陳小紅

（淮安市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇淮安 223000）

皂角刺［1-2］為豆科植物皂莢的干燥棘刺，具有消腫托毒，排膿，殺蟲之功效。常用于癰疽初起或膿成不潰，外治疥癬麻風(fēng)。皂角刺含黃酮甙、酚類、氨基酸等成分，可用于治療急性扁桃體炎，還具有一定的抗癌作用。皂角刺化學(xué)成分研究文獻(xiàn)報(bào)道較多［3-4］，其無機(jī)元素的分析文獻(xiàn)報(bào)道較少，僅有使用火焰原子吸收光譜法測(cè)定皂角刺中7種微量元素的方法［5］，而皂角刺中所含的多種無機(jī)元素與其療效密切相關(guān)，因此研究在皂角刺中多種無機(jī)元素的含量及分布情況至關(guān)重要。

目前同時(shí)測(cè)定多種元素的方法主要有電感耦合等離子體質(zhì)譜法、高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法等，其分析速度快、靈敏度高，但是共存或與無機(jī)元素結(jié)合的大量有機(jī)物質(zhì)會(huì)干擾測(cè)定，必須預(yù)先將有機(jī)物質(zhì)全部破壞掉，使待測(cè)元素變?yōu)闊o機(jī)物的形態(tài)，然后進(jìn)行測(cè)定，因此需對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行消解處理。筆者采用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）法［6-11］同時(shí)測(cè)定皂角刺中26種無機(jī)元素（Al、As、B、Ba、Ca、Cd、Co、Cr、Cu、Fe、K、Mg、Mn、Mo、Na、Ni、Pb、Sb、Se、Sn、Sr、Ti、Tl、V、Zn、Hg）的含量，采用硝酸作為消解溶液，此法消解時(shí)間短，操作安全簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為從無機(jī)學(xué)角度控制飲片質(zhì)量提供技術(shù)支持。同時(shí)運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)皂角刺進(jìn)行聚類分析和主成分分析，對(duì)于評(píng)價(jià)藥材優(yōu)良、控制藥材質(zhì)量有一定的幫助。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

電感耦合等離子體質(zhì)譜儀：NexION 350X型，美國PerkinElmer公司。

微波消解儀：Multiwave 3000型，奧地利Anton Paar公司。

超純水機(jī)：Milli-QR型，美國密理博公司。

電子分析天平：XSDU205型，感量為0.01 mg，瑞士梅特勒托利多公司。

Hg元素標(biāo)準(zhǔn)溶液：質(zhì)量濃度為1 000μg/mL，批號(hào)為195048-1，北京國家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心。

25種元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：包含Al、As、B、Ba、Ca、Cd、Co、Cr、Cu、Fe、K、Mg、Mn、Mo、Na、Ni、Pb、Sb、Se、Sn、Sr、Ti、Tl、V、Zn，質(zhì)量濃度均為100 μg/mL，批號(hào)為18D5095，北京國家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心。

Sc、Bi、Y、Rh混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液：質(zhì)量濃度均為100 μg/mL，批號(hào)為18D7287，北京國家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心。

Au元素標(biāo)準(zhǔn)溶液：質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL，批號(hào)為166079-1，北京國家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心。

硝酸：優(yōu)級(jí)純，美國默克公司。

皂角刺樣品：7批，具體信息列于表1。

表1 樣品信息

實(shí)驗(yàn)用水為自制超純水。

1.2 溶液的制備

25種混合元素標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：精密量取1.1中25種元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2%硝酸溶液稀釋成各元素質(zhì)量濃度均為1 μg/mL的25種元素混合標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。

Hg標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：取Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2%硝酸溶液稀釋成質(zhì)量濃度為1 μg/mL的Hg標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。

25種元素系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：精密量取25種元素混合標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液適量，加2%硝酸溶液分別稀釋成含25種元素質(zhì)量濃度分別為0、2、5、10、50、200、500 ng/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

Hg系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：精密量取Hg標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，加2%硝酸溶液稀釋成Hg元素質(zhì)量濃度為0、0.2、0.5、1、2、5 ng/mL的Hg系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

5種混合內(nèi)標(biāo)溶液：精密量取混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液和金元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2%硝酸溶液稀釋成含混合內(nèi)標(biāo)50 ng/mL、金元素200 ng/mL的混合溶液。

供試品溶液：取經(jīng)過60 ℃干燥2 h的皂角刺樣品，粉碎成粗粉，精密稱取0.5 g，置微波消解罐中，加硝酸6 mL，密封之后按照1.3設(shè)定微波消解程序進(jìn)行消解。消解后的樣品轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用適量超純水洗滌消解罐，洗液并入容量瓶中，用超純水稀釋至標(biāo)線，搖勻，即得供試品溶液。同時(shí)制備樣品空白溶液。

1.3 儀器工作參數(shù)

微波消解程序：20 min內(nèi)功率升至1 400 W，維持20 min。

ICP-MS儀器參數(shù)見表2。

表2 ICP-MS儀器參數(shù)

測(cè)定時(shí)選取同位素11B、23Na、44Ca、25Mg、27Al、39K、47Ti、51V、52Cr、55Mn、57Fe以45Sc為 內(nèi) 標(biāo) 元 素，59Co、60Ni、59Cu、66Zn、75As、82Se以89Y為 內(nèi) 標(biāo) 元 素，121Sb、88Sr、95Mo、118Sn、138Ba、111Cd以103Rh為內(nèi)標(biāo)元素，208Pb、202Hg、205Tl以209Bi為內(nèi)標(biāo)元素。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品處理方法的選擇

分析元素常用消解的方式有干法、濕法及微波消解法，干法基本不加試劑，需在高溫下灼燒，以達(dá)到破壞有機(jī)物質(zhì)的目的，濕法及微波消解法常用的溶劑有鹽酸、硝酸、硫酸、高氯酸等。

采用微波消解儀、馬弗爐兩種方式對(duì)樣品進(jìn)行消解，兩種方法測(cè)得各元素含量接近，但馬弗爐法所需溫度較高、時(shí)間較長(zhǎng)；微波消解法速度快、時(shí)間短，操作安全，故選擇微波消解法對(duì)樣品進(jìn)行前處理。

2.2 消解液的選擇

使用鹽酸、硝酸兩種酸分別對(duì)樣品進(jìn)行消解。由試驗(yàn)結(jié)果可知，用鹽酸消解的樣品溶液中各元素含量測(cè)定的重現(xiàn)性較差，部分元素的含量極低，可能與鹽酸中氯離子干擾有關(guān)；采用硝酸做消解液，進(jìn)樣測(cè)定得到的各元素含量基本保持一致，因此選用硝酸作為消解液。

在使用硝酸消解的前提下，參照藥典通則［12］規(guī)定，比較使用體積為5、6、8 mL時(shí)樣品消解情況。由試驗(yàn)結(jié)果可知，使用5 mL硝酸時(shí)樣品溶液略有渾濁；使用6 mL及8 mL時(shí)樣品溶液澄清，測(cè)定得到的各元素含量接近，本著降低成本、減少儀器損耗的原則，選用6 mL硝酸對(duì)樣品進(jìn)行消解。

2.3 微波消解程序的選擇

微波消解時(shí)使用兩種程序消解，第一種為10 min內(nèi)功率升至500 W，維持20 min，10 min到20 min功率升至1 200 W，維持20 min；第二種為20 min內(nèi)功率升至1400 W，維持20 min。由試驗(yàn)結(jié)果可知，所得溶液均澄清透明，所測(cè)元素含量結(jié)果相差不大，本著提高節(jié)省時(shí)間的原則，選擇第二種消解方法。

2.4 儀器干擾消除

為了消除質(zhì)譜干擾，選用質(zhì)量數(shù)相對(duì)接近的元素作為內(nèi)標(biāo)元素，對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行校正。金元素是測(cè)定汞元素時(shí)所需要使用的元素，因?yàn)楣卮嬖谟洃浶?yīng)，為減少儀器上殘留，加入一定量的金標(biāo)準(zhǔn)溶液，金與汞能形成穩(wěn)定的絡(luò)合物，這樣就能消除儀器對(duì)汞元素的記憶效應(yīng)，測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確，測(cè)定同時(shí)采用扣除空白和在線加入內(nèi)標(biāo)的方法消除干擾。儀器采用He碰撞模式能明顯消除對(duì)待測(cè)元素的干擾，調(diào)節(jié)載氣、輔助氣儀器工作的流量，可以減少元素在采樣錐處的富積，優(yōu)化后的條件見表2。

2.5 線性考察及檢定限與定量限

取25種混合元素系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及Hg系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按設(shè)定的參數(shù)測(cè)定，以各元素的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），各元素測(cè)量的經(jīng)內(nèi)標(biāo)校正的信號(hào)值作為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸，計(jì)算線性方程與相關(guān)系數(shù)，各元素線性方程及相關(guān)系數(shù)見表3。

取2%硝酸溶液按設(shè)定的方法連續(xù)進(jìn)樣10次，以測(cè)定結(jié)果3倍的標(biāo)準(zhǔn)偏差所對(duì)應(yīng)的濃度值作為各元素的檢出限，10倍標(biāo)準(zhǔn)偏差所對(duì)應(yīng)的濃度值作為各元素的定量限，結(jié)果見表3。

表3 26種元素線性關(guān)系考察結(jié)果及檢出限與定量限

結(jié)果表明各元素相關(guān)系數(shù)r為0.999 0～0.999 8，檢 測(cè) 限0.000 03～0.62 mg/kg，定 量 限0.000 1～2.07 mg/kg。

2.6 儀器精密度試驗(yàn)

取濃度為200 ng/mL的25種混合元素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及濃度為2 ng/mL的汞標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按設(shè)定的方法重復(fù)測(cè)定6次，記錄信號(hào)值，經(jīng)計(jì)算得到各元素測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.27%～4.87%，表明儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取1號(hào)樣品6份，按1.2項(xiàng)方法制備供試品溶液，按建立方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算各元素含量。經(jīng)計(jì)算得測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.12%～5.57%，表明方法重復(fù)性良好，符合分析要求。

2.8 加標(biāo)回收試驗(yàn)

精密稱取1號(hào)樣品6份，每份約0.5 g，分別精密加入一定量26種元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（25種元素加入量為2.5 μg，Hg元素加入量為0.05 μg），按1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按建立的方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加標(biāo)回收率，結(jié)果列于表4。由表4可知，26種元素的加標(biāo)回收率為95.08%～104.80%，測(cè)定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.33%～3.10%，表明此法準(zhǔn)確可靠。

表4 加樣回收實(shí)驗(yàn)(n=6)

續(xù)表4

續(xù)表4

續(xù)表4

3 質(zhì)量考察

3.1 樣品中26種元素測(cè)定

取上述7批皂角刺樣品，按1.2方法制備供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表5。由表5可以了解各元素在樣品中含量分布情況，特別是有害重金屬元素，對(duì)評(píng)價(jià)飲片質(zhì)量、臨床用藥提供一定指導(dǎo)作用。

表5 7批皂角刺中26種元素的質(zhì)量分?jǐn)?shù) mg/kg

3.2 主成分分析

對(duì)測(cè)得的7批皂角刺樣品中26種無機(jī)元素含量數(shù)據(jù)進(jìn)行考察，剔除未檢出的Se、Sn、Sb、Tl四種元素，剩余22中元素?cái)?shù)據(jù)通過SPSS 22.0軟件標(biāo)準(zhǔn)化后進(jìn)行主成分分析，根據(jù)特征值和方差貢獻(xiàn)率選擇4個(gè)主成分因子，見表6。

表6 4各主成分因子及特征值和貢獻(xiàn)率

結(jié)合碎石圖（見圖1）可直觀的看出前4個(gè)因子可基本反映出不同批次皂角刺的大體情況。

圖1 主成分因子碎石圖

初始因子載荷矩陣見表7，由表7可知，主成分1主要反映了Al、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Pb這10個(gè)成分的信息，主成分2主要反映了Ti、As、Mo、Ba、Hg這5個(gè)成分的信息，主成分3主要反映了Mg、K、Ca、Sr這4個(gè)成分的信息，結(jié)合載荷圖（見圖2），分布規(guī)律基本一致。

表7 初始因子載荷矩陣

圖2 因子載荷圖

3.3 飲片的排名

計(jì)算皂角刺4個(gè)主成分得分、總得分，以確定皂角刺的排列順序。使用SPSS 22.0軟件，由初始因子載荷計(jì)算出各個(gè)主成分的特征向量值，結(jié)果列于見表8。將7批皂角刺樣品22個(gè)元素?cái)?shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化，由標(biāo)準(zhǔn)化后數(shù)據(jù)和各主成分特征向量值計(jì)算出主成分因子的得分F1、F2、F3、F4，再根據(jù)各主成分得分及特征值λ，按照如下公式（1）計(jì)算出總的得分F，結(jié)果列于表9。

表8 4個(gè)主成分的特征向量值

表9 主成分因子得分及飲片排名

由表9可知，5號(hào)樣品排名第一，3號(hào)、6號(hào)接近，7號(hào)最差，從無機(jī)元素的角度，通過主成分分析，可以清楚地分別飲片質(zhì)量的等級(jí)層次。

幾批皂角刺有機(jī)元素測(cè)定中，Mg、Al、K、Ca、Fe含量豐富，這幾種元素參與人體重要生命活動(dòng)，與人類的健康密切相關(guān)。參考《中國藥典》2020年版飲片重金屬及有害元素檢查項(xiàng)下的限量規(guī)定，鉛不得過5 mg/kg，鎘不得過0.3 mg/kg，砷不得過2 mg/kg，汞不得過0.2 mg/kg，銅不得過20 mg/kg，結(jié)合表8、表9，1號(hào)、2號(hào)汞超出限度，3號(hào)、5號(hào)銅超出限度，可能與環(huán)境污染、藥物的過度使用有關(guān)，劇毒物Ti未檢出。

4 結(jié)語

建立了ICP-MS法［13-16］測(cè)定皂角刺元素的含量，通過主成分分析研究皂角刺的品質(zhì)等級(jí)，對(duì)研究皂角刺的功效及對(duì)人體的作用將有極大的幫助。