，湖北黃石 435005；2.湖北省黃石市中醫(yī)醫(yī)院急診科，湖北黃石 435000

急性冠脈綜合征(ACS)是常見(jiàn)的心血管疾病，主要病理基礎(chǔ)為動(dòng)脈粥樣硬化，具有發(fā)病率高、并發(fā)癥多及病死率高的特點(diǎn)[1]。研究表明，經(jīng)皮冠脈介入術(shù)(PCI)在ACS治療中具有一定價(jià)值，能利用植入支架解除冠狀動(dòng)脈堵塞狀態(tài)，但即便如此，患者術(shù)后仍可能出現(xiàn)再發(fā)心肌梗死、嚴(yán)重心律失常、血運(yùn)重建等不良事件[2]。盡早評(píng)估ACS患者主要不良心血管事件(MACE)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)對(duì)改善患者預(yù)后至關(guān)重要。既往臨床主要通過(guò)影像學(xué)技術(shù)結(jié)合N-末端腦鈉肽前體(NT-proBNP)、心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTnI)等指標(biāo)對(duì)ACS病情進(jìn)行評(píng)估，雖有一定價(jià)值，但對(duì)MACE發(fā)生的預(yù)測(cè)作用非常有限[3]。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)微小核糖核酸(miRNA)與ACS患者的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及脂質(zhì)代謝紊亂存在關(guān)聯(lián)，部分miRNA在這類(lèi)患者中呈特異性表達(dá)[4]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提示缺血再灌注心律失常大鼠的心肌組織內(nèi)miR-122-5p表達(dá)上調(diào)，表明其可能參與了心肌損傷[5]。施冰等[6]發(fā)現(xiàn)miR-122-5p與NT-proBNP存在相關(guān)性，而既往研究顯示ACS患者的血漿NT-proBNP水平升高[7]，但關(guān)于miR-122-5p與ACS之間的關(guān)系尚未完全闡釋清楚，且未能明確其與老年ACS患者M(jìn)ACE發(fā)生的相關(guān)性?；诖?，本研究擬分析ACS患者miR-122-5p的表達(dá)水平及其與MACE的關(guān)系，旨在輔助ACS的診療及發(fā)生MACE風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年4月至2020年12月于黃石市第五醫(yī)院收治的老年ACS患者101例作為ACS組，包括不穩(wěn)定型心絞痛(UA)患者46例、急性心肌梗死(AMI)患者55例；選取同期收治的穩(wěn)定型冠心病(SCAD)患者86例作為SCAD組，體檢健康者80例作為對(duì)照組。本研究經(jīng)該院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，3組基線資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 三組基線資料比較

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)ACS組，符合《非ST段抬高型急性冠狀動(dòng)脈綜合征診斷和治療指南(2016)》[8]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診為ACS者；年齡≥60歲者；就診前2周內(nèi)未使用過(guò)影響心功能的藥物者。(2)SCAD組，符合《穩(wěn)定性冠心病診斷與治療指南》[9]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)者；年齡≥60歲者；就診前1周內(nèi)未使用過(guò)影響心功能的藥物者。(3)對(duì)照組：同期體檢的體檢健康者；年齡≥65歲者；體檢前2周內(nèi)未使用過(guò)影響心功能的藥物者；自愿簽署同意書(shū)者。排除標(biāo)準(zhǔn)：近2周內(nèi)有類(lèi)固醇、阿片類(lèi)等治療史者；近1個(gè)月內(nèi)有重大手術(shù)史者；惡性腫瘤者；就診時(shí)存在擴(kuò)張性心肌病、充血性心衰、病毒性心肌炎、心源性休克等疾病者；患自身免疫性疾病者；有急或慢性肝腎損傷者。

1.3儀器與試劑 反轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒、Trizol試劑均購(gòu)自美國(guó)賽默飛世爾科技公司；冷凍離心機(jī)(ST16R型)、超低溫冰箱(906-ULTS型)均購(gòu)自美國(guó)賽默飛世爾科技公司；PCR儀(9700型)購(gòu)自美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司。

1.4方法

1.4.1血清miR-122-5p檢測(cè) ACS與SCAD患者在就診時(shí)采集空腹肘靜脈血3 mL，體檢健康者在體檢當(dāng)日采血，離心20 min(3 500 r/min)，分離血清，置于-80 ℃冰箱待測(cè)。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)檢測(cè)血清miR-122-5p相對(duì)表達(dá)水平。首先經(jīng)Trizol試劑提取總RNA，檢測(cè)其純度及濃度，行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，合成cDNA，然后行qPCR擴(kuò)增。引物序列：miR-122-5p上、下游序列分別為5′-ACACTCCAGCTGGGTGGAGTGTGACAATGG-3′、5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′；以U6為內(nèi)參引物，上、下游序列分別為5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′、5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性15 s、60 ℃退火1 min、72 ℃延伸30 s，40個(gè)循環(huán)。以2-ΔΔCT計(jì)算血清miR-122-5p相對(duì)表達(dá)水平。

1.4.2臨床指標(biāo)檢測(cè) ACS患者就診時(shí)另外采集3 mL空腹外周靜脈血，離心20 min(3 500 r/min)，分離血漿，置于-80 ℃冰箱待測(cè)。經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血漿NT-proBNP、cTnI水平，試劑盒購(gòu)自江西江藍(lán)純生物試劑有限公司，根據(jù)說(shuō)明書(shū)操作。

1.4.3隨訪分析 隨訪時(shí)間為6個(gè)月，隨訪方式包括上門(mén)隨訪、門(mén)診隨訪、微信隨訪等，根據(jù)患者需求進(jìn)行，記錄患者行PCI術(shù)后6個(gè)月MACE的發(fā)生情況，包括心源性死亡、再次血運(yùn)重建、非致死性心肌梗死、心絞痛復(fù)發(fā)、充血性心衰。將發(fā)生MACE者納入預(yù)后不良組，將沒(méi)有發(fā)生MACE者納入預(yù)后良好組。

1.5評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) Gensini評(píng)分[10]：(1)病變部位評(píng)分，小分支計(jì)0.5分，右冠狀動(dòng)脈、左前降支遠(yuǎn)段、左回旋支中/遠(yuǎn)段均計(jì)1.0分，左前降支/回旋支近段計(jì)2.5分，左主干計(jì)5.0分，左前降支中段計(jì)1.5分。(2)狹窄程度評(píng)分，1%～<26%、26%～<51%、51%～<76%、76%～<91%、91%～<100%、100%分別計(jì)1、2、4、8、16、32分。每個(gè)冠狀動(dòng)脈狹窄評(píng)分系數(shù)與該病變分支評(píng)分系數(shù)之間的乘積即為最終該病變血管的具體評(píng)分，總分為各病變血管的分值之和，分值越高提示病變?cè)街亍?/p>

2 結(jié) 果

2.13組血清miR-122-5p表達(dá)水平比較 ACS組血清miR-122-5p相對(duì)表達(dá)水平為0.34±0.11，SCAD組為0.20±0.07，對(duì)照組為0.12±0.05，其中ACS組高于SCAD組、對(duì)照組，SCAD組高于對(duì)照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=164.076，P<0.001)。

2.2血清miR-122-5p表達(dá)水平對(duì)ACS、SCAD的鑒別價(jià)值分析 血清miR-122-5p表達(dá)鑒別ACS、SCAD的曲線下面積(AUC)為0.797(SE為0.034，P<0.001，95%CI0.729～0.864)，最佳界值為0.307，靈敏度為79.40%，特異度為80.00%，見(jiàn)圖1。

圖1 血清miR-122-5p表達(dá)水平鑒別ACS、SCAD的ROC曲線

2.3ACS患者血清miR-122-5p的表達(dá)水平與臨床特征的關(guān)系 根據(jù)ACS患者的血清miR-122-5p相對(duì)表達(dá)水平平均值進(jìn)行分組，其相對(duì)表達(dá)水平≥均值者納入高表達(dá)組(59例)，相對(duì)表達(dá)水平<均值者納入低表達(dá)組(42例)。結(jié)果提示高表達(dá)組多支病變、AMI占比分別為27.12%(16/59)、66.10%(39/59)，高于低表達(dá)組的4.76%(2/42)、38.10%(16/42)，且高表達(dá)組入院時(shí)Gensini評(píng)分及NT-proBNP、cTnI水平高于低表達(dá)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 ACS患者血清miR-122-5p的表達(dá)水平與臨床特征的關(guān)系(n或

續(xù)表2 ACS患者血清miR-122-5p的表達(dá)與臨床特征的關(guān)系(n或

2.4ACS患者的預(yù)后分析及血清miR-122-5p表達(dá)水平、疾病特征比較 在101例患者中，有77例預(yù)后良好，有24例預(yù)后不良，其中心源性死亡3例，再次血運(yùn)重建5例，非致死性心肌梗死5例，心絞痛復(fù)發(fā)8例，充血性心力衰竭3例。預(yù)后不良組血清miR-122-5p相對(duì)表達(dá)水平、Gensini評(píng)分及NT-proBNP、cTnI水平高于預(yù)后良好組，預(yù)后不良組多支病變、AMI占比分別為41.67%(10/24)、79.17%(19/24)，高于預(yù)后良好組的10.39%(8/77)、46.75%(36/77)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 不同預(yù)后ACS患者血清miR-122-5p表達(dá)水平、疾病特征比較或n)

2.5ACS患者M(jìn)ACE發(fā)生的多因素Logistic回歸分析 采用多因素Logistic回歸模型對(duì)相關(guān)變量行量化賦值，以miR-122-5p(賦值0為<0.34，1為≥0.34)、Gensini評(píng)分(賦值0為<57.69分，1為≥57.69分)、NT-proBNP(賦值0為<102.24 ng/L，1為≥102.24 ng/L)、cTnI(賦值0為<1.75 ng/mL，1為≥1.75 ng/mL)、疾病類(lèi)型(賦值0為UA，1為AMI)為自變量，以有無(wú)MACE為因變量Y(0為無(wú)，1為有)，結(jié)果提示miR-122-5p相對(duì)表達(dá)水平、Gensini評(píng)分、NT-proBNP水平、cTnI水平升高，以及多支病變、AMI是MACE發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 ACS患者M(jìn)ACE發(fā)生的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

ACS是一種動(dòng)脈硬化血栓性疾病，以老年患者居多，初期可見(jiàn)血管內(nèi)膜、內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷，可引起血小板聚集，進(jìn)一步損傷血管內(nèi)膜，增加血管壁通透性，促進(jìn)血管收縮，致內(nèi)皮下聚集大量膽固醇，引起炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，將膽固醇吞噬并形成泡沫細(xì)胞，促使動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成[11]。ACS病死率較高，MACE的發(fā)生是導(dǎo)致預(yù)后欠佳的重要因素，對(duì)患者生活質(zhì)量影響非常大，臨床需尋求可靠標(biāo)志物對(duì)冠心病進(jìn)行篩查，并預(yù)測(cè)預(yù)后，為提高患者生活質(zhì)量提供依據(jù)。研究表明，miRNA在心血管疾病中發(fā)揮了重要作用，它能對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化后血管生成、炎癥及血栓形成有調(diào)節(jié)作用，可與靶基因形成非常復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，精細(xì)化調(diào)控血小板活化、斑塊破裂等病理過(guò)程[12]。LIN等[13]發(fā)現(xiàn)通過(guò)抑制miR-122-5p的表達(dá)，能對(duì)心肌細(xì)胞抗凋亡機(jī)制進(jìn)行誘導(dǎo)，miR-122-5p過(guò)表達(dá)則能降低丹酚酸酯對(duì)心肌梗死的療效，這表明miR-122-5p可能與心肌梗死的藥物治療預(yù)后有關(guān)。然而，現(xiàn)階段臨床尚未明確miR-122-5p與ACS患者M(jìn)ACE之間的關(guān)系，仍需進(jìn)一步探討。

本研究通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)，ACS組血清miR-122-5p表達(dá)水平高于SCAD組與對(duì)照組，且其表達(dá)水平對(duì)ACS、SCAD具有一定鑒別價(jià)值。miR-122-5p是組織特異性較強(qiáng)的miRNA，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)miR-122-5p與腦缺血性疾病發(fā)生有關(guān)，其過(guò)表達(dá)可導(dǎo)致預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)增加[14]。HNNINEN等[15]研究提示miR-122-5p與心源性休克患者3個(gè)月的病死率有關(guān)，過(guò)表達(dá)的miR-122-5p能增加死亡風(fēng)險(xiǎn)，并且其表達(dá)與低灌注標(biāo)志物密切相關(guān)。POFI等[16]發(fā)現(xiàn)miR-122-5p過(guò)表達(dá)與糖尿病患者心肌病的發(fā)生有關(guān)，它可能通過(guò)調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶2影響細(xì)胞外基質(zhì)，增加心肌病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。miR-122-5p能通過(guò)對(duì)核轉(zhuǎn)錄因子kB的調(diào)節(jié)，在細(xì)胞凋亡、血栓形成、動(dòng)脈粥樣斑塊形成等過(guò)程中發(fā)揮作用，其表達(dá)上調(diào)能促進(jìn)心血管疾病進(jìn)展，這可能是其在這類(lèi)疾病中的作用機(jī)制[17]。這進(jìn)一步提示miR-122-5p過(guò)表達(dá)可能引起心功能損傷，在心血管疾病中具有重要作用。本研究結(jié)果顯示，老年ACS患者miR-122-5p表達(dá)水平與血管病變支數(shù)、疾病類(lèi)型及Gensini評(píng)分、NT-proBNP水平、cTnI水平有關(guān)。多支病變、AMI及Gensini評(píng)分、NT-proBNP水平、cTnI水平越高的ACS患者冠狀動(dòng)脈病變程度、心功能損傷程度更重，在ACS的冠狀動(dòng)脈病變進(jìn)展過(guò)程中可能有miR-122-5p的參與，過(guò)表達(dá)的miR-122-5p可能通過(guò)某種途徑加重心功能損傷，促進(jìn)心血管疾病進(jìn)展。

ACS患者經(jīng)PCI術(shù)治療后可能引起MACE的發(fā)生，對(duì)預(yù)后影響較大[18]。本研究結(jié)果提示預(yù)后不良組的血清miR-122-5p相對(duì)表達(dá)水平更高，且其相對(duì)表達(dá)水平升高是預(yù)后的危險(xiǎn)因素之一，表明miR-122-5p可能與ACS預(yù)后有關(guān)。LING等[19]研究發(fā)現(xiàn)UA、AMI患者的miR-122-5p表達(dá)水平較健康者均升高，且其表達(dá)水平越高，患者的冠狀動(dòng)脈病變狹窄程度越重。據(jù)此推測(cè)過(guò)表達(dá)的miR-122-5p可能會(huì)加重冠狀動(dòng)脈病變狹窄程度，促進(jìn)ACS進(jìn)展，從而影響預(yù)后。但也有研究提示ACS患者的miR-122-5p相對(duì)表達(dá)水平降低[20]，與本研究結(jié)論相悖，這可能與研究過(guò)程中涉及較多的混雜因素及納入病例參考對(duì)象不同有關(guān)，但該研究經(jīng)COX多因素分析，最終未提示miR-122-5p與心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)存在關(guān)聯(lián)，表明其在該研究中可能僅為混雜因素。而本研究則發(fā)現(xiàn)miR-122-5p在ACS患者血清中表達(dá)上調(diào)，且進(jìn)一步分析了其與ACS特征、預(yù)后的關(guān)系，能為臨床診療及預(yù)后預(yù)測(cè)提供參考價(jià)值。本研究還提示血管病變支數(shù)、疾病類(lèi)型及Gensini評(píng)分、NT-proBNP水平、cTnI水平也與ACS預(yù)后有關(guān)，這些均為常規(guī)因素，與既往結(jié)論基本符合[21-22]。

綜上所述，ACS患者的血清miR-122-5p相對(duì)表達(dá)水平升高，其表達(dá)水平升高會(huì)增加MACE的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。本研究局限性為隨訪觀察時(shí)間較短，未來(lái)還需延長(zhǎng)觀察時(shí)間，分析miR-122-5p與ACS患者遠(yuǎn)期MACE發(fā)生的關(guān)系。