俞建君，郝衛(wèi)強

(常州工程職業(yè)技術(shù)學院，江蘇 常州 213003)

布格替尼的化學名為5-氯-N2-[4-[(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基]-N4-[2-(二甲基亞膦酰)苯基]-2,4-嘧啶二胺(I)，為酪氨酸激酶抑制藥，美國FDA 于2017年4月28日批準阿瑞雅德(Ariad)公司的布格替尼片劑上市，用于對克唑替尼不耐受或用藥后疾病進展的患者治療間變性淋巴瘤激酶(ALK)陽性的轉(zhuǎn)移性非小細胞肺癌。本文擬采用高效液相色譜法測定布格替尼原料藥的含量。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

LC-20A高效液相色譜儀(日本島津，包括 DGU-20A 在線脫氣機、LC-20AD Pump 四元泵、CTO-20AC 柱溫箱、SPD-20A紫外檢測器、島津LabSolutions工作站及 20 μL 手動進樣系統(tǒng))；Venusil C18(5 μm，4.6200 mm)色譜柱(Agela Technologies Inc)；Millipore 純凈水發(fā)生器。

色譜純甲醇(布格替尼標準品)，北京中科質(zhì)檢生物技術(shù)有限公司，布格替尼樣品，自制。

1.2 色譜條件

流動相為磷酸二氫鉀(0.02 mol/L， pH由磷酸調(diào)節(jié)至4.50):甲醇=40:60，流速為1.0 mL/min，檢測波長為285 nm，柱溫為25 ℃，進樣體積為20 μL。

1.3 對照品溶液和樣品溶液

精確稱取0.10 g的布格替尼標準品至100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度。合成的樣品以同法配制成溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

將布格替尼標準品溶于甲醇中，以甲醇為參比，在200～350 nm范圍內(nèi)進行掃描，發(fā)現(xiàn)其在285 nm處有最大吸收，故選擇285 nm為布格替尼的檢測波長。

2.2 緩沖鹽pH的優(yōu)化

考察緩沖鹽pH 2.5～4.5 之間，樣品中布格替尼主峰與前后雜質(zhì)峰的分離情況。隨著 pH值提高，主峰的峰形得到改善，主峰及與前面雜質(zhì)峰的分離度提高。當緩沖鹽pH值為4.5時，分離效果最佳(見圖1)。圖2為布格替尼對照品譜圖。

圖1 布格替尼專屬性色譜圖Fig.1 Specificity chromatograms of Brigatinib (Peak identifications: 1-impurity; 2-Brigatinib)

圖2 布格替尼對照品色譜圖Fig.2 Chromatograms of Brigatinib reference standards

2.3 方法評價

2.3.1 線性范圍

從布格替尼對照品溶液中，分別移取1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、8.0 mL、10.0 mL至50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容。在本文實驗條件下進樣分析，以峰面積對濃度作圖，結(jié)果表明0.020～0.200 mg/mL范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)為0.9999，線性關(guān)系良好。

2.3.2 定量限和檢測限

將標準溶液多次稀釋后作為定量限測定溶液，以10倍信噪比(S/N=10) 的結(jié)果作為定量限。得定量限為0.4520 μg/mL。

將標準溶液多次稀釋后作為檢測限測定溶液，以3倍信噪比(S/N=3) 的結(jié)果作為檢出限。得檢出限為0.1479 μg/mL。

2.3.3 精密度和回收率

取標準系列中間濃度溶液，連續(xù)進樣6針，以峰面積的重復性驗證方法的精密度，計算其RSD為0.60%。向空白溶液中分別加入低、中、高3個水平的標準溶液進行加標回收率的測定。結(jié)果(見表1)表明，布格替尼加標平均回收率為98.93%。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗

把配制好的樣品溶液放置24 h后進樣分析，布格替尼含量的回收率100.4%，說明樣品溶液的穩(wěn)定性良好。峰面積重現(xiàn)性

2.3.5 耐用性試驗

配制一定濃度的布格替尼溶液，分別改變色譜條件中的pH、流速、柱溫和流動相比例，觀察布格替尼主峰與前一雜質(zhì)峰的分離度和主含量的回收率變化。結(jié)果表明，色譜條件的微小變化，對布格替尼主峰的分離度和回收率影響不大，見表2。

表1 布格替尼回收率試驗

表2 方法耐用性試驗數(shù)據(jù)

3 結(jié) 論

本文敘述了用高效液相色譜法測定ALK 抑制劑布格替尼含量的方法。本方法建立了布格替尼的色譜最佳分離條件，布格替尼含量測定的線性關(guān)系是良好的。精密度和準確度較高，樣品的預處理并不煩瑣。因此，本方法可以用來對ALK 抑制劑布格替尼含量進行快速而準確的測定。